本发明专利技术属于可食动物产品转基因成分检测领域，具体涉及一种牛奶中α-乳清蛋白筛查试纸条及制备方法与应用，本发明专利技术与免疫胶体金技术有关。公开了一种用于快速检测转人α-乳清蛋白基因牛奶的免疫胶体金试纸条，在试纸条的PVC背衬上按顺序依次粘附有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫；结合垫上包被有抗hLALBA抗体-胶体金标记物，通过hLALBA免疫小鼠制备得到杂交瘤细胞株LB-001(保藏号为CCTCC NO：C2014157)，利用腹水法大量制得单抗；在硝酸纤维素膜上分别包被有hLALBA蛋白构成的检测线和山羊抗兔IgG的质控线。本发明专利技术的试纸条特异性强，操作简便，检测快速。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术属于可食动物产品转基因成分检测领域，具体涉及一种牛奶中α-乳清蛋白筛查试纸条及制备方法与应用，本专利技术与免疫胶体金技术有关。公开了一种用于快速检测转人α-乳清蛋白基因牛奶的免疫胶体金试纸条，在试纸条的PVC背衬上按顺序依次粘附有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫；结合垫上包被有抗hLALBA抗体-胶体金标记物，通过hLALBA免疫小鼠制备得到杂交瘤细胞株LB-001(保藏号为CCTCC NO：C2014157)，利用腹水法大量制得单抗；在硝酸纤维素膜上分别包被有hLALBA蛋白构成的检测线和山羊抗兔IgG的质控线。本专利技术的试纸条特异性强，操作简便，检测快速。CCTCC NO：C20141572014.08.13【专利说明】牛奶中人α-乳清蛋白筛查试纸条及制备方法与应用
本专利技术属于牛奶转基因成分的检测
，具体涉及一种转人α-乳清蛋白筛查试纸条及其制备方法。本专利技术与免疫胶体金检测技术有关。
技术介绍
转基因动物及转基因动物产品以其诱人的经济前景，显示出强大的生命力，其市场化将是不可扭转的时代趋势。然而，鉴于生物安全问题，转基因动物生产的各个环节都需受到严格的控制。因此，一套健全、科学、规范的安全评价体系是必不可少的。其中，可靠、准确的转基因检测方法是安全评价体系中的重环节。 在本专利技术申请以前，有资料报道中国农业大学已经成功研制出了一批转人α -乳清蛋白转基因奶牛及其他一些转基因奶牛。这标志着我国转基因奶牛新品种培育和动物乳腺生物反应器技术达到了国际先进水平，鉴于转人α-乳清蛋白基因奶牛生产技术的成熟以及其产品市场化的趋势，建立一种快速、简便的检测人α-乳清蛋白的方法，有很重要的必要性和紧迫性。 目前对于转基因成分的检测可从外源基因的核酸和蛋白质两个水平进行，从蛋白质水平进行转基因成分检测，具有必要性和可行性，这是因为:只有对目的蛋白质进行检测，才能反映外源基因的最终表达情况；对于生物反应器制得的蛋白产品，必须对蛋白质进行定性、定量以及生物活性分析；对蛋白质进行检测，蛋白质样品制样较核酸简单。诸多的蛋白质检测方法，大致可以分为4类:(1)基于蛋白质的物理化学特性的检测，如双向电泳、质谱、色谱等；(2)基于核酸与蛋白质之间的互作的检测，如邻位连接技术，是一种依赖于适配子(aptamer，能够特异地识别并结合蛋白质的DNA或RNA的总称)的检测技术(Mats G., Simon F., Michael T.,et al.A sense of closeness: protein detect1nby proximity ligat1n.Current Opin1n in B1technology, 2003, 14:82-86 ；SimonF., Mats G., Jonas J.,et al.Protein detect1n using proximity-dependent DNAligat1n assays .Nature, 2002, 20:473-477) ； (3)基于蛋白质与蛋白质之间的互作的检测，如常用的免疫检测方法，包括western blot, dot blot (不需专门的仪器,但是操作繁琐，不适合做批量检测)，ELISA(灵敏度高、特异性强、简单快速、稳定性好、便于自动化检测等特点，应用性强)，以及免疫组织化学染色法(具有特异性强、灵敏度高、定位准确的特点，便于进行功能研究，但是操作复杂、假阳性率高)等；(4)将对蛋白质的检测转化为核酸的检测，如 B1-bar code assay,灵敏度高(Khan S，Klein W，Mirkin CA, etal.Fluorescent and scanometric ultrasensitive detect1n technologies with theb1-bar code assay for alzheimer，s disease .Nanoscape, 2005，2 (I): 7-15)。上述提到的这些方法都比较费时费力，而且需要专业技术人员和专门的仪器设备，基本上只能在实验室完成，不便于基层推广。 胶体金免疫层析(gold-1mmunochromatographyassay GI CA)是 20 世纪 80 年代发展起来的一项新的免疫分析方式，是应用胶体金标记技术，以胶体金作为示踪物，应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。它具有简便，快速，特异性强，灵敏度高，费用低的优点。依据胶体金免疫层析技术，在转基因植物检测中，已经研制出了多种胶体金免疫层析快速检测试纸条。 鉴于转基因动物及其产品的应用前景，研发快速、灵敏、准确、安全、便捷的转基因动物及其产品的检测方法，为转基因动物安全评价及转基因动物的监测和监控提供技术支撑，对于转基因动物及其产品的安全管理具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种转人α -乳清蛋白筛查试纸条及其制备方法，本专利技术能准确快速检测出转基因牛奶中转人α-乳清蛋白(hLALBA)，不需要特殊设备，为基层检测人员提供一种快速简便的筛查牛奶中转人α-乳清蛋白基因的方法，本专利技术的方法同时也为转基因动物及其产品安全评价和管理提供借鉴。 本专利技术的总体技术路线图见图1所示。 本专利技术的技术方案如下: 一种检测牛奶中人α-乳清蛋白(hLALBA)的免疫胶体金筛查试纸条，包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和PVC背衬。在所述的塑料衬板上依次搭接粘帖的样品垫、金标垫、层析膜及吸水纸；所述的金标垫上包被有抗人α-乳清蛋白单克隆抗体，分泌该抗人α -乳清蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株LB-001，保藏在中国典型培养物保藏中心，其保藏号为:CCTCCN0:C2014157);所述的层析膜上分别包被有人α-乳清蛋白的检测线(Τ线)和山羊抗兔IgG的质控线(C线)； 上述人α-乳清蛋白(hLALBA)购自Sigma公司，货号:L7269 ;山羊抗兔IgG购自Sigma 公司，货号:91618 ； 申请人:提供了一种人α-乳清蛋白筛查试纸条的制备方法，其包括如下步骤: (I)抗hLALBA单克隆抗体的制备； (2)用柠檬酸钠与氯金酸反应制备胶体金； (3)将将保藏号为CCTCC NO:C2014157的杂交瘤细胞株LB-001分泌的抗人α -乳清蛋白单克隆抗体加入到步骤(I)制备的胶体金中，得到抗人α-乳清蛋白抗体-胶体金标记物； (4)将抗人α -乳清蛋白抗体-胶体金标记物包被到金标垫上； (5)将人α-乳清蛋白标准品包被到层析膜上构成检测线；并将山羊抗兔IgG包被到层析膜上构成质控线； (6)在所述的塑料衬板上依次搭接粘帖的样品垫、金标垫、层析膜及吸水纸，得到所述的检测牛奶中人α-乳清蛋白的免疫胶体金试纸条。 本专利技术的试纸条是由样品垫、金标垫、层析膜、吸水纸按图示的顺序依次粘附在塑料衬板上组装而成的。金标上包被有本专利技术制备的抗hLALBA抗体一胶体金标记物，层析膜上包被有检测线和质控线，其中检测线(T线)为购买的hLALBA蛋白标准品，质控线(C线)为自制的山羊抗兔IgG。所述样品垫、金标垫、层析膜、本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种转基因牛奶中人α‑乳清蛋白免疫胶体金筛查试纸条，包括样品垫、金标垫、层析膜、吸水纸和塑料衬板，其特征在于，在所述的塑料衬板上依次搭接粘帖有样品垫、金标垫、层析膜和吸水纸；所述的金标垫上包被有抗人α‑乳清蛋白单克隆抗体，分泌抗人α‑乳清蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株LB‑001，保藏在中国典型培养物保藏中心，其保藏号为CCTCC NO：C2014157；所述的层析膜上分别包被有人α‑乳清蛋白的检测线即T线和山羊抗兔IgG的质控线，即C线。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘榜，陶晨雨，石德时，张庆德，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42
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