本发明专利技术涉及一种中药注射液的鉴别方法，特别是涉及一种利用GC-MS测定苦碟子注射液糖类成分的测定方法。其步骤如下：（a）样品的制备，样品前处理方法。（b）标准品的制备，醛糖类成分衍生化方法，酮糖类成分衍生化方法。(c)色谱条件气质分析仪，GC-MS-QP2010SE毛细管柱。(d)测定分别精密吸取标准品与样品，注入气相色谱仪，用气相色谱法测定，制定苦碟子注射液糖类成分指纹图谱。本方法采用衍生化法使苦碟子中难以检测的糖类成分更加准确的检测出来。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及一种中药注射液的鉴别方法，特别是涉及一种利用GC-MS测定苦碟子注射液糖类成分的测定方法。其步骤如下：（a）样品的制备，样品前处理方法。（b）标准品的制备，醛糖类成分衍生化方法，酮糖类成分衍生化方法。(c)色谱条件气质分析仪，GC-MS-QP2010SE毛细管柱。(d)测定分别精密吸取标准品与样品，注入气相色谱仪，用气相色谱法测定，制定苦碟子注射液糖类成分指纹图谱。本方法采用衍生化法使苦碟子中难以检测的糖类成分更加准确的检测出来。【专利说明】
本专利技术涉及一种中药注射液的鉴别方法，特别是涉及一种利用GC-MS测定苦碟子 注射液糖类成分的测定方法。
技术介绍
苦碟子为菊科苦荬菜属多年生草本植物。近年来随着中药越来越受重视，苦碟子 的化学成分、药理活性和临床研究应用等方面的研究都取得了重大进展。苦碟子注射液为 浅黄棕色至黄棕色的澄明液体，临床上用于冠心病、心绞痛、脑血栓、脑梗塞等。 苦碟子的化学成分比较复杂，据文献报道其成分主要有萜类、黄酮类和香豆素类、 甾醇等。其中主要活性成分，由于受产地、气候和生态环境等因素的影响，不同产地苦碟子 所制成的注射液所含成分诧异很大。研究报道，从各种动植物中提取的多糖具有免疫调节、 抗肿瘤、抗病毒、抗衰老、抗病毒、抗辐射、降血脂、降血糖、美容等广泛的作用。 苦碟子注射液（曾用名：碟脉灵注射液）列入国家药品标准产品（国药准字 Z20025450)，由通化华夏药业有限责任公司生产。 处方：抱莖苦荬菜lOOOg，制成1000ml。 制法：取抱茎苦荬菜，加水煎煮二次，第一次1小时，第二次0. 5小时，合并煎液， 浓缩至每Iml相当于原生药0. 5g，放冷至40°C以下，在搅拌下加10%氧化I丐乳调节pH值至 10,放置12小时，离心，离心沉淀物称重，悬浮于5. 3倍量95%乙醇中（使含醇量达80%)，力口 50%硫酸溶液调节pH值至3 - 4,充分搅拌使反应完全，离心，离心液加40%氢氧化钠溶液 中和pH值至7. 0,滤过，滤液回收乙醇，并挥尽乙醇，用注射用水稀释至每Iml相当于原生 药4g，置-5°C以下放置12小时以上，滤过，滤液加0. 1 - 0. 2%药用活性炭粉末，煮沸15分 钟，置-5°C以下放置24小时以上，滤过，滤液加注射用水稀释至规定量，调节pH值至7. 0 - 7. 5,滤过，灌封，灭菌即得。性状：本品为浅黄棕色至黄棕色的澄明液体。 含量测定：本品每IOml含总黄酮以无水芦丁（C27H3tlO 16)计，不得少于4. Omg。含抱 茎苦荬菜以腺苷（CltlH12N5O 4)计，不得少于0. 025mg。 功能主治：活血止痛，清热祛瘀。用于瘀血闭阻的胸痹，证见：胸闷、心痛，口苦，舌 暗红或存瘀斑等。适用于冠心病、心绞痛见上述病状者。亦可用于脑梗塞者。 用法用量：静脉滴注，一次10 - 40ml，一日1次；用5%葡萄糖或0. 9%氯化钠注射 液稀释至250 - 500ml后应用；14天为一疗程；或遵医嘱。 规格：每支装（I) 10ml，（2) 20ml，（3) 40ml。 据文献报道，苦碟子中含有糖类成分，但是在现有的文献和报道中却并没有有关 此物质的质量检测方法。本专利技术就提供了一种苦碟子注射液中糖类物质的含量测定的方 法。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术中的现状，提供一种苦碟子注射液中糖类成分的含 量测定方法，该方法为苦碟子注射中糖类成分的检测提供了样品前处理方法以及糖类成分 GC-MS的检测方法，通过该方法的分析，不仅可以明确苦碟子注射液中糖类成分的组成，还 能对其含量进行测定，该方法的建立可为苦碟子注射液质量控制提供依据。 本专利技术的技术解决方案是：，其步骤如 下： (a)样品的制备 样品前处理方法：取苦碟子注射液过HyperS印C18柱后，置于具塞圆底烧瓶中，IM HCl调pH为1，减压抽真空后70°C水浴3h，冷却后加入10% NaOH调pH至中性，精密量取 每5ml于每支离心管中，冷冻干燥备用。而苦碟子注射液中富含有黄酮苷和核苷类成分，为 避免其中糖配基的干扰，建立了苦碟子注射液进行前处理方法，除去其中的苷类成分，使该 方法能够专一性的分析苦碟子注射液中的糖类成分。本方法中样品前处理步骤简单易于操 作，所得样品的重复性良好，适用于成批药物的大量检测。 称取上述干燥物置于10 ml具塞试管中，加入100 mg盐酸羟胺和500 μ 1吡啶， 在901：水浴中振荡反应301^11，取出冷至室温，加入50(^1乙酸酐，于901：水浴中继续进行 乙酰化反应30min，冷却后即得衍生物。 称取冷冻干燥物2mg定溶于IOml容量瓶中，然后稀释到0· 04mg/ml和0· 5mg/ml， 精密移取lml，冷冻干燥，加入0. 6ml吡啶、IOOmg盐酸羟胺，混匀，放入90°C水浴中加热反 应30 min，取出后冷却至室温，加入0. 3ml六甲基二硅胺，在90°C下继续反应30min加入 0. Iml三甲基氯娃烧，10000r/min离心15min，取上清液直接进样分析。 (b)标准品的制备 醛糖类成分衍生化方法：分别称取市面上购买的阿洛糖、肌醇、甘露糖、葡萄糖、半乳 糖、阿拉伯糖标准品置于10 ml具塞试管中，加入100 mg盐酸羟胺和500μ1吡啶，在90°C 水浴中振荡反应30min，取出冷至室温，加入500 μ 1乙酸酐，于90°C水浴中继续进行乙酰化 反应30min，冷却后即得衍生物。 酮糖类成分衍生化方法：分别称取果糖标准品2mg定溶于IOml容量瓶中，然后稀 释到0. 04mg/ml和0. 5mg/ml，精密移取lml，冷冻干燥，加入0. 6ml批陡、IOOmg盐酸轻胺， 混匀，放入90°C水浴中加热反应30 min，取出后冷却至室温，加入0. 3ml六甲基二硅胺，在 90°C下继续反应30min加入0. Iml三甲基氯娃烧，10000r/min离心15min，取上清液直接进 样分析。 (C)色谱条件 气质分析仪：GC-MS-QP2010SE毛细管柱：Rtx-5 MS 0. 25 mmX30 m，0. 25 μ m ;载气：高 纯氦气He，99. 999%;进样口温度：280°C ;柱流速：1.0mv/min ;进样量：1μ I ;分流比：30:1 ; 气化室温度：280°C ;柱前压73. OkPa气-质接口温度：270°C ;离子源：EI源；离子源温度 200°C ;电子能量：70ev ;溶剂延迟时间5min，质量扫描范围45 - 550amu。 (d)测定 分别精密吸取标准品与样品，注入气相色谱仪，用气相色谱法测定，制定苦碟子注射液 糖类成分指纹图谱。 本专利技术优点是：1、整体性、宏观性和模糊性。本专利技术克服了使用GC-MS测定苦碟 子中糖类成分难以检测的缺点。在以往对苦碟子注射液的研究中，对其核苷类、黄酮类、以 及有机酸类成分研究较多，而这些类型成分含量只占苦碟子注射液干重的60%，为了更加全 面的分析苦碟子注射液中的化学成分，进一步提升苦碟子注射液的质量标准，对其中含量 高于干重20%的糖类成分进行了分析。本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种苦碟子注射液糖类成分的含量测定方法，其特征在于步骤如下：（a）样品的制备样品前处理方法：取苦碟子注射液过HyperSep C18柱后，置于具塞圆底烧瓶中，1M HCl调pH为1，减压抽真空后70℃水浴3h，冷却后加入10% NaOH 调pH至中性，精密量取每5ml于每支离心管中，冷冻干燥备用；称取上述干燥物置于10 ml 具塞试管中，加入100 mg 盐酸羟胺和500μl吡啶，在90℃水浴中振荡反应30min，取出冷至室温，加入500μl乙酸酐，于90℃水浴中继续进行乙酰化反应30min，冷却后即得衍生物；称取冷冻干燥物2mg定溶于10ml容量瓶中，然后稀释到0.04mg/ml和0.5mg/ml，精密移取1ml，冷冻干燥，加入0.6ml吡啶、100mg盐酸羟胺，混匀，放入90℃水浴中加热反应30 min，取出后冷却至室温，加入0.3ml六甲基二硅胺，在90℃下继续反应30min 加入0.1ml三甲基氯硅烷，10000r/min离心15min，取上清液直接进样分析； （b）标准品的制备醛糖类成分衍生化方法：分别称取市面上购买的阿洛糖、肌醇、甘露糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖标准品置于10 ml 具塞试管中，加入100 mg 盐酸羟胺和500μl吡啶，在90℃水浴中振荡反应30min，取出冷至室温，加入500μl乙酸酐，于90℃水浴中继续进行乙酰化反应30min，冷却后即得衍生物； 酮糖类成分衍生化方法：分别称取果糖标准品2mg定溶于10ml容量瓶中，然后稀释到0.04mg/ml和0.5mg/ml，精密移取1ml，冷冻干燥，加入0.6ml吡啶、100mg盐酸羟胺，混匀，放入90℃水浴中加热反应30 min，取出后冷却至室温，加入0.3ml六甲基二硅胺，在90℃下继续反应30min 加入0.1ml三甲基氯硅烷，10000r/min离心15min，取上清液直接进样分析； (c)色谱条件气质分析仪：GC‑MS‑QP2010SE毛细管柱：Rtx‑5 MS 0.25 mm×30 m，0.25 μm；载气：高纯氦气He，99.999%；进样口温度：280℃；柱流速：1.0mv/min；进样量：1μl；分流比：30:1；气化室温度：280℃；柱前压73.0kPa气‑质接口温度：270℃；离子源：EI源；离子源温度200℃；电子能量：70ev；溶剂延迟时间5min，质量扫描范围45－550amu；(d)测定分别精密吸取标准品与样品，注入气相色谱仪，用气相色谱法测定，制定苦碟子注射液糖类成分指纹图谱。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王晖，张艳君，李遇伯，刘东辉，陈峰，
申请(专利权)人：通化华夏药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：吉林;22
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