本发明专利技术提供了一株血清4型副猪嗜血杆菌菌株HN1009,保藏在中国典型培养物保藏中心,保藏编号为:CCTCC NO:M2014126。该菌株生物学性能稳定,对仔猪具有较强的致病性,灭活后接种仔猪,具有很好的免疫原性。将其作为疫苗候选株制成的单价疫苗安全性好,能够对仔猪产生较高的抗体,持续期长,能够抵抗同型野毒株的攻击,具有很好的免疫效力。在临床上使用该灭活疫苗,能够有效降低该病的发生,减少猪场的经济损失,其免疫效果达到或优于市场上现有商品化疫苗。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供了一株血清4型副猪嗜血杆菌菌株HN1009,保藏在中国典型培养物保藏中心,保藏编号为:CCTCC NO:M2014126。该菌株生物学性能稳定,对仔猪具有较强的致病性,灭活后接种仔猪,具有很好的免疫原性。将其作为疫苗候选株制成的单价疫苗安全性好,能够对仔猪产生较高的抗体,持续期长,能够抵抗同型野毒株的攻击,具有很好的免疫效力。在临床上使用该灭活疫苗,能够有效降低该病的发生,减少猪场的经济损失,其免疫效果达到或优于市场上现有商品化疫苗。 CCTCC NO:M2014126 2014.04.10【专利说明】一株血清4型副猪嗜血杆菌及其应用
本专利技术涉及生物免疫领域,具体地说,涉及一株血清4型副猪嗜血杆菌及其应用。
技术介绍
副猪嗜血杆菌病又称格拉泽氏病(Glasser ' sdisease),由副猪嗜血杆菌 (Haemophilus parasuis, Hps)引起。该病于1910年由德国学者Glasser首先报道,现已 在全世界范围内广泛分布。目前,副猪嗜血杆菌感染是引起猪场仔猪高死亡率的主要病因 之一。在美国,该病已成为危害保育猪群健康的重要传染病,与蓝耳病(PRRS)、圆环病毒 (PCV)并列为第一位,排在流感、链球菌和大肠杆菌病之前。该病目前也给中国猪群带来很 大威胁,随着猪繁殖与呼吸综合征(PRRS,蓝耳病)的流行,副猪嗜血杆菌病给猪群造成的 损失比以往更为严重,而爆发性的副猪嗜血杆菌病也比以往更为普遍。 Hps只感染猪,有很强的宿主特异性,可以影响2周龄?4月龄的猪,主要在断奶前 后和保育舍阶段发病,常见于5?8周龄,感染高峰通常见于保育期的4?6周,有些可早 在保育舍内最初2周时就开始出现,并一直持续到肥育期早期,发病率可达40%,严重时死 亡率可达50%。与以往相比,本病的流行特点已经发生改变。以前本病是零星散发发生的, 且与断奶猪的应激有关,但目前此病的发病率和死亡率均呈显著上升趋势,呈现地方流行 性,而且常与猪的几种重要病原体并发感染,如与猪流感病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒及 猪圆环病毒引起混合感染。 Hps是一种细小杆菌,在显微镜下呈多形态,非溶血性,不运动,无芽孢,无鞭毛,革 兰氏阴性。新分离的菌株多呈球杆状或双球状,有时可呈短链状,在陈旧培养物中多呈多 形态,有长杆状和丝状。Hps属于需氧或兼性厌氧菌,最适生长温度为35?37°C,pH7. 6? 7.8, C023%?5%。在适宜培养基上生长的菌落呈圆形,隆起,表面光滑,边缘整齐,灰白色 半透明,针尖大小。Hps培养条件严格,生长依赖烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD或V因子), 不需要X因子。在巧克力培养基上生长较差,在加 NAD、马血清的M96支原体培养基或加酵 母浸出物的PPLO培养基上生长良好。目前副猪嗜血杆菌至少有15种血清型,其中血清1、 5、10、12、13、14型毒力最强,2、4、8、15型具有中等毒力,3、6、7、9、11型不能引起临床感染。 从世界范围内看,血清4、5、13型最为流行,日本、德国、美国、西班牙、加拿大和中国以血清 4型和5型最常见,澳大利亚和丹麦分离的菌株主要为血清5型和13型,但临床分离菌中约 20%无法定型。但最新的研究结果表明,危害北美各猪场的Hps流行血清型发生了改变,在 美国的猪场中血清5型不再广泛流行,而以血清4型(39%)和不能分型的分离株(27%) 最为流行。我国当前Hps流行的优势血清型主要为4、5、12、13型。Hps毒力和致病性可能 与细菌毒素有关,但至今这方面的报道很少。副猪嗜血杆菌是否只产生巴氏杆菌科的一些 非常重要的毒力因子如荚膜、菌毛、脂多糖、外膜蛋白以及它们与本菌的毒力是否有关,目 前还知之甚少。 我国是猪肉消费大国,猪肉的消费占总体肉食消费的80%以上,生猪价格的波动 会严重影响居民消费指数。目前曾严重影响我国养猪业的猪瘟、高致病性蓝耳病、猪圆环病 毒病等已经得到有效控制,但以副猪嗜血杆菌病为代表的细菌病对养猪业的危害正日益加 重。从而导致大量使用抗生素进行治疗,结果是:一方面导致猪产品抗生素超标,危害人的 身体健康,另一方面导致细菌耐药性不断增强,耐药菌株不断出现,尤其是副猪嗜血杆菌, 非常容易耐药,导致治疗效果不好,从而养殖户加大抗生素用量,造成恶性循环。国外研究 表明,用同血清型的菌株制成的灭活疫苗能够有效抵抗野毒株的感染,是预防和控制副猪 嗜血杆菌病最有效的措施。近年来,国内也开展了灭活疫苗的研究,显示了很好的防治效 果。因此,在了解本我国主要流行菌的血清型的基础上,采用灭活疫苗进行接种,可以有效 预防本病的发生。尽管血清4型Hps毒力中等,不是最强的,但在世界范围内流行最广,弓丨 起的危害最大,也是我国Hps流行最广的血清型。同一血清型的Hps毒力可能不同,免疫原 性也不同,所以,通过动物试验筛选一株毒力强、免疫原性好的菌株是制备Hps灭活疫苗的 关键技术。
技术实现思路
为了解决现有技术中存在的问题,本专利技术的目的是提供一株毒力强、免疫原性好 的血清4型副猪嗜血杆菌及其应用。 为了达到上述目的,本专利技术采用的技术方案如下: 本专利技术首先提供一株血清4型副猪嗜血杆菌株HN1009,分类命名为副猪嗜血杆菌 (Haemophilus parasuis)(血清4型),已于2014年4月10日保藏于中国典型培养物保藏 中心CCTCC,地址:中国武汉武汉大学,邮编430072,保藏编号CCTCC M2014126。 该菌株是专利技术人于2010年9月在河南省郑州市一猪场发病猪分离获得的一株副 猪嗜血杆菌经琼脂凝胶扩散试验证明,该菌株为血清4型。培养该菌株,经甲醛灭活,与适 宜的佐剂混合,制成单价灭活疫苗,经动物试验表明,该菌株具有较强毒力和很好免疫原 性。 所述血清4型副猪嗜血杆菌株HN1009与其他4型副猪嗜血杆菌比较具有如下生 物学特性: 1.致病力强用该菌腹腔注射攻击16g?20g健康Balb/c小鼠,剂量为 5. OX IO9CFU/只,可导致50%以上小鼠死亡。用该菌腹腔注射攻击50日龄左右的健康易 感仔猪,剂量为5. 0 X IO9CFU/只,可导致60 %以上仔猪发病或死亡。 2.免疫原性好灭活该菌,与白油佐剂1 :2乳化制成灭活疫苗,使每毫升疫苗中 含灭活前活菌数为2. OX IO9CFU,接种2?3周龄健康易感仔猪,首免2周后,以相同剂 量再接种一次,二免3周后,用该菌腹腔注射攻击50日龄左右的健康易感仔猪,剂量为 5. OX IO9CFU/只,免疫组猪100 %保护,而对照组至少50 %仔猪发病或死亡。 3.繁殖滴度高该菌的培养液OD值与活菌数大致呈现一种线性关系,经过拟合,得 到菌液OD值与活菌数关系曲线Y = (15. 244X-0. 1959) X IO8CFUAiL (R = 0. 9862)。通过菌 液OD值与活菌数的关系曲线,在确定菌液中活菌数时,可以很方便的通过测定菌液的OD值 而得到。 本专利技术还提供了所述血清4型副猪嗜血杆菌菌株HN1009在制备防治由血清4型 副猪嗜血杆菌导致的副猪嗜血杆菌病的药物中的应用。 本专利技术进本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株血清4型副猪嗜血杆菌菌株HN1009,其特征在于,保藏在中国典型培养物保藏中心,保藏编号为:CCTCC M 2014126。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员:李晓成,邵卫星,吴发兴,张志,刘爽,董雅琴,李鹏,王佳,于美芳,
申请(专利权)人:中国动物卫生与流行病学中心,
类型:发明
国别省市:山东;37
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