本发明专利技术公开了一种新的考马斯亮蓝染色方法以及相关的固定液和染色液。所述考马斯亮蓝染色方法相关的固定液包含酸和醇，所述醇为甲醇和/或乙醇，所述酸为V乙酸：V磷酸＝1:1的混合酸；所述考马斯亮蓝染色方法相关的染色液包含质量体积浓度为0.05％～0.12％的考马斯亮蓝,体积百分含量为5％～20％的醇，体积百分含量为3％～10％的酸，质量体积浓度为3％～10％的硫酸铵。所述方法线性关系更好、质谱兼容性更好、胶体不易碎、基本无背景，并且减少了近一半的试剂用量，降低了染色成本，更加环保。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种新的考马斯亮蓝染色方法以及相关的固定液和染色液。所述考马斯亮蓝染色方法相关的固定液包含酸和醇，所述醇为甲醇和/或乙醇，所述酸为V乙酸：V磷酸＝1:1的混合酸；所述考马斯亮蓝染色方法相关的染色液包含质量体积浓度为0.05％～0.12％的考马斯亮蓝,体积百分含量为5％～20％的醇，体积百分含量为3％～10％的酸，质量体积浓度为3％～10％的硫酸铵。所述方法线性关系更好、质谱兼容性更好、胶体不易碎、基本无背景，并且减少了近一半的试剂用量，降低了染色成本，更加环保。【专利说明】考马斯亮蓝染色法及相关固定液和染色剂
本专利技术涉及凝胶电泳领域，更具体地涉及在凝胶电泳中使用的考马斯亮蓝染色的 相关试剂和方法。
技术介绍
凝胶电泳技术，尤其是单向SDS-PAGE凝胶电泳（1-DE )和二维凝胶电泳（2-DE ) 是目前蛋白质组学研究中使用范围最广泛的蛋白质分离技术。其定量的基础是利用某种 特定的染料对胶上的蛋白进行染色，然后基于染色强度对蛋白进行定量。因此，基于凝胶 定量的灵敏度、线性范围以及定量精度均高度依赖于蛋白染色水平。现有的染色方法主 要分为4种：有机染料染色、负染、银染以及荧光染料染色。其中，有机试剂染色以考马斯 亮蓝染色法（Coomasie brilliant blue，CBB)为代表，其在1963年被首次应用到醋酸 纤维素片上的蛋白染色（Fazekas De St.Groth，S.，Webster，R.G.，Datyne;r，A.，Two new staining procedures for quantitative estimation of proteins on electrophoretic strips . Biochim. Biophys. Actal963, 71，377 - 391 )，随后 Meyer 等使用甲醇 / 乙酸 /水的溶液配制CBB R250染色液为聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白染色（M. Pink，N. Venna，A. W. Rettenmeier, et al. CBB staining protocol with higher sensitivity and mass spectrometric compatibility· Electrophoresis，2010, 31，593-598.)。由于 CBB 染色 法简单易用，价格低廉，且与下游的蛋白质谱分析高度兼容，因而，已成为目前使用最广泛 的染色方法。然而，其主要的问题在于染色灵敏度不高，对低丰度蛋白质的显现较差。 自Groth等第一次使用考马斯亮蓝进行蛋白染色以来（Fazekas De St. Groth，S 等人，同上)，已有很多研究为提高其染色灵敏度进行了努力（Neuhoff V，Aix)ld N，Taube D，Ehrhard t W. Improved staining of proteins in polyacrylamide gels including isoelectric focusing gels with clear background at nanogram sensitivity using coomassie brilliant blue G_250and R-250. Electroph oresis1988;9:255 - 62 ； G.Candiano, M. Brusch, L. Musant, et al.Blue silver: A very sensitive colloidal Coomassie G_250staining for proteome analysis. Electrophoresis,2004,25,13 27-1333 ;M. Pink 等人，同上；Victoria J. Gauci，Matthew P. Padula，Jens R. Coorssen. Coomassie blue staining for high sensitivity gel-based proteomics. proteomics，2003, 90, 96-106)，其中Blue Silver被证明是更加灵敏的染色方法，该研究报 道其染色灵敏度能达到lng每蛋白条带（G. Candiano等人，同上)，但是通过肉眼判断的可 见条带下限在l〇ng左右。而且，该方法染色背景深，脱色时间较长，脱色过程中因为聚丙烯 酰胺的伸展而使胶体过度膨胀，易碎（M. Pink等人，同上)。 基于以上分析，本领域中需要可以显著增加现有的考马斯亮蓝染色法的灵敏度， 用量更少，与质谱兼容性更好的考马斯亮蓝染色法相关试剂以及使用其进行染色的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种在蛋白质组学研究领域中应用的经济环保的考马斯亮 蓝凝胶染色方法及其相应的凝胶固定液和染色剂，旨在形成新的染色方法，降低染色试剂 消耗，解决脱色困难的问题并具有较高的染色灵敏度，具有显著的经济环保特色。 为达此目的，本专利技术采用以下技术方案： 在第一方面，本专利技术提供了一种用于考马斯亮蓝染色的固定液，所述固定液包含 酸和醇，其中所述醇为甲醇和/或乙醇，所述酸为乙酸和磷酸体积比为1:1的混合酸。 在本专利技术的固定液中，所述醇的体积百分浓度可以为30%、31%、32%、33%、34%、35%、 36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49% 或 50%，优选为 35% ?45%， 最优选40%。 在本专利技术的固定液中，所述混合酸的体积百分浓度可以为8%?12%，优选为 9%-11%，最优选 10%。 在第二方面，本专利技术提供了一种考马斯亮蓝染色液，所述染色液包含质量体积浓 度为0. 05%?0. 12%，优选为0. 08%?0. 10%的考马斯亮蓝，体积百分含量为5%?20%， 优选为10%?15%的醇，体积百分含量为3%?10%，优选为5%的酸，质量体积浓度为3%? 10%，优选为5%的硫酸铵；其中所述考马斯亮蓝包括R250和G250中的至少一种；所述醇包 括甲醇和乙醇中的至少一种；所述的酸包括乙酸和磷酸中的至少一种。 在本专利技术的染色液中，所述醇可以为甲醇和/或乙醇。 在本专利技术的染色液中，所述酸可以为磷酸。 本专利技术的染色液可以包含质量体积浓度为0. 05%、0. 06%、0. 07%、0. 08%、0. 09%、 0. 10%、0. 11%或0. 12%的考马斯亮蓝。 本专利技术的染色液可以包含体积百分含量为5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、 14%或15%的醇。 本专利技术的染色液可以包含体积百分含量为3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%或10%的酸。 本专利技术的染色液可以包含体积百分含量为3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%或10%的硫酸 铵。 在第三方面，本专利技术提供了一种考马斯亮蓝染色方法，其特征在于，所述方法包括 将SDS-PAGE凝胶置于根据第一方面所述的固定液中进行固定和/或将SDS-PAGE凝胶置于 根本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于考马斯亮蓝染色的固定液，其特征在于，所述固定液包含酸和醇，其中所述醇为甲醇和/或乙醇，所述酸为V乙酸：V磷酸=1:1的混合酸。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：饶维桥，訾金，肖伟敏，张继远，饶媛，林梁，
申请(专利权)人：深圳华大基因研究院，
类型：发明
国别省市：广东;44
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