本发明专利技术公开了一种用于检测五常大米主要品种的引物对、检测试剂盒及其检测方法，所述引物对，包括：特征DNA片段S48-468引物对，核苷酸序列为SEQIDNO：1和SEQIDNO：2所示；特征DNA片段S75-632/692引物对，核苷酸序列为SEQIDNO：3和SEQIDNO：4所示；特征DNA片段S43-1000引物对，核苷酸序列为SEQIDNO：5和SEQIDNO：6所示；特征DNA片段SBE1引物对，核苷酸序列为SEQIDNO：7和SEQIDNO：8所示；特征DNA片段S73-2438引物对，核苷酸序列为SEQIDNO：9和SEQIDNO：10所示。本发明专利技术可实现通过一次多重PCR反应进行五常大米主要品种鉴定的目的，从而实现对五常大米品种的快速检测。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学方法检测领域，尤其是涉及一种用于检测五常大米主要品种的引物对及其检测方法。
技术介绍
一、五常大米主要品种按GB/T19266-2008《地理标志产品 五常大米》标准的规定，五常大米可使用的品种被界定为“五优稻、松粳系列及通过审定的其它符合五常种植条件的优质粳稻品种”，据估计，五常大米有40多个品种。按照文献及网上数据库查询到的信息，五常大米的主要品种有：（1）五优稻系列：包括由田永太育成的五优稻1号及五优稻4号（五优稻4号为目前五常大米主栽品种），以及不同育种单位以五优稻1号为亲本选育出的大米品种，如五常市龙凤山长粒香水稻研究所和五常市种子公司育成的五优稻3号（五优C），黑龙江省农业科学院五常水稻研究所育成的五优稻A，黑龙江省农业科学院耕作栽培研究所育成的龙稻7号、龙香稻2号，东北农业大学育成的东农425、东农426、东农427、东农428、东农429、东农430，黑龙江省五常种子公司和哈尔滨工业大学生命科学工程所育成的五工稻1号，黑龙江省监狱管理局农业科学研究所育成的龙盾106，这些品种在遗传上均为五优稻1号的后代。（2）松粳系列：包括由黑龙江省农业科学院第二水稻所育成的松粳3、松粳6、松粳7、松粳8、松粳9、松粳10、松粳12，黑龙江省农业科学院五常水稻研究所育成的松粳香1号、松粳香2号，松粳系列的部分品种与五优稻1号具有遗传亲缘关系。从遗传系谱看，五优稻1号骨干亲本是从松粳3号品系变异个体中经系统选育成，而以五优稻1号为亲本培育出的品种有：五工稻1号、五优稻3号、五优稻4号、松粳7号、松粳8号、松粳9号、松粳12号、龙稻7号、东农425、东农426、东农427、东农428、东农429、东农430、龙盾106。因而，上述这些品种与五优稻1号及五优稻4号亲缘关系相近。二、五常大米主栽品种五优稻4号的特征据专家估计，五常市的200万亩水稻种植田中，约90%的稻田种植五优稻4号，五优稻4号是五常大米的主栽品种。五优稻4号由黑龙江省五常市中粮美裕长粒香水稻研究所的田永太于1999年育成，是从五优稻1号优良变异株中经4代系统选育而成的常规种，并于2009年通过审定（审定编号为黑审稻2009005）。五优稻4号为晚熟品种，生育期138-140天，所需活动积温2800℃，株高98-105cm，穗长25cm，穗粒数110粒，千粒重28g，分蘖能力中上，抗病性强，抗倒能力中等。受产区独特的地理、气候等影响，五优稻4号干物质积累多、水稻成熟期产区昼夜温差大，大米中可速溶的双链糖积累较多。但五优稻4号存在熟期晚，抗倒能力差等缺点，栽培方法不当就可能导致成熟期拖后、倒伏而严重减产。综合多个研究资料，五优稻4号糙米率为82～84%，精米率为70～76%，整精米率为65～70%，长宽比为2.5～2.7，垩白度为1～3%，胶稠度为67～73mm，直链淀粉为17～18%，蛋白质含量为6.0～6.6%，食味评分为85～93分，属于一级优质米。五优稻4号品种粒型细长，五优稻4号的米粒为长粒，青白透明，蒸煮时具备特有的清香味，饭粒表面有油光，口感绵软略粘、微甜、略有韧性，冷却后仍保持良好口感，剩饭不回生。与五优稻4号在米粒型状相似的品种出现较多（如松粳6号、松粳7号、松粳9号、五优稻1号），但远不及五优稻4号食味好。三、五常大米的常见掺假手段五常市水稻种植面积不是很大，年产仅80万吨，而每年国内市场销售的五常大米达1000多万吨，可见市面上销售的五常大米存在较多的掺假造假现象。据报道，不法商家使用639或非五常产的普通长粒米冒充“稻花香”，或将仙桃香米和五常圆江米混合冒充“五常稻花香”，或在普通大米中添加香精冒充“五常稻花香”。五常大米主栽品种五优稻4号的出米率最高为每100斤出米58斤，收购价在2.4-2.7元/斤，价格在10元/斤以上的才有可能是100%纯正的五优稻4号。因而，由于五常大米（特别是五优稻4号）独特和美味的品质及口感，正宗的五常大米价格较为昂贵，给了不法大米企业及商家有利可图的造假动机。 五常市共有290多家大米生产企业，目前核准允许使用地理标志保护产品专用标志的大米企业为92家，仍有一些企业在第二批申请使用地理标志保护产品专用标志。在米业公司实际生产和销售过程中，存在较多不规范行为：（1）由于五优稻4号的稻谷收购价常年较低，因而米业公司一般会默许农民掺入其它的米。当米业公司生产的米掺杂有其它的品种时，米业公司常见的解决方法是不使用地理标志保护产品专用标志，而改用较模棱两可的标志，厂址注明为五常市，并经常使用“稻花香”等非正规命名，以规避标签不合格情况。（2）由于地理环境条件相近，吉林省榆树县及黑龙江省尚志县种植的五优稻4号与五常市的五优稻4号口感相差不大，但由于吉林省榆树县及黑龙江省尚志县不属于五常大米地理标志产品保护区域，因而此两个地方产出的五优稻4号多卖入五常市，并由五常市加工出售。（3）不法商家直接使用非五常大米品种进行冒充或掺杂。常用于掺入五优稻4号的大米品种有639、东农425、东农428、吉林101、农阳16号。在掺假的品种中，由于639不抗病，现在种植较少，而东农425、东农428最常用于五常大米的掺假。由于东农425、东农428与五优稻4号遗传亲缘关系近，米粒外型极为相近，给鉴定工作带来极大难度。五常大米掺假造假现象非常严重，不仅造成了消费者的经济损失，也严重损害了“五常大米”的品牌形象，破坏了“地理标志”产品的信誉，影响了市场秩序，给监管工作带来极大的困难。四、现有的五常大米品种鉴定方法五常大米品种的鉴定仅是由育种专家的肉眼观察和经验判断，目前仍无有效的鉴定方法，主要原因在于：（1）五常大米主要品种众多，达40多种，且多数品种亲缘关系相近，部分品种的大米外观极为相近（如东农425、东农428与五优稻4号的大米外观相近），感官鉴定方法的准确度在很大程度上依赖于育种专家的知识水平和经验，很容易出现误判结果。（2）网络数据库上无五常大米主要品种的DNA序列，因而无法直接通过五常大米主要品种的DNA序列设计引物，以达到通过DNA方法鉴别五常大米主要品种的目的。（3）五常大米的品种多，需要搜集五常大米主要品种以及掺杂至五常大米的常见大米品种的难度较大。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供用于检测五常大米主要品种的引物对及其试剂盒和检测方法。本专利技术使用随机扩增多态性DNA（RAPD）对五常大米主要品种（五优稻4号及其衍生品种、五优稻1号、东农425、东农428、松粳9号、松粳6号、松粳3号、松粳香2号）以及掺杂至五常大米的常见品种（639、绥精4号等）进行PCR扩增，从中筛选出各品种特异性条带，开发成SCAR标记，可实现通过一次多重PCR反应进行五常大米主要品种鉴定的目的，从而实现对五常大米品种的快速检测。为实现本专利技术的目的，采用的技术方案为：1、一种用于检测五常大米主要品种的引物对，包括：特征DNA片段S48-468引物对，所述引物对的核苷酸序列为SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示；特征DNA片段S7本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于检测五常大米主要品种的引物对，包括： 特征DNA片段S48‑468引物对，所述引物对的核苷酸序列为SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示；特征DNA片段S75‑632/692引物对，所述引物对的核苷酸序列为SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示；特征DNA片段S43‑1000引物对，所述引物对的核苷酸序列为SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示；特征DNA片段SBE1引物对，所述引物对的核苷酸序列为SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8所示；特征DNA片段S73‑2438引物对，所述引物对的核苷酸序列为SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10所示。
【技术特征摘要】
1.一种用于检测五常大米主要品种的引物对，包括：
特征DNA片段S48-468引物对，所述引物对的核苷酸序列为SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示；
特征DNA片段S75-632/692引物对，所述引物对的核苷酸序列为SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示；
特征DNA片段S43-1000引物对，所述引物对的核苷酸序列为SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示；
特征DNA片段SBE1引物对，所述引物对的核苷酸序列为SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8所示；
特征DNA片段S73-2438引物对，所述引物对的核苷酸序列为SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10所示。
2.包括权利要求1所述引物对的五常大米主要品种检测试剂盒。
3.一种检测五常大米主要品种的方法，包括步骤：
（1）配制PCR反应体系，进行多重PCR扩增；
（2）PCR扩增条件为：95℃ 3min；95℃ 30s，55℃ 30s，72℃ 2min，35个循环，72℃ 10min；
（3...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈国培，郑彦婕，黎永乐，赖心田，林霖，杨国武，
申请(专利权)人：深圳市计量质量检测研究院，
类型：发明
国别省市：广东;44
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