一种清肝片的定性定量检测方法技术

本发明专利技术公开了一种清肝片的定性定量检测方法，改进了原有清肝片中茵陈的定性鉴定方法，增加了：（1）采用显微鉴定法鉴别清肝片中板蓝根；（2）采用薄层色谱法，以靛玉红为对照，鉴别清肝片中含有板蓝根；（3）采用高效液相色谱法测定茵陈中绿原酸和甘草中甘草酸的含量。与现有技术相比，本发明专利技术方法，既增加了定性鉴别方法又增加了有效成份的含量测定方法，本发明专利技术方法精密度高，重现性好，回收率高，测量结果准确，提高了清肝片的质量可控性和稳定性，确保了人们用药的安全性和有效性。本发明专利技术的清肝片的定性定量检测方法，既可以用于控制清肝片的质量，又可以用来控制相同处方的其他剂型如胶囊、颗粒等剂型的质量。

【技术实现步骤摘要】
一种清肝片的定性定量检测方法
本专利技术属于中药
，具体涉及一种清肝片的质量控制方法。
技术介绍
清肝片由板蓝根、茵陈、甘草组成，具有清热解毒，除湿利胆的功效，可用于感冒发热，咽喉肿痛，腮腺炎，湿热黄疸等病症。该产品的质量标准收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第3册，标准编号WS3-B-0626-91，该标准中仅有茵陈和甘草的定性鉴别方法，没有任何定量检测方法，不利于控制清肝片的产品质量。国家中成药标准汇编内科肝胆分册中收载了清肝片，该标准中有茵陈、甘草的定性鉴别方法和甘草酸的含量测定方法，但是对君药板蓝根既没有进行定性鉴别也没有定量研究，且仅有甘草酸1个有效成份的含量测定。时珍国医国药2007年第18卷第1期《清肝片的质量标准研究》记载了清肝片的质量控制方法，对板蓝根、茵陈、甘草进行了定性鉴别研究，对甘草酸进行了含量测定，但没有对原粉入药的板蓝根进行显微鉴别，板蓝根与茵陈是分开进行鉴别，且仅有1个有效成份的含量测定。现有质量标准不能有效的控制清肝片的质量，从而将影响该产品的生产和质量保证及其临床疗效。
技术实现思路
本专利技术的目的在于：提供一种清肝片的定性定量检测方法。本专利技术针对现有控制标准的不足，对清肝片的质量控制方法进行了研究，改进了原有清肝片中茵陈的定性鉴定方法，增加了：（1）采用显微鉴定法鉴别清肝片中板蓝根；（2）采用薄层色谱法，以茵陈药材为对照药材，以靛玉红为对照，鉴别清肝片中含有茵陈和板蓝根；（3）采用高效液相色谱法测定茵陈中绿原酸和甘草中甘草酸的含量。本专利技术所提供的定性定量检测方法，提高了清肝片的质量控制标准，从而保证了该药的质量和临床疗效。本专利技术是这样实现的：一种清肝片的定性定量检测方法，包括甘草的薄层色谱法的定性鉴别，还包括①采用显微鉴定法鉴别清肝片中板蓝根；②采用薄层色谱法，以茵陈药材为对照药材，以靛玉红为对照，鉴别清肝片中含有茵陈和板蓝根；③采用高效液相色谱法测定茵陈中绿原酸和甘草中甘草酸的含量；所述定性定量检测方法包含如下步骤：（1）取本品，除去包衣，研细，加水饱和的正丁醇，时时振摇，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材0.3~1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各5~15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-乙醇-氨试液=4~6:1.5~2.5:0.5~1.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的斑点；（2）取本品粉末，用水合氯醛透化后装片，置显微镜下观察：网纹导管较多见，网孔较细短，导管直径7~51μm；木纤维多成束或单个散在，直径14~20μm，微木化，纹孔及孔沟明显；（3）取本品，除去包衣，研细，加乙醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇使溶解，作为供试品溶液。另取茵陈对照药材1~3g，同法制成茵陈对照药材溶液。再取靛玉红对照品，加乙醇制成溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述三种溶液各5~15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-丙酮=5~9:0.2~0.7:1.5~3.5为展开剂，展开，取出，晾干，置日光下检视，供试品色谱中，在与靛玉红对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以5％氢氧化钾溶液，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与茵陈对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；（4）甘草酸含量测定：照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥD)测定；色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.01~0.03mol/L磷酸溶液(30~50:70~50)为流动相；流速为0.5~1.0mL/min；检测波长为250nm；柱温25~35℃；理论板数按甘草酸铵峰计算应不低于2000；对照品溶液的制备：取甘草酸单铵盐对照品适量，加70％乙醇制成每1ml含甘草酸铵40μg的溶液，即得（折合甘草酸为39.2μg）；供试品溶液的制备：取本品，除去包衣，研细，置具塞锥形瓶中，精密加入50~80%乙醇，称定重量，在功率250W，频率50kHz条件下超声处理，放冷，用50~80%乙醇补足减失的重量，摇匀，用滤膜滤过，取续滤液，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每片含甘草以甘草酸(C42H62O16)计，不得少于0.4mg；（5）绿原酸含量测定：照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥD)测定：色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.01~0.03mol/L磷酸溶液(5~15:95~85)为流动相；流速为0.5~1.0mL/min；检测波长为327nm；柱温25~35℃；理论板数按绿原酸峰计算应不低于5000；对照品溶液的制备取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，加70％乙醇制成每1ml含绿原酸0.01mg的溶液；即得；供试品溶液的制备：取本品，除去包衣，研细，置具塞锥形瓶中，精密加入50~80%乙醇，称定重量，在功率250W，频率50kHz条件下超声处理，放冷，用50~80%乙醇补足减失的重量，摇匀，用滤膜滤过，取续滤液，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每片含茵陈以绿原酸（C16H18O9）计，不得少于0.12mg。为更好的实现本专利技术，本专利技术清肝片的的定性定量检测方法，可进一步优化为：（1）取本品5~15片，除去包衣，研细，加水饱和的正丁醇5~15ml，放置0.5~1.5小时，时时振摇，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1~3ml溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材0.3~1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各5~15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-乙醇-氨试液=4~6:1.5~2.5:0.5~1.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的斑点；（2）取本品粉末，用水合氯醛透化后装片，置显微镜下观察：网纹导管较多见，网孔较细短，导管直径7~51μm；木纤维多成束或单个散在，直径14~20μm，微木化，纹孔及孔沟明显；（3）取本品5~15片，除去包衣，研细，加乙醇15~50ml，超声处理30~60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1~3ml使溶解，作为供试品溶液。另取茵陈对照药材1~3g，同法制成茵陈对照药材溶液。再取靛玉红对照品，加乙醇制成每1ml中含0.05~0.2mg的溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述三种溶液各5~15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-丙酮=5~9:0.2~0.7:1.5~3.5为展开剂，展开，取出，晾干，置日光下检视，供试品色谱中，在与靛玉红对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以5％氢氧化钾溶液，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种清肝片的定性定量检测方法，包括甘草的薄层色谱法的定性鉴别，其特征在于还包括①采用显微鉴定法鉴别清肝片中板蓝根；②采用薄层色谱法，以茵陈药材为对照药材，以靛玉红为对照，鉴别清肝片中含有茵陈和板蓝根；③采用高效液相色谱法测定茵陈中绿原酸和甘草中甘草酸的含量；所述定性定量检测方法包含如下步骤：（1）取本品，除去包衣，研细，加水饱和的正丁醇，时时振摇，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材0.3~1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液各5~15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇‑乙醇‑氨试液=4~6:1.5~2.5:0.5~1.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的斑点；（2）取本品粉末，用水合氯醛透化后装片，置显微镜下观察：网纹导管较多见，网孔较细短，导管直径7~51 μm；木纤维多成束或单个散在，直径14~20 μm，微木化，纹孔及孔沟明显；（3）取本品，除去包衣，研细，加乙醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇使溶解，作为供试品溶液；另取茵陈对照药材1~3g，同法制成茵陈对照药材溶液；再取靛玉红对照品，加乙醇制成溶液；照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述三种溶液各5~15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)‑乙酸乙酯‑丙酮=5~9:0.2~0.7:1.5~3.5为展开剂，展开，取出，晾干，置日光下检视，供试品色谱中，在与靛玉红对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以5％氢氧化钾溶液，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与茵陈对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；（4）甘草酸含量测定：  照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥD)测定； 色谱条件与系统适用性试验： 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈‑0.01~0.03mol/L磷酸溶液(30~50:70~50)为流动相；流速为0.5‑1.0mL/min；检测波长为250nm；柱温25~35℃；理论板数按甘草酸铵峰计算应不低于2000；          对照品溶液的制备：取甘草酸单铵盐对照品适量，加70％乙醇制成每1ml含甘草酸铵40μg的溶液，即得（折合甘草酸为39.2μg）；供试品溶液的制备：取本品，除去包衣，研细，置具塞锥形瓶中，精密加入50~80%乙醇，称定重量，在功率250W，频率50kHz条件下超声处理，放冷，用50~80%乙醇补足减失的重量，摇匀，用滤膜滤过，取续滤液，即得；         测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；      本品每片含甘草以甘草酸(C42H62O16)计，不得少于0.4mg； （5）绿原酸含量测定：  照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥD)测定：     色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈‑0.01~0.03mol/L磷酸溶液(5~15:95~85)为流动相；流速为0.5~1.0mL/min；检测波长为327nm；柱温25~35℃；理论板数按绿原酸峰计算应不低于5000；      对照品溶液的制备：取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，加70％乙醇制成每1ml含绿原酸0.01mg的溶液；即得；供试品溶液的制备：取本品，除去包衣，研细，置具塞锥形瓶中，精密加入50~80%乙醇，称定重量，在功率250W，频率50kHz条件下超声处理，放冷，用50~80%乙醇补足减失的重量，摇匀，用滤膜滤过，取续滤液，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；   本品每片含茵陈以绿原酸（C16H18O9）计，不得少于0.12mg。...

【技术特征摘要】
1.一种清肝片的定性定量检测方法，包括甘草的薄层色谱法的定性鉴别，其特征在于还包括①采用显微鉴定法鉴别清肝片中板蓝根；②采用薄层色谱法，以茵陈药材为对照药材，以靛玉红为对照，鉴别清肝片中含有茵陈和板蓝根；③采用高效液相色谱法测定茵陈中绿原酸和甘草中甘草酸的含量；所述定性定量检测方法包含如下步骤：(1)取本品，除去包衣，研细，加水饱和的正丁醇，时时振摇，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材0.3～1g，同法制成对照药材溶液；照中国药典2010年版一部附录ⅥB的薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5～15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-乙醇-氨试液＝4～6:1.5～2.5:0.5～1.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的斑点；(2)取本品粉末，用水合氯醛透化后装片，置显微镜下观察：网纹导管较多见，网孔较细短，导管直径7～51μm；木纤维多成束或单个散在，直径14～20μm，微木化，纹孔及孔沟明显；(3)取本品，除去包衣，研细，加乙醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇使溶解，作为供试品溶液；另取茵陈对照药材1～3g，同法制成茵陈对照药材溶液；再取靛玉红对照品，加乙醇制成溶液；照中国药典2010年版一部附录ⅥB的薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5～15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以沸程为60～90℃的石油醚-乙酸乙酯-丙酮＝5～9:0.2～0.7:1.5～3.5为展开剂，展开，取出，晾干，置日光下检视，供试品色谱中，在与靛玉红对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以5％氢氧化钾溶液，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与茵陈对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；(4)甘草酸含量测定：照中国药典2010年版一部附录ⅥD的高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.01～0.03mol/L磷酸溶液＝30～50:70～50为流动相；流速为0.5-1.0mL/min；检测波长为250nm；柱温25～35℃；理论板数按甘草酸铵峰计算应不低于2000；对照品溶液的制备：取甘草酸单铵盐对照品适量，加70％乙醇制成每1ml含甘草酸铵40μg的溶液，即得(折合甘草酸为39.2μg)；供试品溶液的制备：取本品，除去包衣，研细，置具塞锥形瓶中，精密加入50～80％乙醇，称定重量，在功率250W，频率50kHz条件下超声处理，放冷，用50～80％乙醇补足减失的重量，摇匀，用滤膜滤过，取续滤液，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每片含甘草以甘草酸(C42H62O16)计，不得少于0.4mg；(5)绿原酸含量测定：照中国药典2010年版一部附录ⅥD的高效液相色谱法测定：色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.01～0.03mol/L磷酸溶液＝5～15:95～85为流动相；流速为0.5～1.0mL/min；检测波长为327nm；柱温25～35℃；理论板数按绿原酸峰计算应不低于5000；对照品溶液的制备：取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，加70％乙醇制成每1ml含绿原酸0.01mg的溶液；即得；供试品溶液的制备：取本品，除去包衣，研细，置具塞锥形瓶中，精密加入50～80％乙醇，称定重量，在功率250W，频率50kHz条件下超声处理，放冷，用50～80％乙醇补足减失的重量，摇匀，用滤膜滤过，取续滤液，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每片含茵陈以绿原酸(C16H18O9)计，不得少于0.12mg。2.根据权利要求1所述清肝片的定性定量检测方法，其特征在于所述定性定量检测方法包含如下步骤：(1)取本品5～15片，除去包衣，研细，加水饱和的正丁醇5～15ml，放置0.5～1.5小时，时时振摇，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1～3ml溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材0.3～1g，同法制成对照药材溶液；照中国药典2010年版一部附录ⅥB的薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5～15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-乙醇-氨试液＝4～6:1.5～2.5:0.5～1.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的斑点；(2)取本品粉末，用水合氯醛透化后装片，置显微镜下观察：网纹导管较多见，网孔较细短，导管直径7～51μm；木纤维多成束或单个散在，直径14～20μm，微木化，纹孔及孔沟明显；(3)取本品5～15片，除去包衣，研细，加乙醇15～50ml，超声处理30～60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1～3ml使溶解，作为供试品溶液；另取茵陈对照药材1～3g，同法制成茵陈对照药材溶液；再取靛玉红对照品，加乙醇制成每1ml中含0.05～0.2mg的溶液；照中国药典2010年版一部附录ⅥB的薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5～15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以沸程为60～90℃的石油醚-乙酸乙酯-丙酮＝5～9:0.2～0.7:1.5～3.5为展开剂，展开，取出，晾干，置日光下检视，供试品色谱中，在与靛玉红对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以5％氢氧化钾溶液，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与茵陈对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；(4)甘...

【专利技术属性】
技术研发人员：郗瑞云，谷陟欣，张妮瑜，欧金秀，辛秀，刘淑妦，袁莉，朱丽，
申请(专利权)人：九芝堂股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43