提高截短侧耳素产量的方法技术

本发明专利技术提供了提高截短侧耳素产量的方法。具体地，本发明专利技术提供了一种改良截短侧耳素生产菌株的方法，该方法适用范围广，效率高。本发明专利技术还提供了一种经改良的截短侧耳素生产菌株。由于采用新颖的经改良的截短侧耳素生产菌，因此可大幅提高截短侧耳素产量。此外，本发明专利技术还提供了一种截短侧耳素的生产方法，由于该生产方法对现有生产工艺可不进行修改和调整，因此成本低。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供了。具体地，本专利技术提供了一种改良截短侧耳素生产菌株的方法，该方法适用范围广，效率高。本专利技术还提供了一种经改良的截短侧耳素生产菌株。由于采用新颖的经改良的截短侧耳素生产菌，因此可大幅提高截短侧耳素产量。此外，本专利技术还提供了一种截短侧耳素的生产方法，由于该生产方法对现有生产工艺可不进行修改和调整，因此成本低。【专利说明】
本领域涉及生物
，具体地，涉及了一种提高截短侧耳素（Pleuromutilin) 产量的方法。
技术介绍
截短侧耳素是化学合成泰妙菌素（Tiamulin)的前体，分子式为C22H 34O5，分子量为 378. 51，属二廠类化合物，是高等真菌担子菌侧耳属（Pleurotus mutilus)或其它真菌的次 级代谢产物，是一种天然的具有广泛抗菌活性的二萜类化合物。 虽然我国截短侧耳素的产能大，虽然本领域已经有利用不同的生物体来生产截短 侧耳素的技术，然而生产菌株的效价水平较低，增加了生产的成本。这大大限制了截短侧耳 素的应用。 综上所述，本领域迫切需要开发有效的。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种有效的。 本专利技术提供了通过辅酶因子再生从而。 在本专利技术的第一方面提供了一种双酶偶联的构建物，所述构建物包括： (a)用于生产外源酮基还原酶（KR)的第一亚构建物， 其中所述的第一亚构建物包括第一启动子、与所述第一启动子可操作地连接的酮 基还原酶的编码序列、和终止密码子； (b)用于生产外源葡萄糖脱氢酶（⑶H)的第二亚构建物， 其中所述的第二亚构建物包括第二启动子、与所述第二启动子可操作地连接的酮 基还原酶的编码序列、和终止密码子， 其中所述的第一亚构建物和第二亚构建物是相互独立的、或是一体的。 在另一优选例中，所述的酮基还原酶（KR)来源于来源于酿酒酵母、黑曲霉、紫杉、 双孢蘑菇、或肠膜明串珠菌。 更佳地，所述的酮基还原酶选自下组： 来源于酿酒酵母的HMGR(Y); 来源于黑曲霉的HMGR(A); 来源于紫杉的HMGR(T); 来源于双孢蘑菇的HMGR(B); 来源于肠膜明串珠菌亚种 J18 (Leuconostoc mesenteroides subsp. mesenteroides Strain J18)的 HMGR(L)。 在另一优选例中，所述的葡萄糖脱氢酶（GDH)来源于枯草芽孢杆菌、巨大枯草芽 孢杆菌的葡萄糖脱氢酶、酿酒酵母、黑曲霉、紫杉。 更佳地，所述的葡萄糖脱氢酶（⑶H)选自下组： 来源于枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)的葡萄糖脱氢酶（Glucose Dehydrogenase GDH(B))； 来源于巨大枯草芽孢杆菌的葡萄糖脱氢酶（Glucose Dehydrogenase⑶H(M)); 来源于酿酒酵母的葡萄糖脱氢酶（Glucose Dehydrogenase⑶H(Y)); 来源于黑曲霉的葡萄糖脱氢酶（Glucose Dehydrogenase⑶H(A); 来源于紫杉的葡萄糖脱氢酶（Glucose Dehydrogenase⑶H(T)。 在另一优选例中，所述的酮基还原酶（KR)和葡萄糖脱氢酶（GDH)选自下列组合： 来源于酿酒酵母的HMGR(Y)与来源于枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)的葡萄 糖脱氢酶（Glucose Dehydrogenase ⑶H(B))组合成的 HMGR(Y)-GDH(B)偶联组合； 来源于黑曲霉的HMGR(A)与来源于枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)的葡萄糖 脱氢酶（Glucose Dehydrogenase ⑶H(B))组合成的 HMGR(A)-GDH(B)偶联组合； 来源于紫杉的HMGR(T)与来源于枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)的葡萄糖脱 氢酶（Glucose Dehydrogenase ⑶H(B))组合成的 HMGR(T)-GDH(B)偶联组合； 来源于双孢蘑菇的HMGR(B)与来源于枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)的葡萄 糖脱氢酶（Glucose Dehydrogenase ⑶H(B))组合成的 HMGR(B)-GDH(B)偶联组合； 来源于肠膜明串珠菌亚种 J18 (Leuconostoc mesenteroides subsp. mesenteroides Strain J18)的 HMGR(L)与来源于枯草芽抱杆菌（Bacillus subtilis)的 葡萄糖脱氢酶（Glucose Dehydrogenase⑶H(B))组合成的HMGR(L)-GDH(B)偶联组合； 来源于酿酒酵母的HMGR(Y)与来源于巨大枯草芽孢杆菌的葡萄糖脱氢酶 (Glucose Dehydrogenase GDH(M))组合成的 HMGR(Y)-GDH(M)偶联组合； 来源于酿酒酵母的HMGR (Y)与来源于酿酒酵母的葡萄糖脱氢酶（Glucose Dehydrogenase ⑶H(Y))组合成的 HMGR(Y)-GDH(Y)偶联组合； 来源于酿酒酵母的HMGR(Y)与来源于黑曲霉的葡萄糖脱氢酶（Glucose Dehydrogenase GDH(A)组合成的 HMGR(Y)-GDH(A)偶联组合； 来源于酿酒酵母的HMGR(Y)与来源于紫杉的葡萄糖脱氢酶（Glucose Dehydrogenase ⑶H(T))组合成的 HMGR(Y)-GDH(T)偶联组合。 在本专利技术第二方面，提供了一种载体，所述表达载体携带本专利技术第一方面所述的 构建物。 在本专利技术第三方面，提供了一种载体组合，所述载体组合包括第一载体和第二载 体，其中第一载体携带本专利技术第一方面所述的构建物的第一亚构建物，而第二载体携带本 专利技术第一方面所述的构建物的第二亚构建物。 在本专利技术的第四方面，提供了一种基因工程的细胞，所述细胞含有本专利技术第三方 面所述的载体或第四方面所述的载体组合。 在本专利技术的第五方面，提供了一种基因工程细胞，所述细胞的基因组中整合有本 专利技术第一方面所述的构建物；或者 所述细胞的基因组中整合有（a)用于表达外源酮基还原酶（KR)的第一表达盒和 (b)用于表达外源葡萄糖脱氢酶（⑶H)的第二表达盒， 其中所述的第一表达盒包括第一启动子、与所述第一启动子可操作地连接的酮基 还原酶的编码序列、和终止密码子； 所述的第二表达盒包括第二启动子、与所述第二启动子可操作地连接的酮基还原 酶的编码序列、和终止密码子。 在另一优选例中，所述的细胞是生产截短侧耳素的工程菌。 在另一优选例中，所述的细胞为底盘细胞；较佳地，所述细胞选自下组：斜盖 燕（Clitopilus prunulus)、担子菌侧耳属（Pleurotus mutilus)、截短侧耳素产生斜 盖 ? (Clitopilus passeckerianus)、猴头 ? (Hericium erinaceus)、灵芝（Ganoderma lucidum)、云芝（Coriolus versicolor)等高等真菌。 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种双酶偶联的构建物，其特征在于，所述构建物包括：(a)用于生产外源酮基还原酶(KR)的第一亚构建物，其中所述的第一亚构建物包括第一启动子、与所述第一启动子可操作地连接的酮基还原酶的编码序列、和终止密码子；(b)用于生产外源葡萄糖脱氢酶(GDH)的第二亚构建物，其中所述的第二亚构建物包括第二启动子、与所述第二启动子可操作地连接的酮基还原酶的编码序列、和终止密码子，其中所述的第一亚构建物和第二亚构建物是相互独立的、或是一体的。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李平作，王莉，郅晓乐，叶晴，赵国屏，
申请(专利权)人：中国科学院上海生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：上海;31