本发明专利技术研究发现，从白刺种子中提取分离L-色氨酸的方法，它包括如下操作步骤：(1)取白刺种子，以乙醇或含水乙醇为溶剂进行提取，合并提取液，回收乙醇，浓缩，以石油醚萃取，收集水层；(2)取步骤(1)的萃取液，过大孔吸附树脂柱，以水洗脱，收集水洗脱液，浓缩，干燥，即得L-色氨酸粗品；(3)取L-色氨酸粗品，纯化，即得L-色氨酸纯品。本发明专利技术研究发现，以白刺种子为原料，对大孔树脂直接进行水洗后，就分离提取得到了高纯度的L-色氨酸粗品和L-色氨酸纯品。本发明专利技术使用的洗脱部位与现有专利技术完全不同，其洗脱工艺仅需要水洗液，其操作更简便，成本更为低廉，同时也为白刺种子的开发利用提供了新的选择。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术研究发现，从白刺种子中提取分离L-色氨酸的方法，它包括如下操作步骤：(1)取白刺种子，以乙醇或含水乙醇为溶剂进行提取，合并提取液，回收乙醇，浓缩，以石油醚萃取，收集水层；(2)取步骤(1)的萃取液，过大孔吸附树脂柱，以水洗脱，收集水洗脱液，浓缩，干燥，即得L-色氨酸粗品；(3)取L-色氨酸粗品，纯化，即得L-色氨酸纯品。本专利技术研究发现，以白刺种子为原料，对大孔树脂直接进行水洗后，就分离提取得到了高纯度的L-色氨酸粗品和L-色氨酸纯品。本专利技术使用的洗脱部位与现有专利技术完全不同，其洗脱工艺仅需要水洗液，其操作更简便，成本更为低廉，同时也为白刺种子的开发利用提供了新的选择。【专利说明】从白刺种子中提取分离L-色氨酸的方法
本专利技术涉及L-色氨酸的分离提取方法。
技术介绍
唐古特白刺(NitrariaTangutorum Bobr)为蔡藜科(Zygophyllaceae)白刺属植物，是一种药食两用的植物，主要生长在荒漠或半荒漠地区。唐古特白刺所具有的耐干旱、耐盐碱、抗沙埋等特性使得其成为防风固沙、保持水土、改良土壤等不可多得的灌木品种。唐古特白刺在《中药大辞典》中被称为卡密，以果熟时采收，晒干入药，具有健脾胃。滋补强壮、调经活血的功能，主治身体瘦弱、气血两亏、脾胃不和、消化不良、月经不调、虚寒腰痛等症。《本草纲目》中记述，白刺“气味辛、寒、无毒。主治心绞痛、痈肿溃脓，止痛。疗丈夫虚损，阳瘘精自出，补肾气，益精髓等”。在民间唐古特白刺的果实还被于哺乳期妇女的日常饮食中，促进泌乳。研究表明白刺果实中含花色苷、总多酚、多糖、氨基酸、维生素、黄酮、生物碱、矿物质元素等成分，具有显著的降血糖、降血脂、调节免疫、抗疲劳、耐寒冷、抗氧化、延缓衰老、保肝作用、抗肿瘤抗癌等生物活性。 为了深度开发利用白刺，中国专利201010298758.x公开了一种从白刺果实中提取分离色氨酸的方法，它是将白刺果实压榨后，去除籽皮，取果汁过陶瓷膜除杂后，上大孔吸附树脂柱，依次用水、40%?100%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，超滤后即可得到色氨酸。该方法中弃去了种子和水洗脱液。 目前还未见采用大孔吸附树脂从白刺种子中提取分离L-色氨酸的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种从白刺种子中分离提取L-色氨酸的方法。 本专利技术研究发现，从白刺种子中提取分离L-色氨酸的方法，它包括如下操作步骤: (I)取白刺种子，以乙醇或含水乙醇为溶剂进行提取，合并提取液，回收乙醇，浓缩，以石油醚萃取，收集水层； (2)取步骤⑴收集的水层，过大孔吸附树脂柱，以水洗脱，收集水洗脱液，浓缩，干燥，即得L-色氨酸粗品； (3)取L-色氨酸粗品，纯化，即得L-色氨酸纯品。 进一步地，步骤(I)中，所述含水乙醇浓度为60%?90%。 更进一步地，步骤(I)中，所述含水乙醇浓度为70%?80%，优选为75%。 进一步地，步骤(I)中，提取温度为50?80°C，优选为60°C。 进一步地，步骤(2)中，所述大孔吸附树脂为非极性大孔吸附树脂或弱极性大孔吸附树脂。 更近一步地，步骤(2)中，所述非极性大孔吸附树脂为DlOl型大孔吸附树脂，HPD100, HPD300, HP-10, X-5 ;所述弱极性大孔吸附树脂为AB-8型大孔吸附树脂。 进一步地，水洗脱的具体操作为:用水洗脱19个柱体积，收集第7?19个柱体积的水洗脱液。本专利技术研究发现，采用上述洗脱方式，即可得到纯度90%以上的L-色氨酸。 本专利技术一个【具体实施方式】中，大孔树脂柱规格为:直径5厘米，柱高1.2米。 进一步地，步骤(3)中，所述纯化采用制备液相色谱法或半制备液相色谱法。 其中，所述半制备液相色谱法中，检测波长为254nm，以甲醇-水为流动相，梯度条件如下:0-10min, 10% 甲醇；10-20min, 10% -15% 甲醇；20-30min, 15% 甲醇；30-50min,15% -20% 甲醇；50-55min，20% -95% 甲醇；55_65min，95% 甲醇。 进一步地，所述半制备液相色谱法中，色谱柱为20*250mm的C18柱。 中国专利201010298758.X中，虽然是以白刺果汁为原料进行了色氨酸的提取，然而，其大孔树脂纯化步骤中收集的是40%?100%乙醇洗脱部位，水洗部位被弃去了 ；令人意想不到的是，本专利技术研究发现，以白刺种子为原料，对大孔树脂直接进行水洗后，就分离提取得到了高纯度的L-色氨酸粗品和L-色氨酸纯品。由此可见，本专利技术使用的洗脱部位与现有专利技术完全不同，其洗脱工艺仅需要水洗液，其操作更简便，成本更为低廉，同时也为白刺种子的开发利用提供了新的选择。 另外，相比目前其他色氨酸硅胶、凝胶柱层析工艺而言，本专利技术仅仅只使用大孔树月旨，操作简便，并且洗脱液无需使用有机溶剂，工艺更为环保，安全性更高。 【专利附图】【附图说明】 图1大孔树脂直接洗脱产物的液相色谱图，液相条件:0-30minl0% -45% B，流动相A:水B:甲醇(分析时所用检测波长是254nm) 图2半制备液相色谱图，主峰为L-色氨酸(制备色谱中所用检测波长是254nm) 图3纯化后L-色氨酸的液相色谱图，色谱条件如图1 【具体实施方式】 实施例1:L_色氨酸分离提取方法 (I)取5kg的白刺种子粉碎后加入75%的乙醇在煎药机中进行热提取，提取温度60°C，提取时间2小时，共提取三次。第一次料液比为1: 15，第二次料液比为1: 12，第三次料液比为1: 10。合并提取液并减压浓缩250mL后石油醚萃取5次，石油醚萃取比例为250mL粗提液加入750mL石油醚。 (2)大孔树脂柱规格:直径5厘米，柱高1.2米 上柱:取1.5kg DlOl大孔吸附树脂，装入层析柱，吸附三天后进行解吸附处理，用水冲柱每一个柱体积接样后检测(柱体积约为2L)，当冲柱到第7个柱体积后上HPLC检测其组成主要为化合物I。后续继续冲柱，一共冲了 19个柱体积后将7-19合并后在旋转蒸发仪上浓缩得到6.32g样品，即为L-色氨酸粗品，其含量占整个水冲物质含量的90%以上(见图1) (3)将6.32g样品复溶到200mL蒸馏水中，上半制备液相色谱进行进一步纯化与精制，每次上样20mL，样品经半制备纯化后HPLC检测其纯度达到了 99.7%，共得到5.88g高纯度样品。 半制备条件: 半制备柱:Dubhe C18柱(20*250mm)汉邦科技有限公司。检测器:NU 3000SERIALSUV/VIS DetecTor，汉邦科技有限公司。泵:NP 7000SERIALS PUMP，汉邦科技有限公司。 半制备梯度条件:0-10min，10%甲醇；10_20min，10% -15% 甲醇；20_30min，15%甲醇；30-50min，15% -20% 甲醇；50_55min，20% -95% 甲醇；55_65min，95% 甲醇(若采用制备色谱，可以采用同样的流动相条件) 经NMR鉴定，该化合物为L-色氨酸。 NMR 数据为:13C NMR(DMS0-d6) δ 124.1 (d, C-2)，109.5 (s, C-3)，本文档来自技高网...
【技术保护点】
从白刺种子中提取分离L‑色氨酸的方法，其特征在于：它包括如下操作步骤：(1)取白刺种子，以乙醇或含水乙醇为溶剂进行提取，合并提取液，回收乙醇，浓缩，以石油醚萃取，收集水层；(2)取步骤(1)收集的水层，过大孔吸附树脂柱，以水洗脱，收集水洗脱液，浓缩，干燥，即得L‑色氨酸粗品；(3)取L‑色氨酸粗品，纯化，即得L‑色氨酸纯品。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：索有瑞，胡娜，周武，
申请(专利权)人：中国科学院西北高原生物研究所，青海大学，
类型：发明
国别省市：青海;63
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。