本发明专利技术涉及抗人髓系相关分化标志蛋白的单克隆抗体DS6及其应用。首次找到一种特异性抗人髓系相关分化标志蛋白(hMYADM)的单克隆抗体。所述的单克隆抗体可良好地识别hMYADM抗原，不与其它蛋白发生交叉反应，特异性和灵敏度均非常高。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及抗人髓系相关分化标志蛋白的单克隆抗体DS6及其应用。首次找到一种特异性抗人髓系相关分化标志蛋白(hMYADM)的单克隆抗体。所述的单克隆抗体可良好地识别hMYADM抗原，不与其它蛋白发生交叉反应，特异性和灵敏度均非常高。CCTCC NO：C2013332013.04.03CCTCC NO：C2013322013.04.03【专利说明】抗人髓系相关分化标志蛋白的单克隆抗体DS6及其应用
本专利技术属于生物工程领域，涉及抗人髓系相关分化标志（hMYADM)蛋白的单克隆 抗体的制备及应用。
技术介绍
造血谱系的发生是一个非常复杂的生物学过程，其特征在于基因表达的特征性改 变，导致的阶段特异性的表型和功能变化。造血干细胞分化异常可能导致白血病和其他血 液系统疾病的发生。在过去的几十年里，对于参与造血发生的细胞因子、生长因子及其受体 和转录因子家族的鉴定已经取得了很大的进展。造血发生的过程可能涉及到的几个关键变 量，包括转录因子作用，染色质可接近性、生长因子受体，以及发生这些遗传改变的细胞整 体环境。然而，对多能祖细胞系的选择的分子机制仍不清楚。对参与造血干细胞谱系发生的 基因进行研究将为造血分化机制提供新的观点，并有助于阐明许多造血障碍的发生原因。 多能造血干细胞具有选择性表达多个淋巴系或髓系细胞分化的谱系特异性程序的能力。目 前认为，特定谱系造血细胞的发生涉及到一些种系特异性基因的改变。而一个或几个调节 性或"关键"基因的活化即可完全启动并调控谱系特异性基因程序。因此研究造血发生中 的特征性分子改变对深入阐明造血细胞的分化发育、体内迁移、生物学作用及其分子机理 具有重大意义，可为认识疾病（如白血病）发生发展的机制提供新的角度，也可能为疾病的 防治提供新的思路和手段。 髓系相关分化标记（MYADM)是近年来鉴定得到的一种表达在造血干细胞分化的 特定阶段的标志物蛋白，属于MAL蛋白家族成员。在MYADM蛋白序列中特征性地存在8个 跨膜区，形成2个MARVEL串联排列，其优势分布于细胞膜上。小鼠 MYADM (mMYADM)在原始 造血祖细胞向特定细胞诱导分化时表达上调，在向B细胞祖细胞分化的条件下表达下调。 反义寡核苷酸抑制其表达可导致小鼠骨髓粒细胞集落形成的大幅减少，提示mMYADM在髓 系细胞的分化过程中发挥着重要的生理作用（Pettersson，M?等，J Leukoc Biol. 2000， 67:423-431 ;Dannaeus，K?等，Mol Biol R印? 2005, 32:149-157)。人源 MYADM(hMYADM)选 择性表达在外周血来源的髓系细胞以及髓系白血病细胞，在PMA诱导髓系白血病细胞分化 以及骨髓⑶34+细胞向粒、单核细胞分化中，hMYADM的表达明显上调（Wang，Q.等，Life Sci. 2007, 80:420-429.)。在全反式维甲酸诱导前髓系白血病Nb4细胞分化时表达显著升 高（Cui，W.等，Mol Biol R印.2001,28:123-138)。在人转移性黑色素瘤临床标本中也检测 到 MYADM 表达的改变（de Wit，NJ.等，Br J Cancer. 2005,92:2249-2261)。这些结果较充 分地揭该分子是与髓系分化发育密切相关的细胞表面标志，有可能在白血病的发病机制 以及诱导分化中起着重要作用。 MYADM 分子可能有望获得新的 CD 统一命名。CD (cluster of differentiation，白 细胞分化抗原）是白细胞在正常或刺激后分化和成熟过程中的某个阶段出现或消失的细 胞表面标志，不同的细胞类群分化的特异性表达标志构成不同的生物学功能和临床意义， 许多CD分子都是有功能的分子，包括受体、酶、粘附分子、信号转导分子、离子通道、调节分 子等，在造血细胞的分化、发育、激活、免疫应答以及疾病的发生中发挥着极其重要的作用， CD分子还用于白血病的免疫学分型，而且可能作为新药设计的靶点。如CD33已经成为诊 断急性髓系白血病（AML)，尤其是未分化型AML的重要标志，同时可用于区分AML与淋巴系 白血病。抗⑶33单抗已应用于治疗AML的临床I期研究，可选择性去除恶性造血，回复正 常造血过程（Caligaris-Cappio, F?等，Lancet. 2001，358:49-55)。每一个新 CD 抗体的出 现，意味着新抗原相应编码基因及功能的阐明。随着对细胞分化抗原分子研究的不断深入， 可阐明一些造血细胞分化发育过程的理论问题，并将对疾病发病机理、诊断、预后及疗效判 定等方面的研究起到极大的推动作用。 制备hMYADM的单克隆抗体，对进一步深入研究其功能具有重要意义，可应用于不 同细胞和组织中该分子的检测，有可能揭示该新分子在临床疾病防治中的可能应用前景， 丰富造血细胞分化发育过程的基础理论研究，并对疾病发病机理、诊断、预后及疗效判定等 方面的研究起到启发作用。 然而，本领域目前还缺乏特异性的、可良好识别hMYADM的单克隆抗体。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供抗人髓系相关分化标志蛋白的单克隆抗体及其应用。 在本专利技术的第一方面，提供一种分离的多肽，该多肽来源于人髓系相关分化标志 蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO: 1所示。 在本专利技术的另一方面，提供所述的多肽的用途，用于作为抗原，制备特异性检测人 髓系相关分化标志蛋白的单克隆抗体。 在本专利技术的另一方面，提供一种单克隆抗体，其是由保藏号为CCTCC N0:C201333(DS6)的杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体。 在另一优选例中，所述单克隆抗体由所述的多肽免疫动物获得。 在本专利技术的另一方面，提供所述的单克隆抗体的用途，用于制备特异性检测人髓 系相关分化标志蛋白的检测试剂盒。 在一个优选例中，所述的检测人髓系相关分化标志蛋白包括：（1)定性检测人髓 系相关分化标志蛋白；或（2)定量检测人髓系相关分化标志蛋白； 较佳地，所述的定性检测包括：通过免疫印迹方法或免疫荧光的方法鉴定人髓系 相关分化标志蛋白的存在情况； 较佳地，所述的定量检测包括：通过流式细胞方法对人髓系相关分化标志蛋白表 达的强度或阳性细胞率进行定量，或通过双抗体夹心ELISA法对人髓系相关分化标志蛋白 表达的强度进行定量。 在本专利技术的另一方面，提供一种杂交瘤细胞株，其在中国典型培养物保藏中心的 保藏号是 CCTCC N0:C201333。 在本专利技术的另一方面，提供一种检测试剂盒，其中包括所述的单克隆抗体或所述 的杂交瘤细胞株。 在一个优选例中，所述的试剂盒中还包括：另一单克隆抗体，该另一单克隆抗体是 特异性抗人髓系相关分化标志蛋白的单克隆抗体，其由保藏号为CCTCC N0:C201332(FMA1) 的杂交瘤细胞株产生。 在另一优选例中，所述的试剂盒中还包括：固相载体（如多孔板）；较佳地，权利要 求3所述的单克隆抗体包被于所述的固相载体；较佳的，所述的另一抗体还连接有标记物。 在另一优选例中，所述的标记物选自：辣根过氧化物酶、碱性磷酸酯酶、葡萄糖氧 化酶、3 -D-半乳糖苷酶、脲酶本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分离的多肽，其特征在于，该多肽来源于人髓系相关分化标志蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李楠，曹雪涛，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：上海;31
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