一种具有治疗或预防HPV病毒的疫苗组合物及其应用制造技术

本发明专利技术涉及疫苗组合物及其在药物中的用途。尤其涉及由包被HPV L1蛋白的纳微球制成的疫苗组合物或疫苗制剂及其在治疗或预防HPV病毒药物中的应用。具体而言，本发明专利技术针对HPV L1抗原蛋白，纳微球粒径大小及其组合、纳微球材料、纳微球对抗原装载方式对其免疫应答的影响，设计制备粒径均一、不同粒径的PLGA、PLA，PLGA/PC纳微球，以其包埋或吸附HPV L1抗原蛋白，制备成疫苗组合物或疫苗制剂，研究其对体内免疫应答强度和水平的影响，开发高效的HPV L1蛋白疫苗组合物。

【技术实现步骤摘要】
-种具有治疗或预防HPV病毒的疫苗组合物及其应用
本专利技术涉及疫苗组合物及其在药物中的用途。尤其涉及由包被或吸附HPV Ll蛋 白的纳微球制成的疫苗组合物或疫苗制剂及其在治疗或预防HPV病毒药物中的应用。 技术背景 人乳头瘤病毒（Human papillomaviruses, HPV)是无囊膜的双链DNA病毒，主要由 病毒外壳和基因组DNA组成（Bernard，Burk et al.2011)。HPV病毒外壳是由360个Ll蛋 白（形成72个五聚体）和至多72个L2蛋白构成的二十面体结构，直径55-60nm(Howley and Lowy2007)。病毒外壳蛋白具有自组装特性，在体外LI蛋白单独或与L2蛋白共同自 组装形成类病毒样颗粒（Virus-like Particle，VLP) (Chen，Garcea et al. 2000, Finnen， Erickson et al. 2003，Buck，Cheng et al. 2008，Wang and Roden 2013)。目前的 HPV 疫 苗都是以VLP作为靶抗原，已有两种基于HPV LlVLP预防性疫苗上市（Jansen and Shaw 2004, Howley and Lowy 2007, Buonaguro, Tomesello et al. 2009, Harper 2009, Frazer, Leggatt et al. 2011, Hariri,Dunne et al. 2011, Malagon,Drolet et al. 2012,Lehtinen and Dillner 2013, Shaw 2013)。2006年6月8日，美国食品与药品管理局（FDA)正式批 准美国Merck公司（即默沙东公司）生产的Gardasil HPV预防性疫苗上市；它是由酿酒 酵母表达并纯化的HPV16/18/6/11L1VLP四价宫颈癌预防性疫苗，以无定形羟基磷酸铝铝 硫酸盐（amorphous aluminum Hydroxyphosphatesulfate，AAHS)为佐剂，被批准用于预防 6?26岁女孩和妇女HPV16、18、6、11型感染所引起的宫颈癌、癌前病变和生殖器疣，这是 FDA 通过的世界上第一个肿瘤疫苗（Villa，Costa et al. 2005, Villa，Ault et al. 2006， Bryan 2007，Olsson，Villa et al. 2007，Goldstone and Vuocolo 2012)。随后英国葛兰 素史克（GSK)公司生产的商品名为Cervarix的HPV预防性疫苗也成功上市，它是由来源于 昆虫表达系统的HPV16/18L1VLP二价宫颈癌预防性疫苗，采用AS04佐剂（氢氧化铝复合 MPL)(Paavonen, Jenkins et al. 2007, Garcon, Morel et al. 2011, Kreimer, Gonzalez et al. 2011，Szarewski 2012)。临床实验证明，上述两种预防性疫苗均具有良好的耐受性，且 无严重不良反应（Paavonen，Jenkins et al. 2007, Reisinger，Block et al. 2007, Perez， Lazcano-Ponce et al. 2008, Verstraeten, Descamps et al. 2008, Paavonen, Naud et al. 2009,Garcon,Morel et al. 2011,Herrero,Wacholder et al. 2011,Kreimer,Gonzalez et al. 2011,Seemann and Dodet 2011,Goldstone and Vuocolo 2012,Lehtinen,Paavonen et al. 2012, Szarewski, Poppe et al. 2012)。但这两种预防性疫苗价格昂贵，且需要低温 保存，极大限制了在发展中国家和落后地区的使用，因此开发一种低成本的高效价HPV疫 苗就显得尤为重要（Jansen and Shaw 2004，Buonaguro，Tornesello et al. 2009，Campo and Roden 2010,Frazer,Leggatt et al. 2011,Hariri,Dunne et al. 2011,Lehtinen and Dillner 2013, Shaw 2013)。研究表明，以HPV LI五聚体蛋白免疫实验动物后可以诱导产 生保护性的免疫应答（Rose，White et al. 1998，Yuan，Estes et al. 2001，Ohlschlager， Osen et al. 2003，Senger，Schadlich et al. 2010, Wu，Gersch et al. 2011)，而基于原核 生物E coli的表达技术可以大大降低HPV疫苗的生产成本。在中国专利技术专利02129070.9 《乳头瘤病毒衣壳蛋白的原核制备和应用》中提供HPV 16L1五聚体的空间三维结构，及利用 大肠杆菌大量表达和制备人乳头瘤病毒衣壳蛋白Ll的技术方法。 铝佐剂是目前应用最为广泛的一类佐剂，有着80多年的应用历史和数百亿人次 的使用记录，也是长期以来一度是被美国食品和药品监督管理局（FDA)批准用于人类疫 苗的唯一佐剂（Glenny，Pope et al. 1926，Gupta and Siber 1995，Gupta 1998，Baylor， Egan et al. 2002, Clements and Griffiths 2002, Lindblad 2004, Lindblad 2004)。但其 在HPV LI蛋白抗原的应用中存在一些不足。铝盐佐剂仅在注射部位形成贮库效应（Gupta, Chang et al. 1996, Hem 2002, Verdier, Burnett et al. 2005, Hem and Hogenesch 2007, Noe, Green et al. 2010)，通过炎症反应吸引树突状细胞（DC) (Morefield, Sokolovska et al. 2005, Kool, Soullie et al. 2008, Sharp, Ruane et al. 2009, Flach, Ng et al. 2011, Ghimire，Benson et al. 2012)、巨噬细胞（Μφ) (Hamilton，Byrne et al. 2000，Jordan, Mills et al. 2004，Rimaniol，Gras et al. 2004，Rimaniol，Gras et al. 2007)等抗原呈 递细胞（antigen-presenting cell, APC)，这些细胞通过吞噬作用摄取抗原并经NLRP3炎 性小体激活免疫应答（De Gregorio，Tritto et al.2008，Dostert，Petrilli et al.2008， Eis本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种疫苗组合物，包含与佐剂组合的抗原，抗原与佐剂的比例为10‑80μg/mg，所述抗原包含HPV L1蛋白，所述佐剂组合物包括聚乳酸‑聚乙醇酸共聚物(PLGA)或聚乳酸(PLA)。

【技术特征摘要】
2013.08.08 CN 201310343768.41. 一种疫苗组合物，包含与佐剂组合的抗原，抗原与佐剂的比例为10-80 y g/mg，所 述抗原包含HPV L1蛋白，所述佐剂组合物包括聚乳酸-聚乙醇酸共聚物（PLGA)或聚乳酸 (PLA)。2. 如权利要求1的疫苗组合物，其中所述的HPV L1蛋白包埋在PLGA中或吸附在PLGA 表面，均以粒径分布在l〇〇nm?100 iim之间的纳微球形式存在。3. 如权利要求2所述的疫苗组合物，其中所述的纳微球在每一个粒径范围内的粒径分 散系数范围为0.005?0.2。4. 如权利要求3的疫苗组合物，其中所述的纳微球0-90%分布在100-100011111、1-1011111 或10-100 li m任一范围内粒径或其组合之间。5. 如权利要求4的疫苗组合物，其中所述的纳微球0-90%分布在200-90011111、2-911111 或20-90 ii m任一粒径或其组合之间。6. 如权利要求5的疫苗组合物，其中所述的纳微球0-90%分布在400-70011111、4-711111 或40-70 ii m任一粒径或其组合之间。7. 如权利要求4的疫苗组合物，其中所述的纳微球10-90 %分布在100-1000nm、 90-10%分布在 1-10 iim。8. 如权利要求7的疫苗组合物，其中所述的纳微球10-90%分布在300-80011111、90-10% 分布在3-8 ii m。9. 如权利要求8的疫苗组合物，其中所述的纳微球10-90%分布在500-600nm、90-10% 分布在5_6 y m。10. 如权利要求4的疫苗组合物，其中所述的纳微球10-90%分布在1-10 iim、90-10% 分布在10-100 ym。11. 如权利要求10的疫苗组合物，其中所述的纳微球10-90%分布在3-8 iim、90-10% 分布在30-80 ii m。12. 如权利要求11的疫苗组合物，其中所述的纳微球10-90%分布在5-6 iim、90-10% 分布在50-60 y m。13. 如权利要求4的疫苗组合物，其中所述的纳微球10-90 %分布在100-1000nm、 90-10%分布在 10-100 ii m。14. 如权利要求13的疫苗组合物，其中所述的纳微球10-90 %分布在300-800nm、 90-10 % 分布在 30-80 ii m。15. 如权利要求14的疫苗组合物，其中所述的纳微球10-90 %分布在500-600nm、 90-10%分布在50-60 ii m。如权利要求4至15任一所述的的疫苗组合物，其中所述佐剂中 进一步包含如下免疫增强组分脂类物质：卵磷脂、硬脂胺、甘油磷脂中一种或几种的组合， 其中脂类物质与PLGA或PLA的比例为1-99 : 99-1。16. 如权利要求15所述疫苗组合物，其中所述佐剂中进一步包含小分子免疫佐剂： CpG、MPLA、咪喹莫特、Polyl :C等中一种或几种的组合，其中小分子免疫佐剂与PLGA或PLA 的比例为10-100 u g/mg。17. 如权利要求14或15的疫苗组合物，其中HPV L1蛋白是指HPV全长、截短或重组的 L1形成的VLP、五聚体或多聚体。18. 如权利要求17所述疫苗组合物，其中HPV L1蛋白是指6、11、16、18、26、30、31、33、 34、35、39、45,51、52、53、56、58、59、66、67、68、69、70、72、73 或 82、85、97 型 HPV 中一种和 / 或几种的组合。19. 一种疫苗制剂，其特征在于该疫苗制剂由18所述的疫苗组合物与HPV L1蛋白及药 ...

【专利技术属性】
技术研发人员：王连艳，刘永江，贾成成，马光辉，陈健平，潘勇昭，银飞，王雅君，
申请(专利权)人：中国科学院过程工程研究所，北京康乐卫士生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11