本发明专利技术涉及一种繁殖石仙桃的方法，特别涉及一种以石仙桃根状茎为外植体快速繁殖石仙桃的方法，属于植物组织培养技术领域。一种以石仙桃根茎芽为外植体快速繁殖石仙桃的方法，所述的方法包括以下依序进行的步骤：(1)外植体的准备阶段：于每年11月至次年的4月采集石仙桃，除去假鳞茎，将根茎上带有根状茎的顶芽或腋芽作为外植体切下，去除根状茎上覆盖的老鳞片和根，备用；(2)无菌处理阶段；(3)初代培养阶段；(4)继代壮苗培养阶段；(5)生根培养阶段；本发明专利技术所提供的方法能有效提高石仙桃的繁殖效率，获得足量石仙桃再生植株，为其规模化生产应用奠定基础。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及一种繁殖石仙桃的方法，特别涉及一种，属于植物组织培养
。一种以石仙桃根茎芽为外植体快速繁殖石仙桃的方法，所述的方法包括以下依序进行的步骤：(1)外植体的准备阶段：于每年11月至次年的4月采集石仙桃，除去假鳞茎，将根茎上带有根状茎的顶芽或腋芽作为外植体切下，去除根状茎上覆盖的老鳞片和根，备用；(2)无菌处理阶段；(3)初代培养阶段；(4)继代壮苗培养阶段；(5)生根培养阶段；本专利技术所提供的方法能有效提高石仙桃的繁殖效率，获得足量石仙桃再生植株，为其规模化生产应用奠定基础。【专利说明】
本专利技术涉及一种繁殖石仙桃的方法，特别涉及一种以石仙桃根状茎为外植体快速 繁殖石仙桃的方法，属于植物组织培养
。
技术介绍
石仙桃（Pholidota chinensis Lindl.)系兰科（Orchidaceae)石仙桃属 (Pholidota)多年附生草本植物，俗称石橄榄。植株高15-25 cm，根状茎粗壮，横走，具多， 数须根；假鳞茎卵状长圆形或长圆形，长2-7 cm，粗0. 5-2. 5 cm，顶端具2片叶。叶倒卵状披 针形、倒卵形或倒卵状椭圆形，长8-18 cm，宽2-5 cm，顶端急尖或渐尖，基本下延成长柄，通 常有较明显的弧形脉3-5条。花葶长于假鳞茎顶端，直立或多少下垂，基部具多枚鳞片；总 装花序顶生，具数朵至20朵花；花苞片2列，淡褐色或淡紫红色，卵形或卵状披针形，长1-2 cm，顶端钝或尖，边缘多少内卷；花白色或带黄绿色，唇瓣上有褐色条纹；萼片卵形，分离， 近等大，长约8 mm，宽4-5 mm，顶端钝；花瓣线状披针形，与萼片近等长，宽约I. 5 mm ;唇瓣卵 状圆形,长约8 mm，基部凹陷成杯状或囊状，顶端3裂，中裂片扁圆形，长约3 mm，宽约4 mm，顶 端钝，具小尖头，外弯，侧裂片半圆形；蕊柱长4-5 mm，有狭翅；子房连花梗长6-9 mm。果倒卵 形，长2-3cm，具6条纵翅。花期4-6月。果期11月至翌年2月（林来官，张永田等.福 建植物志.福州：福建科学技术出版社，1994,第六卷：636-637)。在我国分布于福建、 广东、广西、云南等省，在福建省主要分布于福州、平和、长乐、南靖等地区。生于林中或林缘 树上、岩壁上或岩石上，海拔通常在1500m以下，少数可达2500m(陈心启，吉占和，郎偕永 等.中国植物志.北京：科学出版社，1999, 18:388-399)。 石仙桃作为中草药具有悠久的历史，始载于《生草药性备要》。以全草或假鳞茎入 药，其性甘味凉，具有养阴、清热、利湿消瘀的功效（南京中医药大学.中药大辞典.上 海：上海科学出版社，2006)，民间常用来治疗高血压、头晕和各种原因引起的头疼等。用其 制成的"头痛定糖浆"临床上用于治疗神经功能性头痛、脑震荡后遗症，已应用多年，治疗效 果良好（中华人民共和国药典委员会.中药成方制剂（第九册）.北京：北京化学工业出 版社，1994:67)。 近几年对其药理进行了比较多的研究，报道其在镇静、催眠、抗癌、抗疲劳等方面 都有作用（刘建新，周青，连其深.石仙桃对中枢神经系统抑制作用.赣南医学院学 报，2004, 24(2) :119-121;王光辉，郭晓宇，王乃利等.云南石仙桃氯仿萃取物活性部位 对入肝癌细胞H印G2的周期抑制作用.沈阳药科大学学报，2006, 23(4) :240-243 ;刘建新， 周青，连其深.石仙桃的镇痛作用的研究.赣南医学院学报，2002, 22(2) :105-107)。同时 现在对其化学成分做了不同方法的提取和分离，得到天麻苷元、原儿茶醛、胡萝卜苷等化学 成分（舒文海.石仙桃的局麻作用研究.中国药学杂志，1989, 24(5):304;林丽聪，张怡 评，吴春敏等.石仙桃叶化学成分研究.时珍国医国药，2009, 20(4) :922-923;李兵，郭环 娟，容羡贤.石仙桃质量标准研究.中国药业，2010, 19 (6) : 19-20 ;林丽聪，吴春敏，陈 海滨等.RP - HPLC法测定石仙桃中天麻素和天麻苷元.中草药.2008, 39 (2) : 283-285)。 随着临床对石仙桃研究的深入和新功能的开发，人们的需求量与日俱增，但由于 其生长缓慢、生物量小、自然繁殖率低、对生长环境要求苛刻，自然资源贮藏量及可开发利 用量非常有限，长期掠夺式采挖野生资源，已导致野生资源锐减并逐渐匮乏，不少原产地石 仙桃资源呈现稀缺趋势，因此人工栽培迫在眉睫。而充足的种苗供给是实现石仙桃人工栽 培的第一个瓶颈，并且现有技术中关于石仙桃繁殖的方法效率极低，为此本专利技术对石仙桃 的繁殖方法进行了研究。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种，以 解决现有技术中存在的上述问题，本专利技术所提供的方法能有效提高石仙桃的繁殖效率，获 得足量石仙桃再生植株，为其规模化生产应用奠定基础。 本专利技术的技术方案如下： -种以石仙桃根茎芽为外植体快速繁殖石仙桃的方法，所述的方法包括以下依序 进行的步骤： (1)外植体的准备阶段 于每年11月至次年的4月采集石仙桃，除去假鳞莖，将根茎上带有根状茎的顶芽 或腋芽作为外植体切下，去除根状茎上覆盖的老鳞片和根，备用； (2)无菌处理阶段，包括以下依序进行的步骤： ①将步骤（1)中所准备的外植体先用清水冲洗干净后，去掉多余的根茎，使每个 芽上仅保留2毫米以下的根茎； ②接着转移到灭菌后的超净工作台上，用无菌水冲洗后，转入到无菌瓶内； ③接着再用体积百分比浓度为70% -75%的酒精灭菌2-3分钟后，用无菌水冲 洗； ④之后倒入质量百分比浓度为0. 05-0. 15%的升汞灭菌10-16分钟； ⑤最后再用无菌水冲洗后，放入盛有无菌滤纸的盘子里，将外植体上的顶芽或腋 芽表面的水吸干，备用； (3)初代培养阶段 将步骤（2)中无菌处理好的外植体，接种到初代培养基进行初代培养；培养环境 温度为23±5°C，光照强度为2500-3500Lux，光照周期为10-14h/d，培养周期为70-90天； 所述初代培养基为：MS 培养基 +0? 5-1. Omg/L 的 NAA+3. 0-4. Omg/L 的 6-BA+1-3% 的蔗糖+0.6-1. 0%的琼脂，pH值为5. 8-6.0 ;其中，NAA是a-萘乙酸；6-BA是6-苄氨基腺 嘌呤； MS培养基的基本组成如下表所述： 【权利要求】1. 一种以石仙桃根茎芽为外植体快速繁殖石仙桃的方法，其特征在于：所述的方法包 括以下依序进行的步骤： (1) 外植体的准备阶段 于每年11月至次年的4月采集石仙桃，除去假鳞茎，将根茎上带有根状茎的顶芽或腋 芽作为外植体切下，去除根状茎上覆盖的老鳞片和根，备用； (2) 无菌处理阶段，包括以下依序进行的步骤： ① 将步骤（1)中所准备的外植体先用清水冲洗干净，并去掉多余的根茎，使每个芽上 仅保留2毫米以下的根茎； ② 接着转移到灭菌后的超净工作台上，用无菌水冲洗后，转入到无菌瓶内； ③ 接着再用体积百分比浓度为70% -75%的酒精灭菌2-3分钟后，用无菌水冲洗； ④ 之后倒入质本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种以石仙桃根茎芽为外植体快速繁殖石仙桃的方法，其特征在于：所述的方法包括以下依序进行的步骤：(1)外植体的准备阶段于每年11月至次年的4月采集石仙桃，除去假鳞茎，将根茎上带有根状茎的顶芽或腋芽作为外植体切下，去除根状茎上覆盖的老鳞片和根，备用；(2)无菌处理阶段，包括以下依序进行的步骤：①将步骤(1)中所准备的外植体先用清水冲洗干净，并去掉多余的根茎，使每个芽上仅保留2毫米以下的根茎；②接着转移到灭菌后的超净工作台上，用无菌水冲洗后，转入到无菌瓶内；③接着再用体积百分比浓度为70％‑75％的酒精灭菌2‑3分钟后，用无菌水冲洗；④之后倒入质量百分比浓度为0.05‑0.15％的升汞灭菌10‑16分钟；⑤最后再用无菌水冲洗后，放入盛有无菌滤纸的盘子里，将外植体上的顶芽或腋芽表面的水吸干，备用；(3)初代培养阶段将步骤(2)中无菌处理好的外植体，接种到初代培养基进行初代培养；培养环境温度为23±5℃，光照强度为2500‑3500Lux，光照周期为10‑14h/d，培养周期为70‑90天；所述初代培养基为：MS培养基+0.5‑1.0mg/L的NAA+3.0‑4.0mg/L的6‑BA+1‑3％的蔗糖+0.6‑1.0％的琼脂，pH值为5.8‑6.0；(4)继代壮苗培养阶段将步骤(3)中初代培养后萌发的小芽，接种到继代壮苗培养基中进行继代壮苗培养；培养环境温度为23±5℃，光照强度为2500‑3500Lux，光照周期为10‑14h/d，培养周期为70‑100天；所述继代壮苗培养基为：MS培养基+0.5‑1.0mg/L的NAA+0.5‑1.0mg/L的6‑BA+50‑100g/L的香蕉+1‑3％的蔗糖+0.6‑1.0％的琼脂，pH值为5.8‑6.0；(5)生根培养阶段将步骤(4)中继代壮苗培养后生长的小苗，接种到生根培养基中进行生根培养；培养环境温度为23±5℃，光照强度为2500‑3500Lux，光照周期为10‑14h/d，培养周期为70‑100天；所述生根培养基为：1/2MS培养基+0.3‑0.5mg/L的NAA+30‑100g/L的香蕉+0.3‑0.5g/L的活性炭+1‑3％的蔗糖+0.6‑1.0％的琼脂，pH值为5.8‑6.0。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈菁瑛，刘保财，黄颖桢，赵云青，
申请(专利权)人：福建省农业科学院农业生物资源研究所，
类型：发明
国别省市：福建;35
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