本发明专利技术属于生物医药领域，涉及5-FU耐药性检测试剂及5-FU耐药逆转剂，更具体地说，涉及MSK1相关制剂在制备5-FU耐药性检测试剂及5-FU耐药逆转剂方面的应用。5-FU药物耐药性/敏感性与细胞MSK1表达量之间具有显著的关联性。当细胞低表达MSK1时，对5-FU药物的敏感性高；反之，当细胞高表达MSK1时，对5-FU药物的敏感性降低。本发明专利技术首次提供了MSK1表达量检测试剂或测试系统在制备5-FU药物耐药性/敏感性检测试剂中的应用；以及MSK1表达抑制剂在制备5-FU药物增敏剂/耐药逆转剂方面的应用。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术属于生物医药领域，涉及5-FU耐药性检测试剂及5-FU耐药逆转剂，更具体地说，涉及MSK1相关制剂在制备5-FU耐药性检测试剂及5-FU耐药逆转剂方面的应用。5-FU药物耐药性/敏感性与细胞MSK1表达量之间具有显著的关联性。当细胞低表达MSK1时，对5-FU药物的敏感性高；反之，当细胞高表达MSK1时，对5-FU药物的敏感性降低。本专利技术首次提供了MSK1表达量检测试剂或测试系统在制备5-FU药物耐药性/敏感性检测试剂中的应用；以及MSK1表达抑制剂在制备5-FU药物增敏剂/耐药逆转剂方面的应用。【专利说明】针对MSK1基因的相关制剂在制备5-FU耐药性检测试剂及 5-FU耐药逆转剂方面的应用
本专利技术属于生物医药领域，涉及5-FU耐药性检测试剂及5-FU耐药逆转剂。
技术介绍
化疗药5-FU用于治疗肿瘤已有40余年，可通过多种途径发挥作用，其中最主要的 作用方式是作为胸苷酸合成酶抑制剂，阻断DNA复制的必需原料--胸腺嘧啶的合成。胸 苷酸合成使单磷酸脱氧尿嘧啶（dUMP)发生甲基化从而变成单磷酸胸腺嘧啶（dTMP)。 与其它抗肿瘤药类似，5-FU作用于全身各个系统，快速分裂的细胞（如肿瘤细胞， 亦包括消化道上皮细胞以及生殖细胞）因其核酸合成活动活跃而受到的影响最大。 5-FU主要用于结直肠癌以及前列腺癌的治疗，数十年前就已建立了标准的化疗方 案。结直肠癌对5-FU的耐药机制主要有固有耐药和获得性耐药两种，随着化疗方案的进 行，获得性耐药一般很难逆转。 因此，在化疗前先对患者的5-FU耐药性进行一定的预测，以及开发5-FU药物增敏 齐U，具有突出的临床应用意义。
技术实现思路
本专利技术目的之一在于提供一种5-FU药物耐药性/敏感性检测试剂，可用以判断患 者对5-FU药物的耐药性/敏感性。 本专利技术的另一个目的在于提供一种5-FU药物增敏剂/耐药逆转剂，可用以提高患 者对5-FU药物的敏感性。 专利技术人通过研究发现，5-FU药物耐药性/敏感性与细胞MSK1表达量之间具有显著 的关联性。当细胞中MSK1表达量低时，对5-FU药物的敏感性高；反之，当细胞中MSK1表达 量高时，对5-FU药物的敏感性降低。 本专利技术首次提供了 MSK1检测试剂或测试系统在制备5-FU药物耐药性/敏感性 检测试剂中的应用。所述的MSK1检测试剂可以检测MSK1的表达量，可以是用以检测MSK1 mRNA或蛋白量的检测试剂。 优选地，所述的MSK1检测试剂或测试系统用于制备结直肠癌患者对5-FU药物的 耐药性/敏感性检测试剂。 在研究过程中，专利技术人以结直肠癌细胞作为主要研究对象，发现在结直肠癌细胞 中，MSK1表达量可以作为5-FU药物耐药性/敏感性的判断指标。 专利技术同时提供了一种用于判断结直肠癌患者对5-FU药物耐药性/敏感性的试剂 盒，含有MSK1检测试剂。 同时，专利技术提供了 MSK1抑制剂在制备5-FU药物增敏剂/耐药逆转剂方面的应用。 MSK1抑制剂可以用作结直肠癌患者对5-FU药物的药物增敏剂/耐药逆转剂。 作为可选的方案，MSK1抑制剂可以是现有的能抑制或降低MSK1表达水平的物质， 例如针对MSK1基因的shRNA干扰片段、小分子化合物抑制剂等。 专利技术还提供了一种治疗癌症的药物，含有5-FU药物和MSK1抑制剂。所述癌症为 已知的可采用5-FU药物进行治疗的癌症，例如结直肠癌、消化道肿瘤、乳腺癌、卵巢癌、绒 毛膜上皮癌、子宫颈癌、肝癌、膀胱癌、皮肤癌等。 专利技术人发现，当通过基因工程手段将原本低表达MSK1蛋白的野生型结直肠癌细 胞改造为高表达MSK1蛋白的细胞时，其对5-FU药物的敏感性降低，IC50值明显提高。而 当将原本高表达MSK1蛋白的野生型结直肠癌细胞改造为低表达MSK1蛋白的细胞时，则对 5-FU药物的敏感性提高，IC50值明显降低，可以降低给药量。 因此，MSK1表达量高低可以作为患者对5-FU药物敏感性判断的一个重要指标。同 时，在给患者采用5-FU药物治疗时，同时给以能降低或抑制MSK1蛋白表达的药物，将能提 高5-FU药物的敏感性，降低5-FU用药量及副作用。 在化疗前先对病人5-FU药物敏感性的预测，对于不敏感的病人进行一定手段的 干预，可以进一步减少获得性耐药的产生，从而减少由于盲目增大药物用量而引起的毒副 作用。 【专利附图】【附图说明】 图1为能表达针对MSK1基因的shRNA干扰片段的质粒图谱 图2为能表达对所有基因均无干扰效果的对照shRNA的质粒图谱 图3为超表达MSK1基因的质粒的图谱 图4为未插入外源基因的空载体对照质粒的图谱 图5为MSK1蛋白表达量的Western鉴定实验结果，A为HCT116细胞对照组及实 验组结果；B为Cac 〇2细胞对照组及实验组结果 图6为半数致死量5-FU浓度比较；A为HCT116实验组及对照组结果；B为Caco2 实验组及对照组结果 【具体实施方式】 以下实施方式是对本专利技术作进一步说明，但本专利技术的实施方式不局限于以下的实 施例介绍，凡依照本专利技术的原理或理念所作的等同的变化或变通都应视为本专利技术保护的范 畴。 实施例1 MSK1高表达/低表达细胞株的构建 本实施例以两种结直肠癌细胞：野生型Cac〇2(本身为MSK1蛋白低表达细胞）和 野生型HCT116细胞（本身为MSK1蛋白高表达细胞）为研究对象，进一步构建MSK1蛋白高 表达的Caco2细胞（本专利记为Caco2-MSKl细胞），以及MSK1蛋白低表达的HCT116细胞 (本专利记为HCT116-shMSKl细胞）。 超表达MSK1基因的质粒构建委托上海生博生物医药科技有限公司完成，用于制 备慢病毒后感染野生型Cac 〇2细胞；表达干扰MSK1基因 shRNA片段的质粒构建委托长沙赢 润生物技术有限公司完成，直接转染野生型HCT116细胞；作为对照组所采用的对照细胞， 以空载体对照质粒制备慢病毒后感染野生型Cac 〇2细胞，成为Cac〇2对照细胞（本专利记 为Cac〇2-Ctrl细胞）；另外以对照shRNA质粒（对所有基因均无干扰效果）转染野生型 HCT116细胞，成为HCT116对照细胞（本专利记为HCT116-shCtrl)。上述质粒图谱分别如 图1-4所示。 慢病毒感染Caco2细胞流程： 1、六孔板中每孔接种5X 104野生型Caco2细胞，用DMEM/F12培养基（Gibco,货号 C11330500BT)培养 24h，长到 50% -60%。 2、第二天，每孔吸弃300ul培养基。解冻病毒液。 3、用培养基直接稀释病毒液，使得病毒的感染复数（Μ0Ι)为100。 4、配制好感染复数（Μ0Ι)为100的病毒液后，向其中加入Polybrene感染添加剂 至终浓度8ug/ml，将病毒液与细胞混匀后放入37°C，C0 2培养箱。 5、6h后每孔加入300ul细胞培养液，感染至48h后换液。 6、用终浓度为0. 5ug/ml的嘌呤霉素筛选实验组和对照组细胞。 质粒转染HCT116细胞流程： 1、六孔板中本文档来自技高网...
【技术保护点】
MSK1检测试剂或测试系统在制备5‑FU药物耐药性/敏感性检测试剂中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：汪建平，王磊，傅新晖，
申请(专利权)人：汪建平，王磊，傅新晖，
类型：发明
国别省市：广东;44
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