一种高效生产N-乙酰氨基葡萄糖的基因工程菌制造技术

技术编号:10930274 阅读:127 留言:0更新日期:2015-01-21 11:37
本发明专利技术提供了一种高效生产N-乙酰氨基葡萄糖的基因工程菌,所述基因工程菌是将大肠杆菌的染色体缺失nagDCABE基因簇并整合分别由T7启动子和Trc启动子介导的6-磷酸氨基葡萄糖合成酶突变基因和N-乙酰氨基葡萄糖转移酶基因串联基因表达盒获得,其中,所述6-磷酸氨基葡萄糖合成酶突变基因是由大肠杆菌W3110菌株来源的野生型6-磷酸氨基葡萄糖合成酶基因突变成A38T/R249C/G471S突变体获得。本发明专利技术构建的基因工程菌具有N-乙酰氨基葡萄糖发酵产量高、菌种稳定性好的优点,具有广泛的工业应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种高效生产N-乙酰氨基葡萄糖的基因工程菌
本专利技术属于基因工程领域,具体地说,是关于一种高效生产N-乙酰氨基葡萄糖的 基因工程菌。
技术介绍
N-乙酰氨基葡萄糖(N-Acetylglucosamine,GlcNAc),又名 2-乙酰胺-2-脱 氧-D-葡萄糖(2-Acetamido_2-Deoxy-D-Dlucose),分子式:C8H 15N06,分子量:221. 0,烙点: 205°C,白色结晶粉末,易溶于水,结构式如下所示:

【技术保护点】
一种高效生产N‑乙酰氨基葡萄糖的基因工程菌,其特征在于,所述基因工程菌是将大肠杆菌的染色体缺失nagDCABE基因簇并整合分别由T7启动子和Trc启动子介导的6‑磷酸氨基葡萄糖合成酶突变基因和N‑乙酰氨基葡萄糖转移酶基因串联基因表达盒获得,其中,所述6‑磷酸氨基葡萄糖合成酶突变基因是由大肠杆菌W3110菌株来源的野生型6‑磷酸氨基葡萄糖合成酶基因突变成A38T/R249C/G471S突变体获得。

【技术特征摘要】
1. 一种高效生产N-乙酰氨基葡萄糖的基因工程菌,其特征在于,所述基因工程菌是将 大肠杆菌的染色体缺失nagDCABE基因簇并整合分别由T7启动子和Trc启动子介导的6-磷 酸氨基葡萄糖合成酶突变基因和N-乙酰氨基葡萄糖转移酶基因串联基因表达盒获得,其 中,所述6-磷酸氨基葡萄糖合成酶突变基因是由大肠杆菌W3110菌株来源的野生型6-磷 酸氨基葡萄糖合成酶基因突变成A38T/R249C/G471S突变体获得。2. 如权利要求1所述的基因工程菌,其特征在于,所述大肠杆菌为大肠杆菌 W3110(DE3)菌株。3. 如权利要求1所述的基因工程菌,其特征在于,所述N-乙酰氨基葡萄糖转移酶基因 来源自酿酒酵母。4. 如权利要求1所述的基因工程菌,其特征在于,所述T7启动子来源自pET-28a (+)质 粒,所述Trc启动子来源自pTrc99a质粒。5. 如权利要求1所述的基因工程菌,其特征在于,所述T7启动子介导的6-磷酸氨基葡 萄糖合成酶突变基因和N-乙酰氨基葡萄糖转移酶基因串联基因表达盒整合于大肠杆菌染 色体的fuel基因内。6. 如权利要求1所述的基因工程菌,其特征在于,所述Trc启动子介导的6-磷酸氨基 葡萄糖合成酶突变基因和N-乙酰氨基葡萄糖转移酶基因串联基因表达盒整合于大肠杆菌 染色体的yabp基因内。7. 如权利要求1?6中任一项所述的基因工程菌,其特征在于,所述基因工程菌的保藏 号为 CCTCC M2014383。8. 如权利要求1?6中任一项所述的基因工程菌的应用,其特征在于,用于发酵生产 N-乙酰氨基葡萄糖。9. 如权利要求7所述的基因工程菌的应用,其特征在于,用于发酵生产N-乙酰氨基葡 萄糖。10. 如权利要求8所述的基因工程菌的应用,其特征在于,所述发酵的条件如下: 种子培养基:ΚΗ2Ρ04 0· 6% (w/v),Κ2ΗΡ04 · 3Η203· 145% (w/v),柠檬酸钠· 2Η200· 1 % (w/v),硫酸铵 1 % (w/v),MgS04 .71^00.061% (w/v),CaCl2 0.003% (w/v),葡萄糖 2 % (w/ v),微量元素母液0.01% (v/v); 发酵培养基:ΚΗ2Ρ04 0· 66...

【专利技术属性】
技术研发人员:陶荣盛朱傅赟杨晟范文超柳鹏福陈成王祎沈正权丁鹏蒋宇
申请(专利权)人:上海工业生物技术研发中心中国科学院上海生命科学研究院湖州工业生物技术中心
类型:发明
国别省市:上海;31

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