一种苦石莲悬浮细胞培养的快速繁殖方法技术

技术编号:10868365 阅读:91 留言:0更新日期:2015-01-07 09:32
本发明专利技术研究了一种苦石莲悬浮细胞培养的快速繁殖方法,包括无菌叶片的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的增殖、悬浮细胞的培养及条件的优化等步骤,本发明专利技术方法所制备的苦石莲悬浮细胞增殖系数高,生长周期短,次生代谢物含量高,为苦石莲药用成分的开发和利用提供新的途径。

【技术实现步骤摘要】
一种苦石莲悬浮细胞培养的快速繁殖方法
本专利技术涉及苦石莲悬浮细胞培养的快繁方法,属于生物

技术介绍
苦石莲,Caesalpinia minax又称为石莲子、老鸦枕头、土石莲子,豆科,有刺藤本,全株被短柔毛。2回双数羽状复叶,羽片5?8对,托叶锥状;小叶12?24枚,近无柄,矩形或倒卵形,长约1.6?3.5厘米,阔0.8?1.2厘米,先端急尖成细尖,基部圆形,全缘。分布广东、广西、四川、云南等地。药材主产云南、广西。此外,广东、四川、江西、福建等地亦产,生于山沟中空旷的溪旁、路边或灌木丛中。主产云南、广西。此外,广东、四川、江西、福建等地亦产,该植物的根、苗亦供药用性苦寒,有散瘀,止痛,清热,去湿的功效,目前主要是野外采集。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供石莲悬浮细胞增殖系数高,生长周期短,次生代谢物含量高,为苦石莲药用成分的开发和利用提供新的途径。 为解决上述技术问题,本专利技术采用下列技术方案:取苦石莲幼嫩叶片,在肥皂水中浸泡5min,流水冲洗25min,超净工作台上0.1%氯化汞处理lOmin,无菌水冲洗7遍,吸水纸吸去表面水分,消毒处理过的叶片接入ER+NAA0.05mg/L+6-BA5.0mg/L+IBA0.25mg/L+2, 4-D1.0mg/L培养基中进行愈伤组织诱导,附加7g/L琼脂,30g/L葡萄糖,ΙΟΟΟΙχ,温度23°C,湿度50%,诱导出来的愈伤组织,接入ER+NAA2.0mg/L+6-BA3.0mg/L +2,4-D3.0mg/L+NAA2.0mg/L+巯基乙醇3_5ml/L培养基中进行愈伤组织增殖,附加7g/L琼脂,30g/L葡萄糖,20001x,温度23°C,湿度50%,取生长良好,长势均一的愈伤组织,称取 0.3g 加入 ER+2,4-D3.0mg/L+KT0.lmg/L+ 对氨基苯甲酸 80-100mg/L+0.35%琼脂+20g/L葡萄糖培养基中水平震荡培养,震荡速度90r/min,每60ml细胞悬浮液装入150ml三角瓶中培养,温度26°C,光照20001x,培养一定时间后,取出样品,用滤纸吸干细胞表面水分。 采用本专利技术制备的苦石莲悬浮细胞长势好,生长周期短,次生代谢物含量高。 下面将结合【具体实施方式】对本专利技术作进一步阐述,但本专利技术要求保护的范围并不局限于下列实施方式。 【具体实施方式】 实施例1取苦石莲幼嫩叶片,在肥皂水中浸泡5min,流水冲洗25min,超净工作台上0.1%氯化汞处理lOmin,无菌水冲洗7遍,吸水纸吸去表面水分,消毒处理过的叶片接入ER+NAA0.05mg/L+6-BA5.0mg/L+IBA0.25mg/L+2, 4-D1.0mg/L培养基中进行愈伤组织诱导,附加7g/L琼月旨,30g/L葡萄糖,100lx,温度23°C,湿度50%,诱导出来的愈伤组织,接入ER+NAA2.0mg/L+6-BA3.0mg/L +2,4-D3.0mg/L+NAA2.0mg/L+巯基乙醇4ml/L培养基中进行愈伤组织增殖,附加7g/L琼脂,30g/L葡萄糖,20001x,温度23°C,湿度50%,取生长良好,长势均一的愈伤组织,称取0.3g加入ER+2,4-D3.0mg/L+KT0.lmg/L+对氨基苯甲酸90mg/L+(X 35%琼脂+20g/L葡萄糖培养基中水平震荡培养,震荡速度90r/min,每60ml细胞悬浮液装入150ml三角瓶中培养,温度26°C,光照20001x,培养一定时间后,取出样品,用滤纸吸干细胞表面水分,增长率47%。 实施例2取苦石莲幼嫩叶片,在肥皂水中浸泡5min,流水冲洗25min,超净工作台上0.1%氯化汞处理lOmin,无菌水冲洗7遍,吸水纸吸去表面水分,消毒处理过的叶片接入ER+NAA0.05mg/L+6-BA5.0mg/L+IBA0.25mg/L+2, 4-D1.0mg/L培养基中进行愈伤组织诱导,附加7g/L琼脂,30g/L葡萄糖,ΙΟΟΟΙχ,温度23°C,湿度50%,诱导出来的愈伤组织,接入ER+NAA2.0mg/L+6-BA3.0mg/L +2,4-D3.0mg/L+NAA2.0mg/L+巯基乙醇3ml/L培养基中进行愈伤组织增殖,附加7g/L琼脂,30g/L葡萄糖,20001x,温度23°C,湿度50%,取生长良好,长势均一的愈伤组织,称取0.3g加入ER+2,4-D3.0mg/L+KT0.lmg/L+对氨基苯甲酸80mg/L+(X 35%琼脂+20g/L葡萄糖培养基中水平震荡培养,震荡速度90r/min,每60ml细胞悬浮液装入150ml三角瓶中培养,温度26°C,光照20001x,培养一定时间后,取出样品,用滤纸吸干细胞表面水分,增长率45%。 实施例3取苦石莲幼嫩叶片,在肥皂水中浸泡5min,流水冲洗25min,超净工作台上0.1%氯化汞处理lOmin,无菌水冲洗7遍,吸水纸吸去表面水分,消毒处理过的叶片接入ER+NAA0.05mg/L+6-BA5.0mg/L+IBA0.25mg/L+2, 4-D1.0mg/L培养基中进行愈伤组织诱导,附加7g/L琼脂,30g/L葡萄糖,ΙΟΟΟΙχ,温度23°C,湿度50%,诱导出来的愈伤组织,接入ER+NAA2.0mg/L+6-BA3.0mg/L +2,4-D3.0mg/L+NAA2.0mg/L+巯基乙醇5ml/L培养基中进行愈伤组织增殖,附加7g/L琼脂,30g/L葡萄糖,20001x,温度23°C,湿度50%,取生长良好,长势均一的愈伤组织,称取0.3g加入ER+2,4-D3.0mg/L+KT0.lmg/L+对氨基苯甲酸100mg/L+0.35%琼脂+20g/L葡萄糖培养基中水平震荡培养,震荡速度90r/min,每60ml细胞悬浮液装入150ml三角瓶中培养,温度26°C,光照20001x,培养一定时间后,取出样品,用滤纸吸干细胞表面水分,增长率42%。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种苦石莲悬浮细胞培养的快速繁殖方法,包括无菌叶片的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的增殖、悬浮细胞的培养及条件的优化,其主要步骤如下:(1)取苦石莲幼嫩的叶片,在超净工作台上对其进行消毒处理;(2)取步骤(1)消毒处理过的叶片接入ER+NAA0.05mg/L+6‑BA5.0mg/L+IBA0.25mg/L+2,4‑D1.0mg/L培养基中进行愈伤组织诱导,附加7g/L琼脂,30g/L葡萄糖,1000lx,温度23℃,湿度50%;(3)取步骤(2)诱导出来的愈伤组织,接入ER+NAA2.0mg/L+6‑BA3.0mg/L +2,4‑D3.0mg/L+NAA2.0mg/L+巯基乙醇3‑5ml/L培养基中进行愈伤组织增殖,附加7g/L琼脂,30g/L葡萄糖,2000lx,温度23℃,湿度50%;(4)取步骤(3)生长良好,长势均一的愈伤组织,称取0.3g加入ER+2,4‑D3.0mg/L+KT0.1mg/L+对氨基苯甲酸80‑100mg/L+0.35%琼脂+20g/L葡萄糖培养基中震荡培养,培养一定时间后,取出样品,用滤纸吸干细胞表面水分。

【技术特征摘要】
1.一种苦石莲悬浮细胞培养的快速繁殖方法,包括无菌叶片的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的增殖、悬浮细胞的培养及条件的优化,其主要步骤如下: (I)取苦石莲幼嫩的叶片,在超净工作台上对其进行消毒处理; (2 )取步骤(I)消毒处理过的叶片接入 ER+NAA0.05mg/L+6-BA5.0mg/L+IBA0.25mg/L+2, 4-D1.0mg/L培养基中进行愈伤组织诱导,附加7g/L琼脂,30g/L葡萄糖,ΙΟΟΟΙχ,温度23。。,湿度 50% ; (3)取步骤(2)诱导出来的愈伤组织,接入ER+NAA2.0mg/L+6-BA3.0mg/L +2,4-D3.0mg/L+NAA2.0mg/L+巯基乙醇3_5ml/L培养基中进行愈伤组织增殖,附加7g/L琼脂,30g/L葡萄糖,20001x,温度 23。。,湿度 50% ; (4)取步骤(3)生长良好,长势均一的愈伤组织,称取0.3g加入ER+2,4-D3.0mg/L+KT0.lmg/L+对氨基苯甲酸80-100mg/L...

【专利技术属性】
技术研发人员:杨存
申请(专利权)人:南京通泽农业科技有限公司
类型:发明
国别省市:江苏;32

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