一种重组融合蛋白及其用途制造技术

本发明专利技术属于生物医药领域，涉及重组融合蛋白及其用途，具体涉及携带被插入到乙肝核心抗原蛋白颗粒或者截短片段内的乙肝病毒治疗性抗原表位的重组融合蛋白及其用途。该重组融合蛋白包含乙肝病毒HBV多种表位抗原及其他免疫刺激表位抗原和乙肝核心抗原病毒样颗粒或其截短片段制备成嵌合抗原，所述的多种抗原表位可以单表位或者多表位组合的形式插入到乙肝病毒核心抗原HBc或其截短片段中相同或者不同的位点，同时结合不同的佐剂，加强HBV病毒特异性的体液免疫和细胞免疫功能。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属生物医药领域，涉及重组融合蛋白及其用途，具体涉及携带被插入到乙肝核心抗原蛋白颗粒或者截短片段内的乙肝病毒治疗性抗原表位的重组融合蛋白及其用途。
技术介绍
据统计，截止2010年全国的乙肝表面抗原流行率为是7.18%，较以前的11%，下降趋势明显，表明目前采用的有关防控手段有效。由于人口基数庞大，中国仍约有9300万例乙肝病毒携带者，其中慢性乙肝患者约2000-3000万。有研究表明，乙肝病毒感染引起的慢性肝炎与肝衰竭、肝硬化和原发性肝癌密切相关，例如，肝癌患者中90%以上是由乙肝病毒感染引起的。研究表明，乙肝病毒对肝脏损害先表现为肝细胞炎症坏死，尔后发展成肝纤维化、肝硬化和肝细胞癌。每年近30万人死于与乙肝相关的肝硬化和肝癌等，是我国目前最为突出的一个公共卫生问题。因此乙型肝炎病毒感染防治仍是目前中国乃至全世界的科研人员研究的热点。 目前主流的乙肝治疗方法疗效较好，但各存有缺点，根据最新2010版的《慢性乙型肝炎防治指南》描述，慢性乙型肝炎治疗主要包括抗病毒、免疫调节、抗炎和抗氧化、抗纤维化和对症治疗，其中治疗慢性乙肝的关键是抗病毒治疗。目前抗病毒治疗主要采用干扰素和核苷(酸)类似物。干扰素包括普通干扰素和长效干扰素，如派罗欣和佩乐能等；核苷(酸)类似物如拉米夫定、阿德福韦酯、恩替卡韦和替比夫定(素比伏)。所述的干扰素疗程相对固定，HBeAg血清学转换率较高，疗效相对持久，不发生耐药；但不良反应较多，不适用于高血清转氨酶水平(如高于10倍以上正常值上限)的患者，以及失代偿期肝硬化患者[1-7];核苷(酸)类似物口服给药，抑制病毒作用强，不良反应少而轻微，可用于失代偿期肝硬化患者治疗，但疗程相对不固定，HBeAg血清学转换率低，须长期用药，停药后易复发且可能发生病情恶化，甚至出现危及生命的肝功能失代偿，易发生病毒耐药性变异。综上，目前关键的乙肝治疗药物尚无法清除感染者体内的HBV CCC-DNA。 乙肝治疗性疫苗是近年发展起来的免疫治疗新概念旨在打破机体的免疫耐受，提高机体特异性免疫应答，清除病原体或异常细胞，使疾病得以治愈。治疗性乙肝疫苗的应用针对慢性乙肝患者或HBV携带者，可由高纯度和高含量的抗原和免疫佐剂组成增强其免疫原性，并通过不同途径呈递乙肝抗原，打破机体的免疫耐受，有效诱导免疫应答，达到清除乙肝病毒的目的。乙肝治疗性疫苗的安全性、有效性已经获得初步验证，目前全球范围内已经有多个乙肝治疗性疫苗正处于临床试验阶段，我国的某乙肝治疗性蛋白疫苗和DNA疫苗已被SFDA批准，如复旦大学闻玉梅院士和北京生物制品研究所赵铠院士等合作研发的抗原抗体复合物治疗性乙型肝炎疫苗(乙克，简称YIC或YK)，已经进入临床3期，有望成为全球第一个上市的乙肝治疗性疫苗；第三军医大学吴玉章教授领衔的乙肝病毒多肽乙肝治疗性疫苗也已经进入2期临床。这表明乙肝治疗性疫苗的安全性、有效性已经获得初步临床验证，虽然还需要后期长期和大样本人群的检验。 本申请的专利技术人在目前乙肝治疗性疫苗的构成及相关研究的基础上，拟提供一种携带乙肝病毒治疗性抗原表位的重组融合蛋白；进一步提供多样表位/HBc组成重组嵌合疫苗。 与本专利技术相关的现有技术有: [1]Ren S.， Yu H.B., Zhang H.W., e t al， Polymorphisms ofinterferon-1nducible genes OAS associated withinterferon-a treatment responsein chronic HBV infect1n ， Antivir Res 2011， 89: 232-237 [2]Alberti A., Caporaso N.,HBV therapy: Guidelines and open issues.DigestLiver Dis 2011; 43: S57-S63 [3]Iavarone M., Colombo M.,HBV-related HCCj clinical issues and therapy，Diges Liver Dis 2011; 43:S32_S39 [4]Yang Y.F., Zhao I，Xia H.M., et al, Long-term efficacy of interferonalpha therapy on hepatitis B viralreplicat1n in patients with chronichepatitis B: A meta-analysis.Antivir Res 2010， 85: 61-365 [5]Clercq E.D， In search of a selective therapy of viral infect1ns.Antivir Res 2010， 85: 19-24 [6]Liaw Y.F.，Xie Q.，Han K.H.，et, al.Shorter durat1n and lower dose ofpeg-1nterferon alfa_2A therapyresults in infer1r HBeAgseroconvers1n rate eescompared with the durat1n and dose of 48 weeks and 180microG: NEPTUNE study(abstract).Hepatology 2010; 52:429A.[7]Rijckborst V., Hansen B.E., Cakaloglu Y., et al.Early on-treatmentpredict1n of response to peginterferon alfa_2a for HBeAg-negative chronic hepatitis B using HBsAgand HBV DNA levels.Hepatology 2010; 52:454.[8]Eugene R.Schiffj Samuel S.L，et al, Long-Term Treatment With EntecavirInduces Reversal of AdvancedFibrosis or Cirrhosis in Patients With ChronicHepatitis B.ClinGastroenterolHepat 2011，9: 274-276.el [9]Jurrien G.P., Vincent R，Milan J.Sj et al, Kinetics of hepatitis Bsurface antigen differ between treatmentwith peginterferon and entecavir.JHepatol 2011， 54:449-454 [10]Vincent W.S., Grace L H.，Karen K.Lj et al, Entecavir treatment inpatients with severe acute exacerbat1n of chronic hepati本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组融合蛋白，其特征在于，所述的重组融合蛋白包括乙肝核心抗原HBcAg或其截短片段，以及由下列的一个或者多个连接而成的肽段：n个B细胞，Th细胞刺激表位和CTL细胞表位（n≥1）；i个柔性氨基酸组成的连接短肽序列（i≥0）。

【技术特征摘要】
1.一种重组融合蛋白，其特征在于，所述的重组融合蛋白包括乙肝核心抗原HBcAg或其截短片段，以及由下列的一个或者多个连接而成的肽段:n个B细胞，Th细胞刺激表位和CTL细胞表位(n ^ I) ；i个柔性氨基酸组成的连接短肽序列(i彡O)。2.根据权利要求1所述的重组融合蛋白，其特征在于:所述的B细胞表位是HBVPre-S2来源的第14-24氨基酸序列DPRVRGLYFPA及其变异序列或HBs抗原上的a决定簇CTKPTDGNCT及其变异序列；Th细胞刺激表位是破伤风类毒素来源的第830-843氨基酸序列QYIKANSKFIGITE及其变异序列或通用Th细胞表位PADRE及其变异序列；CTL细胞表位是HBV核心抗原(HBcAg)上的第18-27氨基酸序列PLGFFPDH及其变异序列。3.根据权利要求1所述的重组融合蛋白，其特征在于:所述的柔性连接短肽序列是AAA, SSS, GGG, GGGS, GGGGSGGGG, GS⑶EGG 中的一种或者几种。4.根据权利要求1所述的重组融合蛋白，其特征在于:所述的乙肝核心抗原蛋白或其片段是乙肝核心抗原全长蛋白(HBcAg，183AA)，...

【专利技术属性】
技术研发人员：史训龙，周珮，鞠佃文，周伟，黄海，冯美卿，朱海燕，叶丽，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：上海;31