本发明专利技术公开了一种应用Triton X‑114和尿囊素去除重组蛋白质溶液中内毒素的方法，包括以下步骤：在100ml VP2重组蛋白质溶液中加入1ml Triton X‑114，充分混溶得到混合物A，将混合物A冰浴30min；混合物A在37℃条件下水浴放置10min，搅拌；25℃条件下，将搅拌均匀的混合物A在12000g下离心15min，移出上层水相；将用于去除内毒素的尿囊素直接加到上层水相中，得到混合物B，将混合物B在室温下震荡20min；25℃条件下，将震荡后的混合物B在5000g下离心5min，去除底层沉淀，保留上清溶液，上清液即为去除内毒素的VP2重组蛋白质溶液。本方法具有处理量大、处理周期短、生产成本低、去除内毒素彻底，可将内毒素含量控制在畜禽临床应用标准范围内的优点，并且符合规模化生产的需求。
【技术实现步骤摘要】
一种应用Triton X-114和尿囊素去除重组蛋白质溶液中 内毒素的方法
本专利技术属于兽用生物制品领域中的蛋白质纯化技术，特别涉及。
技术介绍
内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁上的一种成分叫脂多糖，主要由0-特异性链、核心 多糖、类脂A三部分组成，其主要毒性成分为类脂A。内毒素只有当细菌死亡溶解或用人工 方法破坏菌细胞后才释放出来。当含内毒素或被内毒素污染的生物制品进入畜、禽机体循 环系统后，达到一定浓度时，会引起畜、禽机体产生一系列变态反应，如高烧、休克等。 随着分子生物学技术的发展，重组蛋白生物制品逐渐被开发利用。由于大多数重 组蛋白质是利用大肠杆菌表达的，其属于革兰氏阴性菌，在纯化蛋白时需要对菌体进行破 壁，释放重组蛋白的同时，脂多糖也随之释放到缓冲液中，造成内毒素污染。 由于内毒素在强酸、强碱及高温下都极其稳定，且性质极不均一，传统的各种方法 如萃取、吸附及层析等只能去除部分内毒素，达不到畜禽临床应用的要求，很难找到一种有 效的去除重组蛋白质溶液中内毒素的方法。 目前报道的方法有Triton X-114雾点法，利用Triton X-114具有的两性特点进 行内毒素去除的方法，但是经过试验发现这种方法也只能将内毒素的含量从1000万EU/ml 降低至10万EU/ml左右，达不到畜禽临床应用的标准。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的一个目的是提出一种应用Triton X-114和尿囊素去除重组蛋 白质溶液中内毒素的方法，通过先添加Triton X-114,后添加尿囊素去除重组蛋白质溶液 中内毒素的方法，相比较单独应用Triton X-114,可使内毒素含量降低1000倍，很好的解 决了内毒素含量达不到畜禽临床应用标准的难题。 在一些说明性实施例中，一种应用Triton X-114和尿囊素去除重组蛋白质溶液中 内毒素的方法，包括以下步骤： 在100ml VP2重组蛋白质溶液中加入Triton x-1141ml，充分混溶后得到混合物 A，将所述混合物A冰浴30min ;将混合物A在37°C条件下水浴放置10min，搅拌；25°C条件 下，将搅拌均匀的所述混合物A在12000转/min下离心15min，移出上层水相；将用于去 除内毒素的尿囊素直接加到所述上层水相中，得到混合物B，将所述混合物B在室温下震荡 20min ;25°C条件下，将震荡后的所述混合物B在5000转/min下离心5min，去除底层沉淀， 保留上清溶液，所述上清液即为去除内毒素的VP2重组蛋白质溶液。 与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：本方法具有处理量大、处理周期短、生产 成本低、去除内毒素彻底、可将内毒素含量控制在畜禽临床应用标准范围内的优点，并且符 合规模化生产的需求。 为了上述以及相关的目的，一个或多个实施例包括后面将详细说明并在权利要求 中特别指出的特征。 【具体实施方式】 以下优选实施例，对本专利技术作详细描述，以使本领域的技术人员能够实践它们。 下面对本专利技术做详细描述。 在一些说明性实施例中，一种应用Triton X-114和尿囊素去除重组蛋白质溶液 中内毒素的方法，包括以下步骤：在100ml VP2重组蛋白质溶液中加入Triton X-1141ml， 充分混溶后得到混合物A，将所述混合物A冰浴30min ;将混合物A在37°C条件下水浴放置 IOmin,搅拌；25°C条件下，将搅拌均勻的所述混合物A在12000g下离心15min，移出上层水 相；将用于去除内毒素的尿囊素直接加到所述上层水相中，得到混合物B，将所述混合物B 在室温下震荡20min ;25°C条件下，将震荡后的所述混合物B在5000g下离心5min，去除底 层沉淀，保留上清溶液，所述上清液即为去除内毒素的VP2重组蛋白质溶液。 其中，尿囊素购自Sigma公司（P101415527) ;Triton X-114,购自索莱宝科技有限 公司。 在一些说明性实施例中，所述VP2重组蛋白质溶液由鸡传染性法氏囊病病毒VP2 通过基因工程技术获得。 在一些说明性实施例中，所述尿囊素添加量为5_50mg/ml。 在一些说明性实施例中，所述尿囊素添加量为5mg/ml、10mg/ml、30mg/ml、50mg/ ml 〇 在一些说明性实施例中，其特征在于：所述尿囊素为固态。 在一些说明性实施例中，其特征在于：所述TritonX-114为原液。 实施例1尿囊素添加量为10mg/ml 在100ml VP2重组蛋白质溶液中加入Triton X-1141ml，放置到磁力搅拌器上搅拌 均匀，得到混合物A，将所述混合物A冰浴30min ;将混合物A在37°C条件下水浴放置10min， 搅拌；25°C条件下，将搅拌均匀的所述混合物A在12000g下离心15min，移出上层水相；将 lOmg/ml用于去除内毒素的尿囊素直接加到所述上层水相中，得到混合物B，将所述混合物 B在室温下震荡20min ;25°C条件下，将震荡后的所述混合物B在5000g下离心5min，去除 底层沉淀，保留上清溶液，所述上清液即为去除内毒素的VP2重组蛋白质溶液。 其中，所用的玻璃仪器均用0. 5M NaOH溶液浸泡24小时，纯水洗涤3-5次后，于 250°C下烘烤两小时；离心机（3K15)购自Sigma公司。 实施例2尿囊素添加量为5mg/ml 在100ml VP2重组蛋白质溶液中加入Triton X-1141ml，放置到磁力搅拌器上搅拌 均匀，得到混合物A，将所述混合物A冰浴30min ;将混合物A在37°C条件下水浴放置10min， 搅拌；25°C条件下，将搅拌均匀的所述混合物A在12000g下离心15min，移出上层水相；将 5mg/ml用于去除内毒素的尿囊素直接加到所述上层水相中，得到混合物B，将所述混合物B 在室温下震荡20min ;25°C条件下，将震荡后的所述混合物B在5000g下离心5min，去除底 层沉淀，保留上清溶液，所述上清液即为去除内毒素的VP2重组蛋白质溶液。 实施例3尿囊素添加量为30mg/ml 在100ml VP2重组蛋白质溶液中加入Triton X-1141ml，放置到磁力搅拌器上搅拌 均匀，得到混合物A，将所述混合物A冰浴30min ;将混合物A在37°C条件下水浴放置lOmin， 搅拌；25°C条件下，将搅拌均匀的所述混合物A在12000g下离心15min，移出上层水相；将 30mg/ml用于去除内毒素的尿囊素直接加到所述上层水相中，得到混合物B，将所述混合物 B在室温下震荡20min ;25°C条件下，将震荡后的所述混合物B在5000g下离心5min，去除 底层沉淀，保留上清溶液，所述上清液即为去除内毒素的VP2重组蛋白质溶液。 实施例4尿囊素添加量为50mg/ml 在100ml VP2重组蛋白质溶液中加入Triton X-1141ml，放置到磁力搅拌器上搅拌 均匀，得到混合物A，将所述混合物A冰浴30min ;将混合物A在37°C条件下水浴放置lOmin， 搅拌；25°C条件下，将搅拌均匀的所述混合物A在12000g下离心15min，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种应用Triton X‑114和尿囊素去除重组蛋白质溶液中内毒素的方法，其特征在于：包括以下步骤：在100ml VP2重组蛋白质溶液中加入Triton X‑1141ml，充分混溶得到混合物A，将所述混合物A冰浴30min；将混合物A在37℃条件下水浴放置10min，搅拌；25℃条件下，将搅拌均匀的所述混合物A在12000g下离心15min，移出上层水相；将用于去除内毒素的尿囊素直接加到所述上层水相中，得到混合物B，将所述混合物B在室温下震荡20min；25℃条件下，将震荡后的所述混合物B在5000g下离心5min，去除底层沉淀，保留上清溶液，所述上清液即为去除内毒素的VP2重组蛋白质溶液。
【技术特征摘要】
1. 一种应用Triton X-114和尿囊素去除重组蛋白质溶液中内毒素的方法，其特征在 于：包括以下步骤： 在100ml VP2重组蛋白质溶液中加入Triton X-1141ml，充分混溶得到混合物A，将所 述混合物A冰浴30min ;将混合物A在37°C条件下水浴放置lOmin，搅拌；25°C条件下，将搅 拌均匀的所述混合物A在12000g下离心15min，移出上层水相；将用于去除内毒素的尿囊 素直接加到所述上层水相中，得到混合物B，将所述混合物B在室温下震荡20min ;25°C条件 下，将震荡后的所述混合物B在5000g下离心5min，...
【专利技术属性】
技术研发人员：李明义，单学强，刘阳，李晓林，张伦，冯晶晶，李佳棋，李朝阳，乔彦良，
申请(专利权)人：山东信得科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37
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