本发明专利技术公开了一种检测鸡新城疫病毒和/或鸡传染性支气管炎病毒的基因芯片和试剂盒。本发明专利技术基因芯片包括固相载体以及固定在固相载体上的探针；所述探针包括SEQ ID NO：1～2所示任意一个或者两个基因片段，和/或SEQ ID NO：3～4所示任意一个或者两个基因片段。本发明专利技术试剂盒包括前述基因芯片与鸡新城疫病毒和鸡传染性支气管炎病毒基因的试剂。本发明专利技术基因芯片和检测试剂盒可以准确、有效的检测鸡新城疫病毒和鸡传染性支气管炎病毒，且特异性强、灵敏度高、耗时短，检测快速，应用前景良好。
【技术实现步骤摘要】
检测鸡新城疫病毒和鸡传染性支气管炎病毒的基因芯片以及试剂盒
本专利技术涉及一种检测鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒的基因芯片以及试剂盒。
技术介绍
随着我国养禽业集约化程度的不断提高，各类疾病的发生也呈逐年上升的趋势。我国禽病防治的总体水平不高，禽病的发生和危害仍然十分严重，据不完全统计，目前危害我国养禽业生产的疾病达80余种，其中传染病约占禽病总数的75％，危害严重。同时禽病的发生也出现新的特点，如新的传染病不断出现；新发生禽病的种类增多；传染病发病的非典型化和病原出现新的变化；混合感染和复合症使疾病更为复杂等。鸡新城疫、鸡传染性支气管炎这2种病在我国和许多国家地区广泛流行，受病毒侵袭的鸡群会引起大批死亡，耐过的生长发育缓慢，淘汰率增高，并干扰其它疫苗的免疫力，使鸡易继发感染其它疾病，而造成严重的经济损失。这3种病的共同特征都能引起呼吸道症状，而且症状十分相似，在临床诊断中很难准确判断，也极易与其它呼吸道病如禽流感、慢性呼吸道病等相混淆。现有的禽病检测或监测技术均存在不可克服的局限，如对疫病的混合感染、隐性感染及疫苗毒和野毒的区分等，在检测时均存在一定的困难。同时对于多种疫病的混合感染需要同一种方法或不同方法多次进行检测，因此有必要加强对动物疫病检测或监测新型技术的研究。目前，对这2种病的诊断一般采用病原分离鉴定和常规的血清学方法，但这些方法存在操作繁杂、费时费力、敏感性较差等不足。特别是当鸡群存在鸡新城疫、鸡传染性支气管炎等多种病毒感染时，难以应用这些传统方法进行快速检测和鉴别诊断，在一定程度上影响了对这些疫病的有效防制。最近国内外均建立了PCR/RT-PCR检测方法，以及多重PCR检测方法，但是还不能满足更加快速、准确的检测多种病原混合感染的要求。分子生物学理论和技术的发展，特别是基因芯片有高通量、多样性、微型化和自动化的特点，这些特性使它上面的信息能快速准确地被读出，对样品的量要求很少，节约试剂和成本，处理速度大大加快，在对各种病原体的检测中，病原体基因的检测和分析是最可信的，而基因芯片技术能对各种病原体的RNA进行定性和定量的分析，从而帮助临床医生对感染的种类和感染的程度进行分析。曹三杰，“鸡新城疫、鸡传染性支气管炎基因芯片的构建及其检测技术研究”，四川农业大学2004年博士论文公开了一种同时检测鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒的基因芯片，其对鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒的最低检测浓度分别为0.44ng/μL和0.87ng/μL，灵敏度低。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术提供了一种特异强、灵敏度高可检测检测鸡新城疫病毒和/或鸡传染性支气管炎病毒的新的基因芯片和试剂盒。本专利技术检测鸡新城疫病毒和/或鸡传染性支气管炎病毒的基因芯片，它包括固相载体以及固定在固相载体上的探针；所述探针包括SEQIDNO：1～2所示任意一个或者两个基因片段，和/或SEQIDNO：3～4所示任意一个或者两个基因片段。基因芯片，又叫DNA微阵列，是指指通过不同方法将生物分子(寡核苷酸、cDNA、genomicDNA、多肽、抗体、抗原等)固着于硅片、玻璃片(珠)、塑料片(珠)、凝胶、尼龙膜等固相递质上形成的生物分子点阵，其突出的特点是微型化、集成化、平行化和高通量。优选地，它还包括定位探针，定位探针是SEQIDNO：13所示的基因片段。本专利技术检测鸡新城疫病毒和/或鸡传染性支气管炎病毒的试剂盒，它包括前述的基因芯片与扩增鸡新城疫病毒和/或鸡传染性支气管炎病毒基因的试剂，其中，扩增鸡新城疫病毒基因的试剂包括SEQIDNO：5～6和/或SEQIDNO：7～8所示引物对；扩增鸡传染性支气管炎病毒基因的试剂包括SEQIDNO：9～10和/或SEQIDNO：11～12所示引物对。所述试剂盒还包括SEQIDNO：14～15所示引物对。所述引物对中，SEQIDNO：5所示上游引物与SEQIDNO：6所示下游引物的摩尔比为1：10；SEQIDNO：7、9、11所示上游引物与SEQIDNO：8、10、12所示下游引物的摩尔比为1：20。所述上游引物标记有荧光染料。所述试剂盒还包含有胶体金。胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。本专利技术胶体金按照下述方法制备：取200mL灭菌超纯水和2mL1％HAuCl4混于500ml大烧杯中，而后量取20mL分装于编号1-10的10个50mL小烧杯中，使用加热磁力搅拌器将分装的胶体金溶液依次加热5min，快速加入1％柠檬酸三钠溶液，加入量分别为0.1mL，0.2mL，0.24mL，0.28mL，0.32mL，0.36mL，0.4mL，0.6mL，1.0mL，1.2mL。颜色由浅黄迅速变为黑色再变为红色时，再持续搅拌10min停止，等溶液冷却至室温，用硝酸纤维薄膜过滤，即可得到所需胶体金。本专利技术还提供SEQIDNO：1或2所示任意一个或者两个基因片段，和/或SEQIDNO：3或4所示任意一个或者两个基因片段在制备检测鸡新城疫病毒和/或鸡传染性支气管炎病毒的基因芯片中的用途。优选地，所述基因芯片还包括定位探针，定位探针是SEQIDNO：13所示的基因片段。本专利技术还提供了SEQIDNO：5～6和/或SEQIDNO：7～8所示引物对，与SEQIDNO：9～10和/或SEQIDNO：11～12所示引物对在制备同时扩增鸡传染性支气管炎病毒和鸡新城疫病毒的试剂中的用途。本专利技术还提供了SEQIDNO：1～2所示任意一个或者两个基因片段以及SEQIDNO：5～6和/或SEQIDNO：7～8所示引物对，和/或SEQIDNO：3～4所示任意一个或者两个基因片段以及SEQIDNO：9～10和/或SEQIDNO：11～12所示引物对在制备检测鸡新城疫病毒和/或鸡传染性支气管炎病毒的试剂盒中的用途；其中，引物对为扩增试剂；SEQIDNO：1～4为检测探针。所述引物对中，SEQIDNO：5所示上游引物与SEQIDNO：6所示下游引物的摩尔比为1：10；SEQIDNO：7、9、11所示上游引物与SEQIDNO：8、10、12所示下游引物的摩尔比为1：20。本专利技术基因芯片可以有效检测鸡新城疫病毒和鸡传染性支气管炎病毒，特异性强，灵敏度高，两种病毒样品的最低检测浓度为1.8×104拷贝/μL(0.2pg/μL)，耗时短，检测快速，具有良好的应用前景。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本专利技术权利要求书记载的内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1基因芯片的矩阵排列情况；图2胶体金的影响结果；图3特异性实验结果；图4灵敏度实验结果；图5稳定性实验结果。具体实施方式一、实验材料和仪器菌株：NDVLaSota株、IBVH120株均购自中国兽药监察所，由本实验室保存。主要试剂与培养基：Omega质粒提取试剂盒，购于Omega生物技术公司；2×TaqPCRMasterMix、反转录试剂盒、总RNA提取试剂盒、天根DNA提取试剂盒和100bpDNALadde本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测鸡新城疫病毒和/或鸡传染性支气管炎病毒的基因芯片，其特征在于：它包括固相载体以及固定在固相载体上的探针；所述探针包括SEQ ID NO：1～2所示任意一个或者两个基因片段，和/或SEQ ID NO：3～4所示任意一个或者两个基因片段。
【技术特征摘要】
1.一种检测鸡新城疫病毒和鸡传染性支气管炎病毒的基因芯片，其特征在于：它包括固相载体以及固定在固相载体上的探针；所述探针为SEQIDNO：1～2所示任意一个或者两个基因片段，和SEQIDNO：3～4所示任意一个或者两个基因片段。2.根据权利要求1所述的基因芯片，其特征在于：它还包括定位探针，定位探针是SEQIDNO：13所示的基因片段。3.一种检测鸡新城疫病毒和鸡传染性支气管炎病毒的试剂盒，其特征在于：它包括权利要求1或2所述的基因芯片与扩增鸡新城疫病毒和鸡传染性支气管炎病毒基因的试剂，其中，扩增鸡新城疫病毒基因的试剂包括SEQIDNO：5～6和/或SEQIDNO：7～8所示引物对；扩增鸡传染性支气管炎病毒基因的试剂包括SEQIDNO：9～10和/或SEQIDNO：11～12所示引物对。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：它还包括SEQIDNO：14～15所示引物对。5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：它还包括胶体金。6.根据权利要求3所...
【专利技术属性】
技术研发人员：文心田，曹三杰，黄小波，赵松，文翼平，伍锐，邓静，尹人杰，张仙，常晓霞，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：四川;51
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