一种大米蛋白抗氧化活性肽的制备方法，属于大米蛋白精深加工技术领域。本发明专利技术以大米为原料，经粉碎、碱溶酸沉、离心分离、上清液等电点沉淀、沉淀洗涤、加水均质后再经精制中性蛋白酶水解、离心分离、上清液经冷冻干燥得到了分子量分布范围在３９２～１３６７Ｄａ，具有抗氧化活性的大米蛋白肽。该产品所用原料来源广泛，成本低廉，方法简便，无毒安全，所得产品能够清除自由基，抑制亚油酸过氧化活性，螯合金属离子，具有营养和保健两方面的优越性。本发明专利技术技术设计科学合理，对实现大米蛋白的综合利用和提高其附加值具有重要的意义。
【技术实现步骤摘要】
，属于大米蛋白深加工
， 用于研制开发保健品和功能食品的基料。技术背景大米在中国乃至世界上都是最重要的植物之一，大米蛋白是发酵工业生产 味精、乳酸、柠檬酸及其它生化药品后大量存在的副产物，干基蛋白质含量在50%以上，属于优质谷物蛋白，有良好的氨基酸组成配比，含人体必需的八种氨 基酸，有极其重要的利用价值，是一种潜在的植物蛋白资源。从经济的角度来看， 从大米及其加工副产品中开发出抗氧化食品，原料来源容易，成本低，消费者 容易接受。以前往往将其随废液排走造成浪费和污染，现在多将其干燥后用作 动物饲料，或者只进行了部分未确定的酶法改性，但工业附加值低。因此将大米 蛋白酶解而得到生物活性肽不失为进一步开发利用大米蛋白的途径，是大米深 加工产品的发展方向。国内外尚未有大米蛋白抗氧化肽的报道，本专利技术产品分 子量分布范围在392 1367Da，能够清除自由基，抑制亚油酸过氧化活性，螯 合金属离子，是一种具有抗氧化活性的大米蛋白肽，具有营养和保健两方面的 优越性。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供大米蛋白抗氧化活性肽的制备方法，所得产品能够清 除自由基，抑制亚油酸过氧化，螯合金属离子，能有效地起到抗氧化作用，具 有营养和保健两方面的优越性，方法简便，成本低廉，易得，无毒，安全。本专利技术的技术方案 ，通过粉碎大 米，加水，碱性环境下溶解大米蛋白，离心分离收集上清液，调节上清液pH值 等电点沉淀，洗涤沉淀至中性，加水均质，再添加精制中性蛋白酶进行水解反 应，灭酶冷却，离心分离所得上清液，真空浓縮，冷冻干燥得到大米蛋白抗氧 化活性肽；(1) 原料粉碎大米粉碎至过40目筛网；(2) 碱性环境溶解大米蛋白称取(1)所得原料大米粉，加水，大米粉与水质量比为1:12，并调节提取液pH值至12.75~12.85， 20 。C、 600 800 r/min 搅拌反应2 h;(3) 离心分离将(2)所得反应料液3000 4000 r/min、离心分离15 20 min 收集上清液；(4) 上清液处理调节(3)所得上清液pH值至5.45-5.55，沉淀45~90 min;(5) 洗涤沉淀采用去离子水反复洗涤沉淀至中性；(6) 沉淀加水均质按沉淀与水的质量比为1:20 1:30，向(5)所得沉淀 中加去离子水混匀并均质；(7) 蛋白酶解调节(6)均质后的溶液pH值至6.90 7.10，温度35 40。C， 按 =1.33 %~ 1.55%的比例添加精制中性蛋白酶，保持pH值、温度不变， 水解2.5 3.5h，所用精制中性蛋白酶酶活为130,000 U/g;(8) 灭酶冷却(7)所述水解反应结束后升温至60 'C灭酶10min，快速 冷却反应液；(9) 离心分离将(8)所述反应液离心分离，2500-3500 r/min、离心8-12 min， 收集上清液；(10) 真空浓縮将(9)所得上清液在真空度0.09 MPa、温度为45~50°C 进行真空浓縮，浓縮至固形物达60%以上；(11) 冷冻干燥冷冻干燥(10)所得浓縮液至粉末状，冷冻干燥真空度 为10 30Pa，冻干温度低于-3(TC，干燥时间20 24h，水分含量在5%以下，干 燥后的产品即为大米蛋白抗氧化活性肽。本专利技术的有益效果本专利技术所用原料来源广泛，成本低廉，方法简便，无 毒安全，所得产品大米蛋白抗氧化活性肽能够清除自由基，抑制亚油酸过氧化 活性，螯合金属离子，具有营养和保健两方面的优越性。本专利技术技术设计科学 合理，对实现大米蛋白的综合利用和提高其附加值具有重要的意义。 附图说明图1产品的DPPH清除能力。图2产品在亚油酸体系中抗氧化能力。图3产品的金属离子螯合能力。图4大米蛋白抗氧化活性肽制备工艺流程示意图。具体实施方式实施例1称取经过粉碎、过40目筛的3kg大米粉，加入水36L搅拌混匀，调节pH 值至12.80， 20 。C下搅拌(800r/min) 2h后，离心分离(3500 r/min,15 min)， 所得上清液pH值调至5.5，将所得悬浊液置于4 。C下沉淀1 h后，离心分离GOOO r/min， 10 min)得沉淀，采用去离子水反复洗涤沉淀至中性，之后按1:25的比 例在沉淀中加水混匀并均质，pH值调至7.00，温度37。C后，按E/S二1.33。/。 的比例添加精制中性蛋白酶(酶活为130,000 U/g)作用3 h;结束后60 °C、 10min 灭酶，酶解液冷却至室温后离心分离(3500 r/min， 10 min)，真空浓縮(真空度 0.09 MPa，温度为48。C)，最后真空度为20Pa， -30 。C对酶解液进行冷冻干燥20 h，得到大米蛋白抗氧化活性肽。DPPH (l,l-二苯基苦基苯肼)自由基清除能力测定将干燥的水解产物分别溶解在4 mL蒸馏水中，制得浓度为0%， 0.04%， 0.08%, 0.12%， 0.16%, 0.2%和0.24% (m/v)蛋白质溶液。在各样品溶液中添加l mL 的40pMDPPH自由基的乙醇溶液。25 。C下静置30min，于517nm测定吸收值。 根据以下公式计算不同浓度样品中清除的自由基清除DPPH自由基能力(％) =xlOOA空e指1 mL的40 )iMDPPH自由基的乙醇溶液加入到浓度为0%的4 mL蒸 馏水中测得的吸收值；A样品指1 mL的40 )iMDPPH自由基的乙醇溶液分别加入 到其余浓度的4 mL样品溶液中测得的吸收值。产品在亚油酸体系中抗氧化能力测定一硫氰酸铁法比较水解产物、a-生育酚、TBHQ (叔丁基对苯二酚)的抗氧化能力将10 mg水解产物、10 mg a-生育酚、10 mg TBHQ分别溶解于10 mL的50 mM (pH7.0)的磷酸盐缓冲液中，各加入0.15mL亚油酸和10mL99.5。/。乙醇。 最后用蒸馏水定容至25 mL，称之为亚油酸混合液。之后密闭放在暗处4(TC恒 温。空白对照以超纯水替代样品、(x-生育酚、TBHQ。过氧化值的测定采用硫氰酸铁法:取0.1 mL亚油酸混合液，依次加入4.7 mL 75%的乙醇和0.1 mL 30%的硫氰酸铵，再加入0.1 mL 0.02 M己经溶解于3.5% 盐酸中的氯化亚铁，快速混匀，准确反应3 min后，在500 nm测定吸光度。0 时刻测定值为Ao，以后每隔24h测定一次，计为At。样品的抗氧化能力以144h 时的氧化抑制率表示，抑制率按下式计算空白管A， (t=144h) 一样品管A，(t=144h)抑制率=-X 100空白管A， (t=i44 h)—样品营A， (—0 h)图2显示，酶解产物具有明显的抗氧化能力，其抗氧化能力接近于a-生育 酚，比TBHQ的抗氧化能力稍差，但是TBHQ属于化学合成的抗氧化剂，TBHQ 适用范围会受到限制。金属离子螯合能力测定酶解样品与EDTA (乙二胺四乙酸)金属离子螯合能力比较 用超纯水配置浓度分别为0.1 mg/mL、 0.2mg/mL、 0.3 mg/mL、 0.4mg/mL、 0.5 mg/mL的酶解产物样品溶液，以及相应浓度的EDTA溶液，取1 mL样品液， 加入0.05 mL 2 mM FeCl2溶液和1.85 mL超纯水，混合均匀，再加入O.lmL 5 mM fer本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种大米蛋白抗氧化活性肽的制备方法，其特征是粉碎大米，加水，碱性环境下溶解大米蛋白，离心分离收集上清液，调节上清液ｐＨ值等电点沉淀，洗涤沉淀至中性，加水均质，再添加精制中性蛋白酶进行水解反应，灭酶冷却，离心分离所得上清液，真空浓缩，冷冻干燥得到大米蛋白抗氧化活性肽； （１）原料粉碎：大米粉碎至过４０目筛网； （２）碱性环境溶解大米蛋白：称取（１）所得原料大米粉，加水，大米粉与水质量比为１∶１２，并调节提取液ｐＨ值至１２．７５～１２．８５，２０℃、６００～８００ｒ／ｍｉｎ搅拌反应２ｈ； （３）离心分离：将（２）所得反应料液３０００～４０００ｒ／ｍｉｎ、离心分离１５～２０ｍｉｎ收集上清液； （４）上清液处理：调节（３）所得上清液ｐＨ值至５．４５～５．５５，沉淀４５～９０ｍｉｎ； （５）洗涤沉淀：采用去离子水反复洗涤沉淀至中性； （６）沉淀加水均质：按沉淀与水的质量比为１∶２０～１∶３０，向（５）所得沉淀中加去离子水混匀并均质； （７）蛋白酶解：调节（６）均质后的溶液ｐＨ值至６．９０～７．１０，温度３５～４０℃，按［Ｅ／Ｓ］＝１．３３％～１．５５％的比例添加精制中性蛋白酶，保持ｐＨ值、温度不变，水解２．５～３．５ｈ，所用精制中性蛋白酶酶活为１３０，０００Ｕ／ｇ； （８）灭酶冷却：（７）所述水解反应结束后升温至６０℃灭酶１０ｍｉｎ，快速冷却反应液； （９）离心分离：将（８）所述反应液离心分离，２５００～３５００ｒ／ｍｉｎ、离心８－１２ｍｉｎ，收集上清液； （１０）真空浓缩：将（９）所得上清液在真空度０．０９ＭＰａ、温度为４５～５０℃进行真空浓缩，浓缩至固形物达６０％以上； （１１）冷冻干燥：冷冻干燥（１０）所得浓缩液至粉末状，冷冻干燥真空度为１０～３０Ｐａ，冻干温度低于－３０℃，干燥时间２０～２４ｈ，水分含量在５％以下，干燥后的产品即为大米蛋白抗氧化活性肽。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张晖，郭晓娜，王立，姚惠源，张君慧，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]
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