一种抗I2抗体层析试纸条及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种抗I2抗体层析试纸条、制备方法及应用。该试纸条包括样品垫(1)、结合垫(2)、分析膜(3)、吸水垫(6)、底板(7)、检测带T线(4)和质控带C线(5)，所述底板(7)的上部贴合有分析膜(3)，所述分析膜(3)上部的两端分别贴合有结合垫(2)和吸水垫(6)，结合垫(2)上部的一端贴合有样品垫(1)，检测带T线(4)和质控带C线(5)设置在分析膜(3)上。本发明专利技术采用间接免疫检测法，用I2抗原蛋白，实现对样本中抗I2抗体的高灵敏度、高特异性快速检测，为临床炎症性肠病等自体免疫性疾病的辅助诊断提供依据。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种抗I2抗体层析试纸条、制备方法及应用。该试纸条包括样品垫(1)、结合垫(2)、分析膜(3)、吸水垫(6)、底板(7)、检测带T线(4)和质控带C线(5)，所述底板(7)的上部贴合有分析膜(3)，所述分析膜(3)上部的两端分别贴合有结合垫(2)和吸水垫(6)，结合垫(2)上部的一端贴合有样品垫(1)，检测带T线(4)和质控带C线(5)设置在分析膜(3)上。本专利技术采用间接免疫检测法，用I2抗原蛋白，实现对样本中抗I2抗体的高灵敏度、高特异性快速检测，为临床炎症性肠病等自体免疫性疾病的辅助诊断提供依据。【专利说明】一种抗12抗体层析试纸条及其用途
本专利技术涉及免疫分析检测领域。具体而言，本专利技术涉及一种检测抗12抗体免疫层 析检测试纸、制备方法及其应用。
技术介绍
炎症性肠病（inflammatory bowel disease, IBD)是一种病因尚不十分清楚的 慢性非特异性肠道炎性疾病，包括溃疡性结肠炎（Ulcerative colitis，UC)和克罗恩病 (Crohn' s disease，CD)。克罗恩病于 1932 年由 Crohn、Ginzterg 和 Oppenheime 最早描 述，故得此名。1973年，世界卫生组织医学科学国际组织委员会将本病定名为Crohn病。其 特点为病因未明，多见于青年人，表现为肉芽肿性炎症病变，合并纤维化与溃疡。可侵及全 胃肠道的任何部位，包括口腔、肛门，病变呈节段性或跳跃性分布，并可侵及肠道以外，特别 是皮肤。临床表现因病变部位、范围及程度不同而多样化，病程缓慢，易复发。 IBD是北美和欧洲的常见病，近30年来日本IBD发病率亦呈逐步增高趋势，我国虽 尚无普通人群的流行病学资料，但近10多年来本病就诊人数呈逐步增加趋势则非常明显。 IBD的临床表现复杂多样，不仅有消化道症状，还可有肠外表现。由于症状为腹痛、腹泻、便 血等非特异性肠炎表现，CD与UC、以及IBD与结核性肠炎等其他肠道慢性疾病很难鉴别诊 断，特别在缺乏组织学证据时，需有更多相对特异性的标志物为诊断提供帮助。研究发现， 多种非侵入性的生物活性标志物对IBD的诊断及炎症活动性的评价具有重要意义。 目前鉴别UC与⑶的生物标志物主要集中在自身免疫抗体与抗微生物抗体， 12 (Pseudomonas-associated sequence 12)是一种在活动性⑶患者病变肠黏膜上发现 的蛋白，通过氨基酸序列分析，发现12是一种肠道正常菌突光假单胞菌（pseudomonas fluorescens)pfiT基因的一段序列。研究表明，大约有20?30% CD患者血清抗12的IgA 抗体阳性，而在正常人和非⑶肠道疾病患者中的抗12的IgA抗体极少被检测到。因此，抗 12的IgA抗体检测是⑶诊断的有效指标之一。 专利技术专利"一种IgA抗体检测试剂盒"（申请号201310062239. 7)首次公布了 12 的四段抗原序列，并用化学发光法实现了对样品中抗12抗体IgA的检测，本专利技术在此基础 上用基因重组方法获得12抗原蛋白，并用该抗原蛋白实现了抗12抗体的免疫层析检测。与 对比文献化学发光法相比，本专利技术所用的抗原蛋白比201310062239. 7专利技术专利公布的抗 原表位更多，提示用同样方法检测时，灵敏度更高；其次，本专利技术用胶体金/彩色胶乳标记 制备的免疫层析试纸条，使检测更为简便。 免疫层析法（Immunochromatography)是近几年来兴起的一种快速诊断技术，其 原理是将特异的抗体先固定于硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜的某一区带，当该干燥的纤维 素一端浸入样品（尿液或血清）后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至 固定有抗体的区域时，样品中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合，形成肉眼可见的检 测带。现有的免疫层析试纸条产品常用的示踪标记粒子有纳米金、纳米硒、彩色胶乳等等， 其中以纳米金应用最为广泛，纳米金也称为胶体金。 以胶体金作为失踪标记物的免疫层析技术特称为免疫胶体金技术（Immune colloidal gold technique，GICT)。胶体金是由氯金酸（HAuC14)在还原剂如白磷、抗坏血 酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，聚合成为特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定 的胶体状态而得名。胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢 固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。胶体金除了与蛋白质 结合以外，还可以与许多其它生物大分子结合，如SPA、PHA、ConA等。根据胶体金的一些物 理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，因而 使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。 表面带活性基团的彩色胶乳微球也可以作为免疫层析的示踪剂，与胶体金技术一 样，彩色胶乳标记免疫层析技术也具有操作简便、试剂稳定、快速出结果、可室温保存等优 点。彩色胶乳标记是将不同直径范围〇. 1 μ Μ?1 μ Μ彩色胶乳微球与含有羧基、氨基、羟基 等酯类或其他大分子物质共价结合，使这些大分子标记上颜色，当在检测线或质控线上富 集停留后形成肉眼可见的彩色条带。 与现有技术ELISA和化学发光法相比，免疫层析法检测的优点主要包括：（1)使用 方便快速，便于基层使用和现场使用，所有反应能在20分钟内完成；（2)成本低，不需要特 殊的仪器设备；(3)应用范围广，可适应多种检测条件；(4)可以进行多项检测，若阳性样本 比较难获得，多项检测可以节省样品，降低成本；（5)标记物稳定，标记样品在4°C贮存两年 年以上，无信号衰减现象；(6)胶体金本身为红色，不需要加入发色试剂，省却了酶标的致 癌性底物及终止液的步骤，对人体无毒害。 在自体免疫性疾病诊断方面，已出现较多的免疫层析试纸，但基于抗12抗体检测 的免疫层析试纸在国内外市场上仍没有问世。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是为了克服现有方法的不足，将免疫层析法应用到抗 12抗体的检测中，采用间接免疫法来实现对样品中的抗12抗体进行检测，通过把12抗原蛋 白包被在结合垫或分析膜的检测带上，实现对样品中抗12抗体的高特异、高灵敏度、高准 确性的检测，快速筛查抗12抗体阳性标本，为临床炎症性肠病等自体免疫性疾病提供快速 的辅助诊断。 本专利技术的目的之一在于提供一种快速、准确的抗12抗体的免疫层析检测试纸条 及制备方法，目的之二是提供一种基于免疫层析技术的抗12抗体检测方法。 作为本专利技术第一个方面的抗12抗体的免疫层析检测试纸条，包括样品垫、结合 垫、分析膜、吸水垫和底板，分析膜上设置检测带和质控带，所述底板的上部贴合有分析膜， 分析膜上部的两端分别贴合有结合垫和吸水垫，结合垫上部的一端贴合有样品垫。 所述的结合垫为1层（图1)或2层（图2)，其中2层时错落与分析膜搭接。 所述抗12抗体的免疫层析检测试纸条的制备方法，包括以下步骤： 步骤1. 12抗原蛋白的制备 步骤2.结合垫⑵制备 (1)纳米金标记物的制备：用20?40nm粒径的纳米金溶液标记12抗原蛋本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗I2抗体免疫层析试纸条，包括样品垫(1)、结合垫(2)、分析膜(3)、吸水垫(6)、底板(7)、检测带T线(4)和质控带C线(5)，所述底板(7)的上部贴合有分析膜(3)，所述分析膜(3)上部的两端分别贴合有结合垫(2)和吸水垫(6)，所述结合垫(2)上部的一端贴合有样品垫(1)，所述检测带T线(4)和质控带C线(5)设置在分析膜(3)上，其特征在于，I2抗原蛋白结合在结合垫(2)上或包被在检测带T线(4)上。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈菲，霍如松，李振军，
申请(专利权)人：苏州和锐医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32