PCV/猪肺炎支原体组合疫苗制造技术

本发明专利技术提供多价免疫原性组合物，其包含猪肺炎支原体(M.hyo)全细胞制备物的可溶性部分；和猪圆环病毒2型(PCV2)抗原，其中M.hyo制备物的可溶性部分基本上不含(i)IgG和(ii)由抗原与免疫球蛋白结合形成的免疫复合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】PCV/猪肺炎支原体组合疫苗专利
本专利技术涉及猪圆环病毒和猪肺炎支原体(Mycoplasmahyopneumoniae(M.hyopneumoniae或M.hyo))。更具体地，本专利技术涉及多价免疫原性组合物，其包含M.hyo全细胞制备物的可溶性部分和PCV2抗原，以及它在用于保护猪抵抗地方性动物病肺炎和断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)的疫苗中的应用。专利技术背景猪中的地方性动物病肺炎，也被称为支原体肺炎，是由M.hyo引起的。该疾病是一种慢性的、非致命性的疾病，影响各种年龄的猪。受感染的猪仅仅表现出咳嗽和发烧的轻微症状，但是这种疾病对经济有重要的影响，因为饲料转化效率降低并且体重增长减少。地方性动物病肺炎由受感染猪的肺排出的空气传播微生物通过鼻道在猪之间传播。M.hyo的初次感染可能跟随着其它支原体物种(猪鼻支原体(Mycoplasmahyorhinis)和絮状支原体(Mycoplasmaflocculare))以及其它细菌病原体的继发感染。M.hyo是小的原核微生物，能够自由生活地存在，虽然它经常被发现与真核细胞相联系，因为它对外源甾醇和脂肪酸有绝对需求。这些需求通常需要在含血清的培养基中生长。M.hyo由细胞膜而不是细胞壁包被。支原体和宿主细胞表面的物理结合是地方性动物病肺炎发生和持续存在的基础。M.hyo感染猪的呼吸道，在气管、支气管、细支气管建群。支原体产生纤毛停滞因子，其导致呼吸道内侧的纤毛停止运动。最终纤毛退化，使猪易于受到次级病原体的感染。在感染动物中观察到紫色到灰色的实变区域的典型病灶。对屠宰动物的调查揭示在30-80％的猪中存在病灶。来自13个州的37个畜群的结果表明99％的畜群有符合地方性动物病肺炎典型特征的肺炎病灶。因此，对有效预防和治疗措施的需求很大。抗生素如硫姆林、甲氧苄氨嘧啶、四环素和林可霉素有一些益处，但是价格昂贵并且需要长期使用。此外，抗生素尚未被证明有效消除M.hyo的传播或二次感染。通过维持无病原体畜群来预防有时是可行的，但是经常发生M.hyo的再次引入。由于猪肺炎的严重的经济后果，已经在寻找针对M.hyo的疫苗。含有在含血清培养基中生长的支原体生物体制备物的疫苗已进入市场，但是引起了对于免疫物质中存在的血清组分(例如免疫复合物或非免疫原性特异性蛋白)诱导的副反应的关注。提供M.hyo疫苗的其它尝试已有成功者，但是这种疾病仍然广泛流行。M.hyo和猪圆环病毒2型(PCV2)是猪产业中遇到的两种最为普遍的病原体。被PCV2感染的猪表现出通常被称为断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)的综合征。PMWS的临床特征是衰弱、皮肤苍白、瘦弱、呼吸窘迫、腹泻、黄疸(icterus)和黄疸(jaundice)。除了PMWS之外，PCV2与几种其它的感染包括假狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、格雷舍氏病(Glasser’sdisease)、链球菌脑膜炎、沙门氏菌病、断奶后大肠杆菌病、饮食肝病和化脓性支气管肺炎相关。M.hyo与地方性动物病肺炎相关，而且已被显示是猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)的发生中的主要辅因子。猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)由动脉炎病毒引起，该病毒与巨噬细胞，特别是存在于肺中的巨噬细胞(肺泡巨噬细胞)有特别的亲和力。这些巨噬细胞摄取并除去入侵的细菌和病毒，但在PRRS病毒的情况中并非如此。在PRRS病毒的情况中，它在巨噬细胞内部繁殖，产生更多的病毒并杀死巨噬细胞。一旦PRRSV进入畜群，它便会无限期地存在并有活性。高达40％的巨噬细胞被破坏，这使得细菌和其它病毒增殖并进行破坏。这种事件的一个常见的实例是在幼年/老年团体(grower/finisherunits)中，当它们受到PRRS病毒感染时，地方性动物病肺炎的严重程度显著增加。超过一半的断奶期PRRS病毒阴性的猪在进入市场之前被感染。所需要的是针对猪中PCV2和支原体二者感染的PCV2/M.hyo组合疫苗。优选地，这种多价疫苗将与其它猪抗原(如PRRS病毒)抗原相容。提供单瓶中的即用型、单次剂量(single-dose)的PCV2/M.hyo组合疫苗将会是非常合乎需要的。专利技术简述本专利技术提供多价免疫原性组合物，其包含猪肺炎支原体(M.hyo)全细胞制备物的可溶性部分；和猪圆环病毒2型(PCV2)抗原，其中M.hyo制备物的可溶性部分基本上不含(i)IgG和(ii)由抗原与免疫球蛋白结合形成的免疫复合物。在一个方面，M.hyo全细胞制备物的可溶性部分在被加入到免疫原性组合物之前已用蛋白-A或蛋白-G进行处理。在另一个方面，组合物是即用型液体组合物的形式。在一个实施方案中，M.hyo制备物的可溶性部分包含至少一种M.hyo蛋白抗原。在另一个实施方案中，M.hyo制备物的可溶性部分包含两种或更多种M.hyo蛋白抗原。在一些实施方案中，本专利技术的组合物引发针对M.hyo和PCV2的保护性免疫反应。在一个实施方案中，PCV2抗原是嵌合1型-2型圆环病毒的形式，嵌合病毒包含灭活的表达猪圆环病毒2型ORF2蛋白的重组猪圆环病毒1型。在另一个实施方案中，PCV2抗原是重组ORF2蛋白的形式。在又一个实施方案中，重组ORF2蛋白从杆状病毒载体表达。在一些实施方案中，本专利技术的PCV2/M.hyo组合物进一步包含至少一种其它抗原。在一个实施方案中，至少一种其它抗原针对在猪中可能引起疾病的微生物提供保护。在一个实施方案中，微生物包括细菌、病毒或原生动物。在另一个实施方案中，微生物选自，但不限于下列种类：猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)、副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis)、多杀巴斯德菌(Pasteurellamultocida)、猪链球菌(Streptococcumsuis)、猪葡萄球菌(Staphylococcushyicus)、胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillluspleuropneumoniae)、支气管炎博德特菌(Bordetellabronchiseptica)、猪霍乱沙门氏菌(Salmonellacholeraesuis)、肠炎沙门氏菌(Salmonellaenteritidis)、猪红斑丹毒丝菌(Erysipelothrixrhusiopathiae)、猪鼻支原体(Mycoplamahyorhinis)、猪滑液支原体(Mycoplasmahyosynoviae)、钩端螺旋体细菌、胞内劳森氏菌(Lawsoniaintracellularis)、猪流感病毒(SIV)、大肠杆菌抗原、猪痢疾短螺旋体(Brachyspirahyodysenteriae)、猪呼吸道冠状病毒、猪流行性腹泻(PED)病毒、轮状病毒、细环病毒(TTV)、猪巨细胞病毒、猪肠病毒、脑心肌炎病毒、奥杰士基氏病(Aujesky’sDisease)、典型性猪瘟(CSF)的致病原和猪传染性肠胃炎的致病原，或其组合。在一些实施方案中，本专利技术的组合物进一步包含佐剂。在一个实施方案中，佐剂选自，但不限于下列种类：水包油佐剂、聚合物和水佐剂、油包水佐剂、氢氧化铝佐剂、维生素E佐剂及其组合。在另一个实施方案中，本专利技术的组合物进一步包含药学可接受的载体。在特定的实施方案中，本专利技术的组合物当以单次剂量给药的形式进本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种多价免疫原性组合物，其包含猪肺炎支原体(M.hyo)全细胞制备物的可溶性部分；和猪圆环病毒2型(PCV2)抗原，其中M.hyo制备物的可溶性部分基本上不含(i)IgG和(ii)由抗原与免疫球蛋白结合形成的免疫复合物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.04.04 US 61/620,1751.一种多价免疫原性组合物，其包含：猪肺炎支原体(M.hyo)培养物的上清；猪圆环病毒2型(PCV2)抗原，和SP-油佐剂，其中M.hyo培养物的上清包含M.hyo-特异的抗原，且已通过离心、过滤或沉淀从不可溶细胞物质分离，且基本上不含IgG和抗原/免疫球蛋白免疫复合物，其中所述M.hyo培养物的上清在被加入到所述免疫原性组合物中之前已用蛋白-A或蛋白-G进行处理。2.权利要求1的组合物，其中所述组合物是即用型液体组合物的形式。3.权利要求1的组合物，其中所述组合物在猪中引发针对M.hyo和PCV2的保护性免疫反应。4.权利要求1的组合物，其中所述PCV2抗原是嵌合1型-2型圆环病毒的形式，所述嵌合病毒包含灭活的表达猪圆环病毒2型ORF2蛋白的重组猪圆环病毒1型。5.权利要求1的组合物，其中所述PCV2抗原是重组ORF2蛋白的形式。6.权利要求5的组合物，其中所述重组ORF2蛋白从杆状病毒载体表达。7.权利要求1的组合物，其中所述组合物还包含至少一种另外的针对微生物提供保护的抗原，所述微生物选自：猪细小病毒(PPV)、副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis)、多杀巴斯德菌(Pasteurellamultocida)、猪链球菌(Streptococcumsuis)、猪葡萄球菌(Staphylococcushyicus)、胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillluspleuropneumoniae)、支气管炎博德特菌(Bordetellabronchiseptica)、猪霍乱沙门氏菌(Salmonellacholeraesuis)、肠炎沙门氏菌(Salmonellaenteritidis)、猪红斑丹毒丝菌(Erysipelothrixrhusiopathiae)、猪鼻支原体(Mycoplamahyorhinis)、猪滑液支原体(Mycoplasmahyosynoviae)、钩端螺旋体细菌、胞内劳森氏菌(Lawsoniaintracellularis)、猪流感病毒(SIV)、大肠杆菌、猪痢疾短螺旋体(Brachyspirahyodysenteriae)、猪呼吸道冠状病毒、猪流行性腹泻(PED)病毒、轮状病毒、细环病毒(TTV)、猪巨细胞病毒、猪肠病毒、脑心肌炎病毒、奥杰士基氏病的致病原、典型性猪瘟(CSF)病毒和猪传染性肠胃炎的致病原，或其组合。8.权利要求1的组合物，其中所述组合物进一步包含药学可接受的载体。9.权利要求1至8任一项的组合物，其中所述组合物当以单次剂量给药的形式进行给药时，引发针对M.hyo和PCV2二者的保护性免疫反应。10.权利要求7的组合物，其中所述组合物当以单次剂量给药的形式进行给药时，引发针对M.hyo、PCV2和至少一种已知感染猪的其它微生物的保护性免疫反应。11.权利要求1的组合物在制备用于保护猪以抵抗猪肺炎支原体(M.hyo)和PCV2的药物中的用途。12.权利要求11的用途，其中所述药物被肌内、皮内、经皮或皮下给药。13.权...

【专利技术属性】
技术研发人员：G·P·尼采尔，J·E·高尔文，J·K·加勒特，J·R·II·库拉维克，T·L·里克，M·M·斯马茨尔，
申请(专利权)人：硕腾有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国;US