PIK3C2A蛋白在治疗肝癌药物中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种PIK3C2A蛋白在治疗肝癌药物中的应用。本发明专利技术首先通过Real-time PCR和蛋白质免疫印迹法测定肝癌组织和肝癌细胞株中PIK3C2A mRNA和蛋白的表达量，然后运用免疫组化法比较肝癌组织和临近非瘤肝组织(adjacent nontumorous liver tissue，ANLT)中PIK3C2A染色程度的差别，并结合临床随访资料，采用Kaplan-meier生存分析、Log-rank检验、Spearman相关性分析和COX回归的单/多因素相关性分析等统计学方法，明确PIK3C2A的表达水平与肝癌病理特征和不良预后之间的关系。采用慢病毒转染技术下调PIK3C2A的表达，并通过一系列的体内外功能实验验证PIK3C2A对肝癌细胞生长和迁移运动的调控作用。

【技术实现步骤摘要】
PIK3C2A蛋白在治疗肝癌药物中的应用
本专利技术涉及肝癌治疗领域，特别地，涉及一种PIK3C2A蛋白在治疗肝癌药物中的应用。
技术介绍
肝细胞癌变在全球男性恶性肿瘤中位列第二位，在女性恶性肿瘤中位列第六位，是全球第三位的恶性肿瘤死因，中国每年死亡病例数约占全球因肝癌死亡病例总数的55％，因此肝癌已成为限制中国人民健康水平进一步提高的一大障碍。随着肝癌手术技术的发展，以往位于手术禁区的肝肿瘤也可安全地施行手术切除。因此，肝脏肿瘤的切除率得到了显著的提高，加之围手术期处理技术的进步，肝癌患者术后并发症发生率和死亡率已显著下降。此外，以索拉菲尼为代表的分子靶向药物的问世和各种化学药物治疗与生物治疗方法的发展，进一步降低了肝癌病人的死亡率。但是，针对肝癌患者的长期随访结果显示，肝癌患者远期生存水平仍然没有得到根本改观，肝癌病人五年生存率仅约40％到50％，肝癌病人术后五年的复发和转移率则高达70～80％。大量的临床资料显示，肝癌的高侵袭转移能力和术后高复发转移率是影响肝癌病人长期生存的重要因素。现有技术中仍然没有很好的方法与手段预防肝癌术后复发转移。长期的科学研究表明，在肝癌的发生发展过程中很多细胞因子、癌基因和抑癌基因都会发生异常表达。目前针对肝癌分子机制的研究主要集中在肿瘤细胞的增殖、细胞膜上粘附因子的表达水平，细胞外多种多糖和蛋白的降解，肿瘤对血管和淋巴管的侵犯，细胞迁移和运动，诱导肿瘤血管新生生成等几个方面。目前的研究显示，在肿瘤发生和发展过程中细胞迁移与运动能力的提高是引起肿瘤侵犯周围组织和发生远处转移的关键因素。所以大量关于肿瘤调控机制的研究都侧重在肿瘤细胞的迁移和运动能力上。目前的研究仍远未阐明调控肝癌细胞运动侵袭能力的确切分子机制，所以难以开发出有效的抑制肝癌复发转移的药物，严重制约了肝癌病人长期生存率的进一步提高。MacDougallLK等人1995年在果蝇中发现了三种不同的PI3Ks，分别为ClassIPI3K、classIIPI3K和classIIIPI3K。PIK3C2A属于classIIPI3K，其基因定位在11p15.1。PIK3C2A蛋白由1686个氨基酸组成，分子大小为190.680KDa。PIK3C2A主要表达于上皮细胞，血管内皮细胞，平滑肌细胞等少数细胞上，PIK3C2A所编码蛋白主要位于这些细胞的网格蛋白有被小泡、内涵体、反面高尔基体管网状结构(TGN)上。前期的研究表明PIK3C2A在网格蛋白有被小泡的形成、胰岛素的释放和高血压血管内皮的收缩中发挥着重要作用。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种PIK3C2A蛋白在治疗肝癌药物中的应用，以解决现有技术中肝癌患者术后肝癌细胞侵袭转移的技术问题。为实现上述目的，本专利技术提供了一种PIK3C2A蛋白在治疗肝癌药物中的应用。进一步地，药物含有效量的合成PIK3C2A蛋白的基因的病毒。进一步地，PIK3C2A蛋白是由PIK3C2A基因在人体内经腺病毒转染进入宿主细胞后，在宿主细胞内经转录翻译产生的。进一步地，PIK3C2A蛋白在抑制肝癌细胞的生长和侵袭转移的药物中的应用。进一步地，PIK3C2A蛋白在治疗孤立性大肝癌和早期肝癌的药物中的应用。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术首先通过Real-timePCR和蛋白质免疫印迹法测定肝癌组织和肝癌细胞株中PIK3C2AmRNA和蛋白的表达量，然后运用免疫组化法比较肝癌组织和相邻正常肝组织中PIK3C2A染色程度的差别，并结合临床随访资料，采用Kaplan-meier生存分析、Log-rank检验、Spearman相关性分析和COX回归的单/多因素相关性分析等统计学方法，明确PIK3C2A的表达水平与肝癌病理特征和不良预后之间的关系。采用慢病毒转染技术下调PIK3C2A的表达，并通过一系列的体内外功能实验验证PIK3C2A对肝癌细胞生长和迁移运动的调控作用。除了上面所描述的目的、特征和优点之外，本专利技术还有其它的目的、特征和优点。下面将参照图，对本专利技术作进一步详细的说明。附图说明构成本申请的一部分的附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。在附图中：图1中示出了PIK3C2AmRNA在肝癌中低表达；A中示出了邻近非肿瘤肝组织中PIK3C2AmRNA的表达量明显高于其肝癌组织中的表达量P＜0.001，其中每个编号对应癌组织和ANLT的表达量；B中示出了qRT-PCR检测PIK3C2A在肝细胞系L02与五种肝癌细胞系中的mRNA水平，显示在肝癌细胞系中明显低于肝细胞系L02(P＜0.05)；C、D中示出了PIK3C2AmRNA在肝癌组织中的表达量显著低于其在邻近非肿瘤肝组织中的表达量0.0163±0.0017vs.0.0035±0.0010，P＜0.05；图2中示出了PIK3C2A蛋白在肝癌组织中的含量低于癌旁肝组织；A中示出了用蛋白质免疫印迹实验检测PIK3C2A蛋白的表达水平；B示出了肝癌组织中PIK3C2A蛋白的表达水平也明显低于ANLT(0.8917±0.2071vs.2.6076±0.0956，P＜0.05)。将PIK3C2A蛋白在邻近非肿瘤肝组织中的含量设定为1，则肝癌组织中PIK3C2A蛋白的相对表达量中位值为0.3360；图3中示出了肝癌细胞系中PIK3C2AmRNA及其蛋白的表达水平明显下调；A示出了采用RT-PCR方法检测正常肝细胞系L02和5种不同肝癌细胞系中PIK3C2AmRNA的表达水平；B示出了将RT-PCR方法测试正常肝细胞系L02和5种不同肝癌细胞系中PIK3C2AmRNA的表达水平进行定量分析，与正常肝细胞系L02比较，全部5种肝癌细胞系的PIK3C2AmRNA表达水平均明显下调(*P＜0.05)。；C示出了采用蛋白质免疫印迹法测试正常肝细胞系L02和5种不同肝癌细胞系中PIK3C2AmRNA的表达水平；D中示出了对蛋白质免疫印迹法的结果进行定量分析，与正常肝细胞系L02比较，肝癌细胞系中PIK3C2A蛋白表达水平也呈明显低表达(*P＜0.001)。图4中示出了肝癌组织中PIK3C2A蛋白表达水平低于ANLT中的表达水平结果显示：A代表评分(-)、B代表评分(+)、C代表评分(2+)和D代表评分(3+)的典型组织图片；E为肝癌组织中PIK3C2A蛋白表达水平明显低于ANLT中表达水平的典型图片(P＜0.001)，放大100倍；F图为E图中方框所示部分放大400倍的结果；图5中示出了PIK3C2A低表达与肝癌病人不良生存预后的关系，A示出了PIK3C2A高表达组和PIK3C2A低表达组患者的总体生存率对比；B示出了PIK3C2A高表达组和PIK3C2A低表达组患者的无瘤生存率对比；C示出了小肝癌(早期肝癌SHCC)组患者、、孤立性大肝癌(SLHCC)、结节性肝癌(NHCC)的总体存活率对比；D示出了小肝癌早期肝癌(SHCC)组患者、孤立性大肝癌(SLHCC)、结节性肝癌(NHCC)的无瘤生存率对比；图6示出了慢病毒转染shRNA在SMMC7721细胞系中敲除PIK3C2A后得到的SMMC7721shPIK3C2A和SMMC7721Control细胞系的72小时后转染率；A中示出SMMC7721本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种PIK3C2A蛋白在治疗肝癌药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.一种PIK3C2A蛋白在制备治疗肝癌药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述PIK3C2A蛋白在制备抑制肝癌细胞的生长和侵袭转移的药物中的应用。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述PIK3C2A蛋白在制备治疗孤立性大肝癌和早期肝癌的药物中的应用。4...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨连粤，秦承东，
申请(专利权)人：中南大学湘雅医院，
类型：发明
国别省市：湖南;43