本发明专利技术公开了一种检测尿液Clusterin含量试纸条的制备及应用，用于急性肾损伤和药物肾毒性安全性监测，属于疾病检测技术领域，本发明专利技术提供的Clusterin胶体金试纸条，基本原理为双抗夹心法，在硝酸纤维素膜的两端分别设有金标垫和吸收垫，金标垫上端为样品垫，金标垫包被有纯化的单克隆Clusterin抗体1胶体金偶联标记物，检测线包被有纯化的单克隆Clusterin抗体2，质控线包被有正常羊抗小鼠IgG抗体，质控线侧贴有吸收垫，该试纸条操作简单，无需仪器，结果易于判断，且检测手段无创，制备试纸条所用单克隆抗体为杂交瘤技术自行制备，费用低，适用于工业化生产。
【技术实现步骤摘要】
检测尿液Cluster in含量试纸条的制备及应用
本专利技术是一种急性肾脏损伤疾病的检测方法，具体涉及一种应用免疫胶体金技术 研制的Clusterin检测试纸条，同时公开了其制备方法，属于疾病检测
。
技术介绍
急性肾损伤在临床是常见而严重的肾脏病变，其发病率和死亡率都很高，寻求 具有高敏感性、特异性、易检测的新的肾损伤标志物一直是研究热点之一。簇集蛋白 (Clusterin)是一种分子量为80KD的异二聚体糖蛋白，广泛存在于人类及动物的许多组织 中，急性肾损伤（acute kidney in jury, AKI)时，尿簇集蛋白表现出抗凋亡作用，并与脂肪 利用、细胞聚集及黏附有关。虽然它在多种组织广泛表达，但由于其相对分子质量较大，不 能从肾小球滤过，因此只有在肾损伤时才能在尿中检测。动物研究表明当肾毒素、肾切除术 后、多囊肝性肾病和肾细胞瘤引起的急性肾损伤时，Clusterin能在肾损伤后的去分化肾细 胞中表达增加，在鼠、狗和灵长类动物的尿中均可检测出来。因此检测尿中Clusterin水平 可以间接评价急性肾损伤和药物肾毒性的情况。 目前国内外检测Clusterin的方法包括免疫组化、ELISA、Western blot、PCR等， 但用于临床则存在很多弊端，如有创、操作程序复杂、时间较长等。
技术实现思路
： 本专利技术的目的是公开一种用于检测尿液Clusterin含量的胶体金试纸条及制备 方法，用于急性肾损伤和药物肾毒性安全性监测。 本专利技术提供的Clusterin的胶体金试纸条，适用于工业化生产，基本原理为双抗 夹心法，具体安装方法参考了中国专利99203566. X、200510200394. 6等，在硝酸纤维素 膜的两端分别设有金标垫和吸收垫，金标垫上端为样品垫，金标垫包被有纯化的单克隆 Clusterin抗体1胶体金偶联标记物，检测线包被有纯化的单克隆Clusterin抗体2,质控 线包被有正常羊抗小鼠 IgG抗体，质控线侧贴有吸收垫。 本Clusterin的胶体金试纸条的制备，包括以下步骤： 1将自行制备的纯化单克隆Clusterin抗体1用胶体金标记，喷点于玻璃纤维膜 上制备成金标垫，将自行制备的纯化单克隆Clusterin抗体2和正常抗小鼠 IgG抗体分别 包被在硝酸纤维素膜（NC膜）上的检测线处和质控线处，当被检样品中含有Clusterin抗 原时，则于金标垫与胶体金标记的Clusterin抗体结合，并在吸收垫的作用下，向前渗透泳 动，与检测线上的Clusterin抗体再次结合，出现肉眼可见的色带。 本专利技术试剂盒的使用方法如下：取尿标本约0. 1-0. 5ml加入小试管中，然后插入 试纸条，待1-2分钟反应带清晰后观察结果（见图2)。出现1条红色（对照）沉淀线，为尿 检诊断阴性；出现2条红色（样品和对照）沉淀线，为尿检诊断阳性，未出现沉淀线则为无 效。 本专利技术的积极效果在于：应用免疫胶体金技术制备Clusterin试纸条，可以快速， 灵敏检测尿中Clusterin蛋白含量，避免了复杂的操作，无需特殊检测仪器，结果易于观察 判断，可以适应多种检测环境，无专业技术人员均可操作。样本用量小，对操作者无毒性，并 且检测手段无创，除可用于临床急性肾损伤的检测还可用于药物肾毒性安全性监测。制备 试纸条所用单克隆抗体为杂交瘤技术自行制备，费用低。 【附图说明】 图1.为Clusterin检测装置示意图； 图2.为Clusterin试剂盒检测结果判定不意图； 图中：1 -样品垫，2-金标垫，3-硝酸纤维素膜，4-吸水垫，5-PVC板，6-检测线， 7_质控线。 【具体实施方式】 实施例lClusterin单克隆抗体的制备 用Clusterin蛋白（美国BD公司）多次免疫Balb/c小鼠，最后一次加强免疫后 第3天取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞株X63-Ag8. 653杂交融合（融合剂为聚乙二醇）， 制备杂交瘤细胞，筛选能够稳定分泌Clusterin单克隆抗体的细胞株制备抗Clusterin的 单克隆抗体1、2,测定单克隆抗体1、2效价，ELISA验证2者混合后效价叠加，证明1、2是针 对Clusterin蛋白抗原上不同的抗原决定簇。 实施例2Clusterin胶体金试纸条的制备： 根据图1所示，试纸条在硝酸纤维素膜的两端分别设有金标垫和吸收垫，金标垫 上端为样品垫，金标垫包被有纯化的单克隆Clusterin抗体1胶体金偶联标记物，检测线包 被有纯化的单克隆Clusterin抗体2,质控线包被有正常羊抗小鼠 IgG抗体，质控线侧贴有 吸收垫。 (1)胶体金颗粒的制备：将1ml 1 %氯金酸溶液与99ml超纯水混匀得终浓度为 0.01 %的氯金酸溶液，煮沸；吸取1 %柠檬酸三钠1.6ml，将其一次并快速地加入煮沸的 氯金酸溶液中，溶液继续加热至淡黄色转为蓝黑色最终变为亮红色，颜色稳定后继续加热 5min，室温下冷却，补充失水至原体积（见流程图）。在透射电镜下观察，可见金颗粒大小基 本一致，分布均匀。测量100个胶体金颗粒直径，计算平均直径约20nm。 胶体金颗粒的制备过程： 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测尿液Clusterin含量试纸条的制备，在硝酸纤维素膜的两端分别设有金标垫和吸收垫，金标垫上端为样品垫，其特征在于：金标垫包被有纯化的自制Clusterin单克隆抗体1胶体金偶联标记物，检测线包被有纯化的自制Clusterin单克隆抗体2，质控线包被有正常羊抗小鼠IgG抗体。
【技术特征摘要】
1. 一种检测尿液Clusterin含量试纸条的制备，在硝酸纤维素膜的两端分别设有金标 垫和吸收垫，金标垫上端为样品垫，其特征在于：金标垫包被有纯化的自制Clusterin单克 隆抗体1胶体金偶联标记物，检测线包被有纯化的自制Clusterin单克隆抗体2,质控线包 被有正常羊抗小鼠 IgG抗体。2. 根据权利要求1所述的Clusterin单克隆抗体1和单克隆抗体2,其特征在于 Clusterin单克隆抗体1和Clusterin单克隆抗体2为分别针对Clusterin不同抗原决定 簇...
【专利技术属性】
技术研发人员：于晓艳，耿嘉男，邹颖刚，石艳，李相军，孙波，苗春生，刘凯，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林;22
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