本发明专利技术公开了一种优化大花蕙兰类原球茎玻璃化超低温保存效果的方法，为采用含有碳纳米材料的玻璃化溶液处理大花蕙兰类原球茎以提高其保存效果，具体包括：预培养、装载液处理、玻璃化溶液处理和液氮保存步骤，其中所述玻璃化溶液含有0.1~0.5g/L石墨烯量子点。本发明专利技术中公开的方法对大花蕙兰类原球茎的保存效果优化显著，通过添加石墨烯量子点作为外源物质对植物玻璃化超低温保存起到促进作用。
【技术实现步骤摘要】
一种优化大花蕙兰类原球茎玻璃化超低温保存效果的方法
本专利技术涉及植物或其局部的保存领域，具体涉及一种优化大花蕙兰类原球茎玻璃 化超低温保存效果的方法。
技术介绍
超低温保存是上世纪70年代发展起来的一项现代种质资源离体保存技术。通常 在液氮中保存，被保存材料细胞内的物质代谢和生长活动几乎完全停止，处在相对稳定的 生物学状态，达到长期保存种质的目的，超低温保存是目前唯一不需要连续继代的中长期 保存方式。玻璃化法超低温保存是将细胞或组织置于由一定比例的渗透性和非渗透性保护 剂组成的玻璃化溶液中，使材料及其玻璃化溶液在足够快的降温速率下固化成非结晶的玻 璃化态，并以这种玻璃态在低温下保存。玻璃化法因操作简单快捷，成本低，适宜保存种类 广泛，保存材料遗传性稳定，保存效果好等优点，是近十年来用于优良种质资源中长期保存 的首选方法。 兰科是被子植物中的第一大科，作为一种重要的观赏植物资源，在园林和观赏园 艺的发展过程中占据重要地位。大花蕙兰是对兰属中通过人工杂交培育出的、色泽艳丽、花 朵硕大的品种的一个统称。目前，已成功实现超低温保存的兰科植物种类包括金钗石斛、铁 皮石斛、大花万代兰、血色石斛、舌唇兰属、矮万代兰等。已初步建立的大花蕙兰类原球茎玻 璃化法超低温保存体系的相对成活率仅为10%，还不足以满足生产与科研的需求。
技术实现思路
鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种新的优化大花蕙兰类 原球茎玻璃化超低温保存效果的方法，以克服现有技术中植物种质资源中长期保存难以实 现，以及超低温保存的植物或其组织恢复生长率低的缺点。 为了实现上述目的或者其他目的，本专利技术是通过以下技术方案实现的。 -种优化大花蕙兰类原球茎玻璃化超低温保存保存效果的方法，采用玻璃化超低 温保存的方法对大花蕙兰类原球茎进行保存，具体步骤如下： 1)预培养：将大花蕙兰类原球茎置于预培养基上，在光照培养箱中预培养1?5 天； 2)装载液处理：室温下，将大花蕙兰类原球茎在装载液中浸泡脱水处理40?60 分钟后移除装载液； 3)玻璃化溶液处理：在0?25°C下使用玻璃化溶液浸泡脱水处理大花蕙兰类原球 茎40?60分钟； 4)液氮保存：保持大花蕙兰类原球茎浸泡在玻璃化溶液中的状态，将其置于液氮 中保存； 所述玻璃化溶液为含有〇. 1?〇. 5g/L石墨烯量子点的玻璃化冷冻保护液。 所述 MS 培养液含有 1900mg/L KNO3,1650mg/L NH4NO3,170mg/L KH2PO4, 370mg/ L MgSO4 ? 7H20,440mg/L CaCl2 ? 2H20, 37. 3mg/L Na2-EDTA, 27. 8mg/L FeSO4 ? 7H20, IOOmg/ L肌酉享，0? 5mg/L烟酸，0? 5mg/L盐酸批B多醇，0? lmg/L盐酸硫胺素，2mg/L甘氨酸，0? 83mg/L KI, 6. 2mg/L H3BO3, 22. 3mg/L MnSO4 ? 4H20,8. 6mg/L ZnSO4 ? 7H20,0. 25mg/L Na2MoO4 ? 2H20, 0? 025mg/L CuSO4 ? 5H20,0. 025mg/L CoCl2 ? 6H20,余量为水。 所述MS培养液的pH为5. 8。 优选地，上述步骤1)中所述大花蕙兰类原球茎为在含有40?80g/L的山梨醇的 MS固体培养基上光照预培养后的大花蕙兰类原球茎。 优选地，上述步骤1)中所述大花蕙兰类原球茎为在含有60g/L的山梨醇的MS固 体培养基上光照预培养后的大花蕙兰类原球茎。 所述MS 固体培养基含有 1900mg/L KNO3,1650mg/L NH4NO3,170mg/L KH2PO4, 370mg/ L MgSO4 ? 7H20,440mg/L CaCl2 ? 2H20, 37. 3mg/L Na2-EDTA, 27. 8mg/L FeSO4 ? 7H20, IOOmg/ L肌酉享，0? 5mg/L烟酸，0? 5mg/L盐酸批B多醇，0? lmg/L盐酸硫胺素，2mg/L甘氨酸，0? 83mg/L KI,6. 2mg/L H3BO3, 22. 3mg/L MnSO4 ? 4H20,8. 6mg/L ZnSO4 ? 7H20,0. 25mg/LNa2Mo04 ? 2H20, 0? 025mg/L CuSO4 ? 5H20,0? 025mg/L CoCl2 ? 6H20, 30g/L 蔗糖，lOg/L 琼脂粉，余量为水。所 述MS固体培养基的pH为5. 8。 优选地，上述步骤1)中所述的在MS固体培养基上培养的方法为：将大花蕙兰类原 球茎室温下置于含有40?80g/L的山梨醇的MS固体培养基上培养1?5天。 更优选地，上述步骤1)中所述的在MS固体培养基上培养的方法为：将大花蕙兰类 原球茎室温下置于含有60g/L的山梨醇的MS固体培养基上培养5天。 优选地，所述装载液为含有1?2mol/L丙三醇、0? 3?0? 5mol/L鹿糖和5? IOmmol/L KNO3 的 MS 培养液。 优选地，上述步骤2)中，室温下，将大花蕙兰类原球茎在装载液中浸泡处理40分 钟后移除装载液； 优选地，上述步骤3)中，在0°C下使用玻璃化溶液浸泡脱水处理大花蕙兰类原球 茎50分钟。 优选地，所述玻璃化溶液为含有300g/L丙三醇，150g/L乙二醇，150g/L二甲基亚 砜、0. 4mol/L蔗糖和0. 1?0. 5g/L石墨烯量子点的MS培养液。 更优选地，所述玻璃化溶液为含有300g/L丙三醇，150g/L乙二醇，150g/L二甲基 亚砜、0. 4mol/L蔗糖和0. 1?0. 3g/L石墨烯量子点的MS培养液。 -种大花蕙兰类原球茎的解冻及再培养方法，所述大花蕙兰类原球茎为采用如上 述所述方法保存的大花蕙兰类原球茎，所述大花蕙兰类原球茎的解冻及再培养方法为将大 花蕙兰类原球茎从液氮中取出，先水浴解冻，然后去除玻璃化溶液后用洗涤液洗涤，最后转 入恢复培养基中恢复培养。 优选地，水浴解冻的条件为在30?40°C的水浴中解冻60?120s。 更优选地，水浴解冻的条件为在40°C的水浴中解冻60s。 优选地，所述洗涤液为含有I. 0?I. 5mol/L蔗糖和5?lOmmol/L KNO3的MS培 养液，洗涤工艺为：用洗涤液在室温下将大花蕙兰类原球茎浸泡10?30分钟。 优选地，所述洗涤液为含有I. 2mol/L蔗糖和lOmmol/L KNO3的MS培养液，洗涤工 艺为：用洗涤液在室温下将大花蕙兰类原球茎浸泡10?30分钟。 更优选地，洗涤工艺为：用洗涤液在室温下将大花蕙兰类原球茎浸泡20分钟，每 隔10分钟更换洗涤液。 优选地，所述恢复培养基为含有1?2mg/L 6-苄基腺嘌呤、0? 1?0? 5mg/L萘乙酸 和30g/L蔗糖的MS固体培养基。 优选地，所述恢复培养基为含有2mg/L 6-苄基腺嘌呤、0. lmg/L萘乙酸和30g/L蔗 糖的MS固体培养基。 本专利技术中大花蕙兰类原球茎的制备方法可以为现有本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种优化大花蕙兰类原球茎玻璃化超低温保存效果的方法，其特征在于，采用玻璃化超低温保存的方法对大花蕙兰类原球茎进行保存，具体步骤如下：1)预培养：将大花蕙兰类原球茎置于预培养基上，在光照培养箱中预培养1～5天；2)装载液处理：室温下，将大花蕙兰类原球茎在装载液中浸泡脱水处理40～60分钟后移除装载液；3)玻璃化溶液处理：在0～25℃下使用玻璃化溶液浸泡脱水处理大花蕙兰类原球茎40～60分钟；4)液氮保存：保持大花蕙兰类原球茎浸泡在玻璃化溶液中的状态，将其置于液氮中保存；所述玻璃化溶液为含有0.1～0.5g/L石墨烯量子点的玻璃化冷冻保护液。
【技术特征摘要】
1. 一种优化大花蕙兰类原球茎玻璃化超低温保存效果的方法，其特征在于，采用玻璃 化超低温保存的方法对大花蕙兰类原球茎进行保存，具体步骤如下： 1) 预培养：将大花蕙兰类原球茎置于预培养基上，在光照培养箱中预培养1?5天； 2) 装载液处理：室温下，将大花蕙兰类原球茎在装载液中浸泡脱水处理40?60分钟 后移除装载液； 3) 玻璃化溶液处理：在0?25°C下使用玻璃化溶液浸泡脱水处理大花蕙兰类原球茎 40?60分钟； 4) 液氮保存：保持大花蕙兰类原球茎浸泡在玻璃化溶液中的状态，将其置于液氮中保 存； 所述玻璃化溶液为含有〇. 1?〇. 5g/L石墨烯量子点的玻璃化冷冻保护液。2. 如权利要求1所述优化大花蕙兰类原球茎玻璃化超低温保存效果的方法，其特征在 于，所述大花蕙兰类原球茎预培养基为含有40?80g/L山梨醇的MS固体培养基。3. 如权利要求1所述优化大花蕙兰类原球茎玻璃化超低温保存效果的方法，其特征在 于，所述装载液为含有1?2mol/L丙三醇、0· 3?0· 5mol/L鹿糖和...
【专利技术属性】
技术研发人员：张荻，王路尧，陈冠群，任丽，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：上海;31
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。