施马伦贝格病毒(SBV)疫苗、其制备方法及用途技术

本发明专利技术涉及用于预防和治疗反刍动物传染病的疫苗及药物领域。本发明专利技术特别涉及用灭活的施马伦贝格病毒(SBV)作为疫苗或药物，用来预防或治疗SBV诱发的病毒血症、传播及临床症状、特别是新生反刍动物如牛、绵羊和山羊的畸形。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】施马伦贝格病毒（SBV)疫苗、其制备方法及用途 序列表 本申请包含已经以ASCII格式通过EFS-Web提交的序列表，其完整内容通过援引 并入本申请中。所述ASCII拷贝命名为01-2825-PCT-SEQ. txt，大小为33696字节。 专利技术背景
本专利技术属于用于预防和治疗传染病的疫苗和药物领域。特别地，本专利技术涉及用灭 活的病毒作为疫苗或药物来预防或治疗病毒血症、其传播和临床症状，特别是施马伦贝格 病毒（Schmallenberg virus, SBV)诱发的新生反刍动物如牛、绵羊和山羊的畸形。
技术介绍
2011年11月在欧洲发现一种新的正布尼亚病毒（orthobunyavirus)施马伦贝格 病毒（SBV)。首次检测之后，绵羊、牛和山羊的SBV报告病例在一些欧洲国家急剧积累，积 累了数千例PCR阳性的畸形羊羔和牛犊（1，2)。该病毒在弗里德里希洛弗勒研究所（FLI) 通过宏基因组学在有奶量下降和发热的牛的样品中检测到。调查的样本采集自施马伦贝 格市（德国北莱茵-威斯特法伦州）附近的一个农场，因此该病毒命名为施马伦贝格病毒 (SBV)。SBV是布尼亚病毒科（Bunyaviridae)中正布尼亚病毒属（Orthobunyavirus)的成 员。它与所谓的辛波血清群病毒（Simbuserogroup virus)有关（1)。 正布尼亚病毒具有一个分段的负链RNA基因组，并且主要是由蠓虫和蚊子等昆虫 媒介传播。正布尼亚病毒基因组中的三个片段（S、M和L)允许基因重组（reassortment)， 其自然发生并导致具有新生物学性质的病毒的出现（3)。最大的L片段编码RNA依赖性RNA 聚合酶。M片段编码病毒表面糖蛋白Gn与Gc，其负责细胞融合、病毒附着和诱导中和抗体。 小片段S编码也参与补体结合的核衣壳N(4)。正布尼亚病毒之间的关系过去常常仅通过血 清学交叉反应性来确定（5)。在DNA测序的时代，通过部分基因组序列（N基因的全部和Gc 基因的部分）的比较，已经额外地评估系统发生学（6)。因此，可用的公开全长基因组的基 因组序列信息不多。因而难以进行深入的系统发生学分析。总之，SBV的详细和可靠的系 统分类无法进行。初步调查显示，M片段和L片段的序列与部分AKAV和艾诺病毒（AINOV) 序列具有相似性。N基因与沙门达病毒（Shamonda virus，SHAV)的相关性最密切（1)。 SBV像赤羽病毒（Akabane virus, AKAV) -样，能在妊娠的易感阶段中越过怀孕 母牛和羊的胎盘屏障，感染胚胎并引起致命的先天性缺陷（2)。根据原型病毒命名的辛波 血清群是正布尼亚病毒属中最大的血清群，包含至少25种病毒，其中医学上重要的病毒如 赤羽病毒、奥罗普切病毒（Oropouche virus)、萨苏伯里病毒（Sathuperi virus)或道格拉 斯病毒（Douglas virus)，其中大部分可引起新生反刍动物的畸形，而且人类也可能会受 至IJ影响。例如，赤羽病毒导致反刍动物的先天性缺陷并在亚洲、大洋洲和非洲传播，而奥罗 普切病毒引起奥罗普切热在南美洲人群中的大流行，这是一种类似于登革热的人畜共患疾 病。萨苏伯里病毒的名字被借用来命名萨苏伯里血清群，道格拉斯病毒和SBV也属于该血 清群。 SBV是第一种在欧洲检测到的辛波血清群的正布尼亚病毒。该病毒似乎是通过节 肢动物媒介传播。艨（biting midge)可能在传播中发挥重要的作用。据目前所知，反刍动 物易于感染SBV。即使发病，成年动物可能发病轻微。然而，经胎盘感染时常发生，并且可 导致羔羊、儿童和牛犊的严重的脊柱先天性畸形（脊柱后凸、前凸、脊柱侧弯以及斜颈）与 头卢页先天畸形（大头畸形、短颈），以及各种大脑畸形（脑积水（hydracephaly)、脑穿通畸 形、小脑发育不全以及脑干发育不全）和脊髓畸形。感染在欧洲西北部的大部分地区迅速 蔓延。比利时、德国、法国、意大利、卢森堡、荷兰、西班牙和英国至今都受到影响。 因此，由于当前没有可用的疫苗，SBV严重地威胁欧洲的反刍类家畜。 所以，迫切需要实现快速诱导中和抗体的疫苗和药物来对施马伦贝格病毒感染进 行预防和治疗。
技术实现思路
通过说明书和权利要求中体现的实施方案来解决上述技术问题。 因此，根据权利要求实施本专利技术的不同方面。 在一个方面，本专利技术提供含有一种或多种施马伦贝格病毒（SBV)抗原的免疫原性 组合物，其中所述免疫原性组合物优选包含SBV。 因此，优选地，本专利技术组合物含有SBV作为一种或多种SBV抗原，或者优选地所述 一种或多种SBV抗原分别为SBV。因此，本专利技术的免疫原性组合物特别是包含施马伦贝格病 毒（SBV)的免疫原性组合物。 本文所用的术语抗原特别是指能够引发免疫应答的任意分子、部分或实体。所 述免疫应答包括细胞和/或体液免疫应答。取决于组合物的预期功能，其可以包含一种或 多种抗原。 在另一个优选方面，本专利技术的免疫原性组合物包含的SBV抗原或SBV是灭活的。 因此，根据一个方面，本专利技术的免疫原性组合物优选为包含灭活的施马伦贝格病 毒（SBV)的免疫原性组合物。 本文所用的术语灭活意思是将抗原施用到哺乳动物宿主时不会引起疾病，或者 在宿主细胞中不会复制。 本专利技术也提供一种包含SBV或SBV抗原的免疫原性组合物，其中SBV包含： ?小（S)RNA片段，其具有这样的序列，所述序列与同SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO:7 的核酸序列具有至少97. 8%、优选至少99%的序列相同性的核酸序列反向互补， ?中等（M)RNA片段，其具有这样的序列，所述序列与同SEQ ID N0:2的核酸序列具 有至少82. 2%的序列相同性的核酸序列反向互补，和/或 ?大（L)RNA片段，其具有这样的序列，所述序列与同SEQ ID NO:3的核酸序列具有 至少93 %的序列相同性的核酸序列反向互补。 优选地，所述SBV包含所述小（S) RNA片段、所述中等（M) RNA片段以及所述大（L) RNA片段。 根据另一个方面，所述SBV或者所述SBV抗原可通过灭活SBV或SBV抗原获得，其 中所述SBV包含： ?小（S)RNA片段，其具有这样的序列，所述序列与同SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO:7 的核酸序列具有至少97. 8%、优选至少99%的序列相同性的核酸序列反向互补， ?中等（M)RNA片段，其具有这样的序列，所述序列与同SEQ ID N0:2的核酸序列具 有至少82. 2%的序列相同性的核酸序列反向互补，和/或 ?大（L)RNA片段，其具有这样的序列，所述序列与同SEQ ID NO:3的核酸序列具有 至少93 %的序列相同性的核酸序列反向互补。 序列表的所有序列按5' -3'的方向输入。序列SEQ ID NO : 1-3和SEQ ID NO :7编 码具有正极性的cDNA(+链）。术语反向互补意思是该序列反向平行于参考序列。 优选地，所述SBV包含所述小（S) RNA片段、所述中等（M) RNA片段以及所述大（L) RNA片段。 应当理本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种免疫原性组合物，其包含施马伦贝格病毒(SBV)的一种或多种抗原。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.06.01 EP 12170631.1;2013.03.05 EP 13157875.91. 一种免疫原性组合物，其包含施马伦贝格病毒（SBV)的一种或多种抗原。2. 如权利要求1所述的免疫原性组合物，其中所述免疫原性组合物包含SBV。3. 如权利要求1所述的免疫原性组合物，其中所述SBV的抗原或所述SBV是灭活的。4. 如权利要求1所述的免疫原性组合物，其中所述SBV包含： -(a)小（S)RNA片段，其具有这样的序列，所述序列与同SEQ ID N0:1或SEQ ID N0:7 的核酸序列具有至少97. 8%的序列相同性的核酸序列反向互补； -(b)中等（M)RNA片段，其具有这样的序列，所述序列与同SEQ ID N0:2的核酸序列具 有至少82. 2%的序列相同性的核酸序列反向互补； -(c)大（L)RNA片段，其具有这样的序列，所述序列与同SEQ ID N0:3的核酸序列具有 至少93%的序列相同性的核酸序列反向互补；或者 -(d)它们的组合。5. 如权利要求1所述的免疫原性组合物，其中所述SBV可通过灭活包含以下的SBV获 得： -(a)小（S)RNA片段，其具有这样的序列，所述序列与同SEQ ID N0:1或SEQ ID N0:7 的核酸序列具有至少97. 8%的序列相同性的核酸序列反向互补； -(b)中等（M)RNA片段，其具有这样的序列，所述序列与同SEQ ID N0:2的核酸序列具 有至少82. 2%的序列相同性的核酸序列反向互补； -(c)大（L)RNA片段，其具有这样的序列，所述序列与同SEQ ID N0:3的核酸序列具有 至少93%的序列相同性的核酸序列反向互补；或者 -(d)它们的组合。6. 如权利要求1所述的免疫原性组合物，其中所述SBV包含： -(a)S RNA片段，特征在于所述S RNA片段具有这样的序列，所述序列与SEQ ID N0:4 或SEQ ID NO:8具有至少97. 8%的序列相同性； _(b)M RNA片段，特征在于所述M RNA片段具有这样的序列，所述序列与SEQ ID N0:5 具有至少82. 2%的序列相同性； _(c)L RNA片段，特征在于所述L RNA片段具有这样的序列，所述序列与SEQ ID N0:6 具有至少93%的序列相同性；或者 -(d)它们的组合。7. 如权利要求3所述的免疫原性组合物，其中SBV通过热处理或使用病毒灭活剂来灭 活。8. 如权利要求7所述的免疫原性组合物，其中病毒灭活剂是氮丙啶化合物。9. 如权利要求8所述的免疫原性组合物，其中所述氮丙啶化合物是二乙烯亚胺（BEI)。10. 如权利要求2所述的免疫原性组合物，其包含的SBV的量相当于每剂量至少约 105TCID50/mL的病毒滴度。11. 如权利要求2所述的免疫原性组合物，其中所述SBV具有每毫升至少约106SBV颗 粒的预灭活滴度。12. 如权利要求1所述的免疫原性组合物，其进一步含有一种或多种药学上可接受的 载体或赋形剂。13. 如权利要求12所述的免疫原性组合物，其中所述一种或多种药学上可接受的载体 或赋形剂选自溶剂、分散介质、佐剂、稳定剂、稀释剂、防腐剂、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂 以及吸附延缓剂。14. 如权利要求1所述的免疫原性组合物，进一步包含氢氧化铝、皂苷或它们的组合。15. -种用于治疗或预防SBV的疫苗组合物，其包含权利要求1所述的免疫原性组合 物。16. -种用于预防或减轻SBV诱发的病毒血症或畸形的疫苗组合物，其包含权利要求1 所述的免疫原性组合物。17. -种用于预防或减少SBV传播的疫苗组合物，其包含权利要求1所述的免疫原性组 合物。18. -种SBV制备方法，其包括步骤： -(a)用SBV感染细胞； -(b)培养被感染细胞；以及 -(c)收获所述细胞产生的SBV。19. 如权利要求18所述的SBV制备方法，其中所述SBV在昆虫细胞和哺乳动物细胞之 间交替传代，并且其中所述方法进一步包括步骤： (a) 用SBV感染昆虫细胞； (b) 培养步骤（a)的被感染细胞； (c) 收获步骤（b)中所述细胞产生的SBV ; (d) 使用步骤（c)中收获的病毒颗粒感染哺乳动物细胞； (e) 培养步骤⑷的被感染细胞；以及 (f) 收获步骤（e)中所述细胞产生的SBV。20. 如权利要求19所述的SBV制备方法，其中所述方法进一步包括步骤： (d) 用SBV感染哺乳动物细胞； (e) 培养步骤（d)的被感染细胞； (f) 收获步骤（e)中所述细胞产生的SBV ; (g) 使用步骤（f)中收获的病毒颗粒感染昆虫细胞； (h) 培养步骤（g)的被感染细胞；以及 (i) 收获步骤（h)中所述细胞产生的SBV。21. 如权利要求18所述的方法，其包括步骤： (a) 用SBV感染昆虫细胞； (b) 培养步骤（a)的被感染细胞； (c) 收获步骤（b)中所述细胞产生的SBV ; (d) 使用步骤（c)中收获的SBV感染哺乳动物细胞； (e) 培养步骤（d)的被感染细胞； (f) 收获步骤（e)中所述细胞产生的SBV ; (g) 使用步骤⑴中收获的SBV感染昆虫细胞； (h) 培养步骤（g)的被感染细胞；以及 (i) 收获步骤（h)中所述细胞产生的SBV。22. 如权利要求21所述的方法，其还包括步骤： (j) 使用步骤（i)中收获的SBV感染哺乳动物细胞； (k) 培养步骤（j)的被感染细胞；以及 (l) 收获步骤（k)中所述细胞产生的SBV。23. 如权利要求30所述的方...

【专利技术属性】
技术研发人员：V·尼科林，K·施塔德勒，A·利舍夫斯基，A·布里克斯，J·P·克尼特尔，K·H·特普费尔，
申请(专利权)人：勃林格殷格翰动物保健有限公司，
类型：发明
国别省市：德国;DE