一种防治柑橘黄龙病的渗透剂渗透效能的检测方法，包括以下步骤：将黄龙病感病的芸香科柑橘亚科植物叶片表皮夹在受体室和供体室之间，用硅胶密封固定；在受体室中加入含有待检测渗透剂的硼酸缓冲液；在供体室中加入含有标记物柠檬酸缓冲液；将该装置放置暗处并在摇床上进行渗透；分别在放置后的0min、15min、30min、45min和60min，测定受体室中标记物的含量，并根据公式P＝F/cA计算出渗透参数P的值。本发明专利技术的检测方法利用了黄龙病感病的芸香科柑橘亚科植物叶片表皮的特性，步骤简单，可靠性高，可以快速从众多渗透剂中筛选出一种高效渗透剂，有助于提高药物的透皮运输效率，提高柑橘黄龙病的防治效果。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】，包括以下步骤：将黄龙病感病的芸香科柑橘亚科植物叶片表皮夹在受体室和供体室之间，用硅胶密封固定；在受体室中加入含有待检测渗透剂的硼酸缓冲液；在供体室中加入含有标记物柠檬酸缓冲液；将该装置放置暗处并在摇床上进行渗透；分别在放置后的0min、15min、30min、45min和60min，测定受体室中标记物的含量，并根据公式P＝F/cA计算出渗透参数P的值。本专利技术的检测方法利用了黄龙病感病的芸香科柑橘亚科植物叶片表皮的特性，步骤简单，可靠性高，可以快速从众多渗透剂中筛选出一种高效渗透剂，有助于提高药物的透皮运输效率，提高柑橘黄龙病的防治效果。【专利说明】
本专利技术涉及，属于农业技术领 域。
技术介绍
柑橘黄龙病是世界柑橘生产上的毁灭性病害，是由一种限于韧皮部内寄生的革兰 氏阴性细菌（Ca. Liberibacter)引起,能够侵染包括柑橘属、积属、金柑属和九里香等多种 芸香科植物。柑橘感染黄龙病后形成均匀黄化型或者斑驳型黄稍，后期则呈现缺锌花叶等 一系列典型病症，表现为经济寿命短、产量低、果实品质劣，造成巨大的经济损失。 自20世纪初在我国华南地区首次报道以来，在世界各大柑橘产区相继发生，特别 对世界主要的两大柑橘主产区美国佛罗里达州和巴西圣保罗州的柑橘产业造成重大经济 损失。目前，该病主要分布在亚洲、非洲、大洋洲、南美洲和北美洲的近50个国家和地区，中 国19个柑橘生产省（市、自治区）中已有11个受到该病危害，其面积占柑橘总栽培面积的 80%以上、产量占总产量的85%左右，严重制约柑橘产业的健康发展。 化学治疗被认为是一种防治柑橘黄龙病的有效手段，通过叶面喷施药物防治作物 病害已经得到广泛的应用。但是由于柑橘黄龙病病原菌寄生于柑橘韧皮部内，有效药物必 须透过柑橘叶片表皮，才能进入柑橘韧皮部内。柑橘叶片表皮主要由蜡质层、几丁质层和果 胶层组成，其中表皮蜡质是覆盖在叶片表面的一层疏水屏障，阻碍外界物质透过叶片表皮 进入柑橘体内。渗透剂能够改变表皮蜡层的结构和性质、增加叶片表面张力，从而提高其表 皮的渗透能力。因此，使用渗透剂作为辅剂，改变柑橘表皮蜡质的性质，能有效提高药物透 过表皮运输到柑橘韧皮部的效率。 目前未见有适用于黄龙病感病植株叶片表皮渗透剂应用的相关文献报道。本领域 技术人员长期希望找到一种检测防治柑橘黄龙病的渗透剂渗透效能的方法和指标，用于快 速、准确、有效地筛选出具有强大黄龙病感病植株叶片表皮渗透能力的渗透剂，应用于有效 药物的透皮转运，以达到防治黄龙病的最终目的。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术的不足，提供一种检测防治柑橘黄龙病的渗透剂渗透效能的 方法和指标，用于快速、准确、有效地筛选出具有强大黄龙病感病植株叶片表皮渗透能力的 渗透剂，应用于有效药物的透皮转运，达到防治黄龙病的最终目的。 为了实现上述目的，本专利技术采用了以下技术方案： -种渗透剂渗透效能的检测方法，包括以下步骤： (1)用黄龙病感病的芸香科柑橘亚科植物叶片表皮将一个容器隔离成两个互相独 立的腔室，用硅胶密封固定叶片表皮与容器连接处，两个互相独立的腔室一个作为供体室， 另一个作为受体室； (2)在受体室中加入含有渗透剂的硼酸缓冲液； (3)在供体室中加入含有标记物的柠檬酸缓冲液； (4)将该装置放置暗处，并在摇床上进行渗透； (5)分别在放置后的Omin、15min、30min、45min和60min,利用分光光度计测定受 体室中标记物的含量，并根据公式（a)计算出渗透参数P的值， P = F/cA (a) 其中，P为渗透参数；F为标记物透皮运输的线性斜率；c表示供体室中标记物的浓 度，单位为mol · cnT3 ;A为分离表皮在渗透系统中的实际面积，单位为cm2 ; (6)渗透参数P的值用于评价渗透剂的渗透效能，P值越大，则渗透剂渗透效能越 好。 所述柑橘叶片表皮通过如下方法分离： 选取黄龙病感病的芸香科柑橘亚科植物叶片，将该叶片完全浸没在50mM、pH值为 4. 0的柠檬酸缓冲液中培养，直到表皮完全从叶片分离，再用50mM、pH值为4. 0的柠檬酸缓 冲液将离体表皮漂洗干净，并晾干。 所述柠檬酸缓冲液含有2%的果胶酶和0. 2%的纤维素酶。 所述硼酸缓冲液的浓度为50?100mM，硼酸缓冲液的pH值为8. 0?10. 0。 所述柠檬酸缓冲液的浓度为10?20mM，柠檬酸缓冲液的pH值为2. 0?4. 0。 所述标记物为4-硝基酚。 利用分光光度计测定受体室中4-硝基酚的含量时，选择波长为399nm。 与现有技术相比较，本专利技术具备的有益效果： 针对黄龙病感病的芸香科柑橘亚科植物叶片表皮的特性，提供一种检测防治柑橘 黄龙病的渗透剂渗透效能的方法，该方法步骤简单，试剂易于配制，渗透效能指标的可靠性 高，可以快速从众多渗透剂中筛选出一种高效渗透剂，有助于提高药物的透皮运输效率，提 高柑橘黄龙病的防治效果。 【专利附图】【附图说明】 图1为本专利技术所述检测方法使用的一个渗透装置。 【具体实施方式】 下面通过实施例，结合说明书附图对本专利技术的技术方案作进一步阐述。 实施例1 1.叶片表皮的分离 采取黄龙病感病的柠檬叶片，利用直径为7mm的打孔器，获得直径为7mm的叶圆 片，将该叶圆片完全浸没在50mM、pH值为4. 0的含有2%果胶酶和0. 2%纤维素酶的柠檬酸 缓冲液培养。待表皮完全从叶片分离后，用pH值为4. 0的柠檬酸缓冲液将表皮漂洗干净， 并晾干。 2.渗透剂渗透效能的检测 (1)将由步骤1获得的黄龙病感病的柠檬叶圆片表皮放置在渗透装置隔板上的通 孔3上，将该渗透装置隔离出两个互相独立的腔室，用硅胶密封固定叶片表皮与容器连接 处，两个互相独立的腔室一个作为供体室1，另一个作为受体室2 ; (2)在受体室2中加入2ml含0. 1 %渗透剂的lOOmM、pH值为9. 0的硼酸缓冲液。 渗透剂分别为Brij35, Brij58, Brij98,二甲基亚砜，N-甲基吡咯烷酮，尿素，氮酮和油酸。 (3)在供体室1中加入200 μ 1含15mM的4-硝基酚的10mM柠檬酸缓冲液，上述柠 檬酸缓冲液的pH值为3. 0 ; (4)然后将该渗透装置放置暗处，并在转速为60rpm的摇床上进行渗透， (5)分别在放置后0、15、30、45和60min，利用分光光度计（DU640)于波长399处 测定受体室2中4-硝基酚的含量，并根据公式（a)计算出渗透参数P的值，P值用于评价 渗透剂的渗透效能，P值越大，则渗透剂渗透效能越好。 P = F/cA (a) 其中，P为渗透参数；F为4-硝基酚透皮运输的线性斜率；c表示供体室1中标记 物的浓度，单位为mol κπΓ2 ;A为分离表皮在渗透装置中的实际有效面积，即为通孔的面积， 单位为cm2。 利用上述方法对不同渗透剂进行了检测，获得的渗透参数如表1所示，从表1可以 看出，渗透剂Brij35的P值为1. 841，与空白对照相比，增加3. 34倍，其P值和增加的倍数 在所有渗透剂中最高，因此，检测表明Bri本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种防治柑橘黄龙病的渗透剂渗透效能的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)用黄龙病感病的芸香科柑橘亚科植物叶片表皮将一个容器隔离成两个互相独立的腔室，用硅胶密封固定叶片表皮与容器连接处，两个互相独立的腔室一个作为供体室，另一个作为受体室；(2)在受体室中加入含有待检测渗透剂的硼酸缓冲液；(3)在供体室中加入含有标记物的柠檬酸缓冲液；(4)将该渗透装置放置暗处，并在摇床上进行渗透；(5)分别在放置后的0min、15min、30min、45min和60min,利用分光光度计测定受体室中标记物的含量，并根据公式(a)计算出渗透参数P的值:P＝F/cA (a)其中，P为渗透参数；F为标记物透皮运输的线性斜率；c表示供体室中标记物的浓度，单位为mol·cm‑2；A为分离表皮在渗透系统中的实际面积，单位为cm2；(6)渗透参数P值用于评价渗透剂的渗透效能，P值越大，则渗透剂渗透效能越好。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张木清，杨川毓，
申请(专利权)人：广西大学，
类型：发明
国别省市：广西;45
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