【技术实现步骤摘要】
一种快速检测氨基甲酸乙酯含量的分光光度方法
本专利技术涉及一种快速检测氨基甲酸乙酯含量的分光光度方法,属于分析化学、食 品安全检测
。
技术介绍
氨基甲酸乙酯(Ethyl carbamate,简称EC),是一种具有遗传毒性及致癌性的物 质,对啮齿类动物,可导致肺癌、淋巴癌、肝癌和皮肤癌等疾病。EC广泛存在于发酵食品(如 酱油、腐乳等)、酿造酒(如黄酒、清酒、葡萄酒、苹果酒等)和蒸馏酒(如白兰地、威士忌等)中, 主要通过酒精类饮料的摄入进入人体内。研究表明氨基甲酸乙酯在生物体内约有0. 5%被 细胞色素 P450氧化为乙酰基氨基甲酸乙酯,再进一步形成乙酰基氨基甲酸乙酯环氧化物, 此种物质能够在生物体内形成DNA加聚物,导致DNA结构的双链被破坏,进而导致细胞癌 变;另有〇. 1%左右的氨基甲酸乙酯被细胞色素 P450氧化为N-羟基氨基甲酸乙酯,这种物 质诱导Cu2+调控的DNA损伤,引起癌变。 早在1985年,加拿大卫生与预防部门对酒精类饮料中的氨基甲酸乙酯含量做了 强制性限量标准,随后世界其他国家也先后制定了各种饮料酒中的限量标准。同时,采取减 少和去除食品中EC前体物质、选用选择性强和特性良好的能降低发酵过程中尿素排泄量 的菌株、对发酵过程和蒸馏过程进行工艺改良、对发酵酒进行脲酶和EC降解酶酶法后处理 等方法降低成品中EC的含量。各种检测饮料酒以及其他发酵食品中氨基甲酸乙酯含量的 方法也不断专利技术和改善。 现阶段检测氨基甲酸乙酯含量的方法主要有:薄层分析法、傅立叶变换近红外 光谱法(FTIR),近红外光谱技 ...
【技术保护点】
一种快速检测氨基甲酸乙酯含量的分光光度方法,其特征在于步骤为:(1)构建双酶偶联催化体系a、酶源:氨基甲酸乙酯降解酶,对氨基甲酸乙酯EC降解酶产生菌菌株CGMCC No.5763细胞培养后经超声破碎、离心、浓缩、凝胶层析、超滤浓缩后所得;谷氨酸脱氢酶则为市售商品酶;b、酶液以及其他溶液的制备:用25mmol·L‑1 PBS缓冲液溶解氨基甲酸乙酯降解酶以及谷氨酸脱氢酶,使得二者酶活分别为16U·mL‑1及10U·mL‑1;配制540mmol·L‑1α‑酮戊二酸溶液;7.5mmol·L‑1NADH以及不同浓度的氨基甲酸乙酯标准溶液;c、双酶偶联体系的构建:向反应体系中分别加入20μL上述氨基甲酸乙酯降解酶和谷氨酸脱氢酶溶解液,66μL的α‑酮戊二酸溶液,20μL NADH溶液,20μL 1mmol·L‑1 氨基甲酸乙酯溶液和454μL PBS缓冲液,使得总反应体系体积为600μL,置于石英比色皿中混合均匀;然后将此反应体系置于分光光度计中用动力学方法监测溶液中NADH在340nm处吸光值的变化情况;(2)双酶偶联体系对氨基甲酸乙酯含量的快速测定:d.用纯度大于99%的氨基甲酸乙酯配制浓度为 ...
【技术特征摘要】
1. 一种快速检测氨基甲酸乙酯含量的分光光度方法,其特征在于步骤为: (1) 构建双酶偶联催化体系 a、 酶源:氨基甲酸乙酯降解酶,对氨基甲酸乙酯EC降解酶产生菌菌株CGMCC No. 5763 细胞培养后经超声破碎、离心、浓缩、凝胶层析、超滤浓缩后所得;谷氨酸脱氢酶则为市售商 品酶; b、 酶液以及其他溶液的制备:用25mmol吨4 PBS缓冲液溶解氨基甲酸乙酯降解酶以及 谷氨酸脱氢酶,使得二者酶活分别为16U · ml/1及10U · ml/1 ;配制540mmol · Γ1 α -酮戊二 酸溶液;7. 5mmol · PNADH以及不同浓度的氨基甲酸乙酯标准溶液; c、 双酶偶联体系的构建:向反应体系中分别加入20 μ L上述氨基甲酸乙酯降解酶和谷 氨酸脱氢酶溶解液,66 μ L的α -酮戊二酸溶液,20 μ L NADH溶液,20 μ L lmmol · L-1氨基 甲酸乙酯溶液和454 μ L PBS缓冲液,使得总反应体系体积为600 μ L,置于石英比色皿中混 合均匀;然后将...
【专利技术属性】
技术研发人员:周楠迪,卢晓霞,田亚平,
申请(专利权)人:江南大学,
类型:发明
国别省市:江苏;32
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