用于检测外周血循环肿瘤细胞的试剂盒制造技术

本实用新型专利技术公开了一种用于检测外周血循环肿瘤细胞的试剂盒，包括盒体(1)、盒盖(3)和设置在盒体(1)内的衬垫(2)，所述衬垫(2)上设有小孔，装有hCTC缓冲液的试剂管(4)、装有hCTC非血源性细胞分离介质的试剂管(5)、装有免疫磁珠的试剂管(6)、装有固定液的试剂管(7)，装有消化酶的试剂管(8)、装有FISH消化酶稀释液的试剂管(9)、装有FISH磷酸缓冲液的试剂管(10)，装有CEP-8探针的试剂管(11)，装有抗体洗涤液的试剂管(12)、装有抗体配制液的试剂管(13)、装有抗人角蛋白18单克隆抗体CK18的试剂管(14)、装有抗人CD45的试剂管(15)、装有DAPI荧光保存液的试剂管(16)被设置在所述小孔内。本实用新型专利技术结构简单、设计合理，检测步骤简便，检测速度快，便于在临床推广应用。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
用于检测外周血循环肿瘤细胞的试剂盒
本专利技术属于分子细胞生物学领域，涉及一种用于检测外周血循环肿瘤细胞的试剂盒。
技术介绍
利用现代免疫和分子技术，恶性肿瘤患者外周血中的肿瘤细胞根据其细胞学特征可以被检测出来。能够方便的检测和定位这样的细胞将会对恶性肿瘤早期诊断，化疗调整，早期复发的预防和靶向治疗产生深远的影响。当1889年StevenPaget发表了关于“种子和土壤”的学说后，血液播散细胞的想法应运而生。一个多世纪以后，随着分子技术的成熟，新的临床发现解释了曾经不能解释的现象，比如远处器官出现另外和原位瘤同样病理特征的肿瘤,对于上皮细胞起源的实体瘤,许多病人的外周血中都可以检测到循环肿瘤细胞。循环肿瘤细胞不仅存在于已经发生肿瘤远处转移的患者，同样也存在于那些肿瘤尚局限的患者。特别值得注意的是，这种方法在恶性肿瘤化疗调整的风险评估和利用循环肿瘤细胞的分子学特征研究新的靶向治疗具有很重要的意义。 研究目前所存在的检测技术大多是在大剂量化治疗前，抽取骨髓或提取单个核细胞来检测微小转移是否发生。抽取骨髓耗时较长，而且对患者而言有一定的痛苦，事实上，现在临床对于乳腺癌的治疗已经很少用到大剂量的化疗了。因此，现阶段很多研究都比较关注外周血循环肿瘤细胞的检测，不过检测的基本原理几乎还是相同的。用于检测循环肿瘤细胞的方法大体上可以分为两类，一类是细胞计数分析，一类是核酸检测。细胞计数法是根据免疫细胞化学技术来鉴定和确定个体肿瘤细胞的特征。核酸检测技术是通过检测肿瘤细胞和正常人细胞中不同个体肿瘤细胞的特征。核酸检测技术是通过检测肿瘤细胞和正常人细胞中不同表达的DNA或RNA序列来实现的。 细胞计数法为通过提取和计数个体细胞来实现。该方法的一个优势在于可以通过其表达的关键的生物标志，如人上皮生长因子受体-2 (HER2)和上皮生长因子受体(EGFR)，进一步分析细胞分子水平的生物学特征。尽管如此，即便是在已经发生转移的肿瘤患者外周血中也只能检测到很少数量的上皮细胞(小于10个细胞/ml)，所以在这些细胞从血液成分中分离出来前需要进行富集。 许多研究者已经通过免疫磁珠的方法来进行细胞富集。通常市面上可以买到的试剂盒或常规方法包括磁性吸引细胞分选系统(MACS系统)、磁珠、以及铁磁流体系统。MACS系统和磁珠系统都通过抗体连接到顺磁体磁珠上，通过不同的磁性吸引来分选特定的细胞。磁珠可以连接到阳性选择的抗上皮细胞抗体上(如HEA125, cytokeratin7/8, BerEP4)或者直接连接到单克隆抗体⑶45，来选定阴性表达的白细胞。从发生转移的乳腺癌患者外周血中分离得到的cytokeratin阳性细胞。通过免疫磁性法富集分离血细胞，染上抗cytokeratin8/18,生物素,异硫酸氢盐荧光素(绿色荧光)。细胞核用碘化丙啶染色(红色荧光)。其他的富集方法包括密度梯度离心和滤器滤过方法。滤器滤过是根据白细胞直径大小，允许较小的白细胞通过，而较大的肿瘤细胞留在了滤器内。 尽管对细胞进行富集，但上皮细胞仍然大大小于残留的白细胞的数量，因此，我们需要更进一步的检测到这些上皮细胞。免疫化学方法是建立在利用单克隆抗体抗各种上皮细胞抗原的基础上。利用免疫化学技术来扫描大量的细胞是相当耗时的；自动化成像分析系统或者半自动分选技术如流式或激光扫描细胞计数是比较适合的。本方法采用单一的肿瘤相关抗原的检测，特异性和灵敏性稍低。 采用核酸检测技术，即在肿瘤患者的血液中可以检测到与肿瘤相相关的关的DNA/mRNA,然后可以用采用PCR/RT-PCR的方法检测，方法学涉及到几个步骤，具体步骤为，首先采用密度梯度离心法从外周血中提取单个核细胞，或采用免疫磁性分离技术从外周血中富集上皮细胞，然后采用标准方法提取细胞中的核酸，最后通过特异性引物PCR扩增。该方法缺乏细胞形态的支持，特异性低。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本技术的目的在于提供一种用于检测外周血循环肿瘤细胞的试剂盒，可以快速、简便、准确地检测外周血循环肿瘤细胞。 为实现上述目的，本技术采取的技术方案是:一种用于检测外周血循环肿瘤细胞的试剂盒，其特征在于:包括盒体(I)、盒盖(3)和设置在盒体(I)内的衬垫(2)，所述衬垫(2)上设有小孔，装有hCTC缓冲液的试剂管(4)、装有hCTC非血源性细胞分离介质的试剂管(5)、装有免疫磁珠的试剂管￠)、装有固定液的试剂管(7)，装有消化酶的试剂管(8)、装有FISH消化酶稀释液的试剂管(9)、装有FISH磷酸缓冲液的试剂管(10)，装有CEP-8探针的试剂管(11)，装有抗体洗涤液的试剂管(12)、装有抗体配制液的试剂管(13)、装有抗人角蛋白18单克隆抗体CK18的试剂管(14)、装有抗人CD45的试剂管(15)、装有DAPI荧光保存液的试剂管(16)被设置在所述小孔内。 根据本技术的实施例，所述衬垫(2)上设有13个小孔，所述小孔在所述衬垫 (2)上分成3排平行排列。 通过以上技术方案，本技术的有益效果如下: 采用本技术中传统细胞染色与免疫荧光技术和荧光原位杂交技术组合检测，提高了外周血循环肿瘤细胞检测的特异性和灵敏性。 【附图说明】 图1为本技术的结构示意图； 图中，1-盒体，3盒盖，2衬垫，4-装有hCTC缓冲液的试剂管，5_装有hCTC非血源性细胞分离介质的试剂管，6-装有免疫磁珠的试剂管，7-装有固定液的试剂管，8-装有消化酶的试剂管，9-装有FISH消化酶稀释液的试剂管，10-装有FISH磷酸缓冲液的试剂管，11-装有CEP-8探针的试剂管，12-装有抗体洗涤液的试剂管，13-装有抗体配制液的试剂管，14-装有抗人角蛋白18单克隆抗体CK18的试剂管，15-装有抗人CD45的试剂管，16-装有DAPI荧光保存液的试剂管。 【具体实施方式】 下面结合实施例对本技术的【具体实施方式】作进一步描述，本技术的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本技术的范围构成任何限制。 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。 如图1所示，本技术提供了一种用于检测外周血循环肿瘤细胞的试剂盒，其特征在于:包括盒体(I)、盒盖(3)和设置在盒体(I)内的衬垫(2)，所述衬垫(2)上设有小孔，装有hCTC缓冲液的试剂管(4)、装有hCTC非血源性细胞分离介质的试剂管(5)、装有免疫磁珠的试剂管￠)、装有固定液的试剂管(7)，装有消化酶的试剂管(8)、装有FISH消化酶稀释液的试剂管(9)、装有FISH磷酸缓冲液的试剂管(10)，装有CEP-8探针的试剂管 (11)，装有抗体洗涤液的试剂管(12)、装有抗体配制液的试剂管(13)、装有抗人角蛋白18单克隆抗体CK18的试剂管(14)、装有抗人CD45的试剂管(15)、装有DAPI荧光保存液的试剂管(16)被设置在所述小孔内。 其中，所述衬垫(2)上设有13个小孔，所述小孔在所述衬垫(2)上分成3排平行排列。 检测步骤如下: 1.首先采集病人外周血7.5ml室温避光保存不超本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测外周血循环肿瘤细胞的试剂盒，其特征在于：包括盒体(1)、盒盖(3)和设置在盒体(1)内的衬垫(2)，所述衬垫(2)上设有小孔，装有hCTC缓冲液的试剂管(4)、装有hCTC非血源性细胞分离介质的试剂管(5)、装有免疫磁珠的试剂管(6)、装有固定液的试剂管(7)，装有消化酶的试剂管(8)、装有FISH消化酶稀释液的试剂管(9)、装有FISH磷酸缓冲液的试剂管(10)、装有CEP‑8探针的试剂管(11)，装有抗体洗涤液的试剂管(12)、装有抗体配制液的试剂管(13)、装有抗人角蛋白18单克隆抗体CK18的试剂管(14)、装有抗人CD45的试剂管(15)、装有DAPI荧光保存液的试剂管(16)被设置在所述小孔内。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测外周血循环肿瘤细胞的试剂盒，其特征在于:包括盒体(I)、盒盖(3)和设置在盒体⑴内的衬垫(2)，所述衬垫⑵上设有小孔，装有hCTC缓冲液的试剂管(4)、装有hCTC非血源性细胞分离介质的试剂管(5)、装有免疫磁珠的试剂管￠)、装有固定液的试剂管(7)，装有消化酶的试剂管(8)、装有FISH消化酶稀释液的试剂管(9)、装有FISH磷酸缓冲液的试剂管(10...

【专利技术属性】
技术研发人员：张益清，李微，王绪华，梁超，陈忠，方国伟，黄士昂，
申请(专利权)人：北京海思特临床检验所有限公司，
类型：新型
国别省市：北京;11