GH61多肽变体以及编码其的多核苷酸制造技术

本发明专利技术涉及GH61多肽变体。本发明专利技术还涉及编码这些变体的多核苷酸；包括这些多核苷酸的核酸构建体、载体以及宿主细胞；以及使用这些变体的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】GH61多肽变体以及编码其的多核苷酸 序列表的引用 本申请包括一个计算机可读形式的序列表，将其通过引用结合在此。 专利技术背景 专利
本专利技术涉及GH61多肽变体、编码这些变体的多核苷酸、产生这些变体的方法以及 使用这些变体的方法。 相关技术说明 纤维素是单糖葡萄糖通过β -1，4-键共价连接的一种聚合物。许多微生物产生水 解β-连接的葡聚糖的酶。这些酶包括内切葡聚糖酶、纤维二糖水解酶、以及β-葡糖苷酶。 内切葡聚糖酶在任意位置消化纤维素聚合物，使其打开而被纤维二糖水解酶攻击。纤维二 糖水解酶从纤维素聚合物的末端顺序释放纤维二糖分子。纤维二糖是葡萄糖的一种水溶性 β -1，4-连接二聚体。β -葡糖苷酶将纤维二糖水解成葡萄糖。 将木质纤维素原料转化成乙醇具有如下优点，即易于获得大量原料、避免燃烧或 填埋材料的期望性、以及乙醇燃料的清洁性。现在认为木材、农业残余物、草本作物、和城市 固体废物是生产乙醇的原料。这些材料主要由纤维素、半纤维素和木质素组成。一旦木质 纤维素被转化成可发酵糖，例如葡萄糖，则这些可发酵糖可以容易地由酵母发酵为乙醇。 W02005/074647、W02008/148131、以及 W02011/035027 披露 了来自太瑞斯 梭孢壳霉（Thielavia terrestris)的具有纤维素分解增强活性的分离的GH61多 肽及其多核苷酸。W02005/074656和W02010/065830披露了来自金黄色嗜热子囊菌 (Thermoascus aurantiacus)的具有纤维素分解增强活性的分离的GH61多肽及其多核 苷酸。W02007/089290 和 W02012/149344 披露了 来自里氏木霉（Trichoderma reesei) 的具有纤维素分解增强活性的分离的GH61多肽及其多核苷酸。W02009/085935、 W02009/085859、W02009/085864、以及 W02009/085868 披露了来自嗜热毁丝霉 (Myceliophthora thermophila)的具有纤维素分解增强活性的分离的GH61多肽及其 多核苷酸。W02010/138754披露了来自烟曲霉（Aspergillus fumigatus)的具有纤维 素分解增强活性的分离的GH61多肽及其多核苷酸。W02011/005867披露了来自嗜松青 霉（Penicillium pinophilum)的具有纤维素分解增强活性的分离的GH61多肽及其多 核苷酸。W02011/039319披露了来自嗜热子囊菌属物种（Thermoascus sp)的具有纤维 素分解增强活性的分离的GH61多肽及其多核苷酸。W02011/041397披露了来自青霉属 物种（Penicilliumsp)的具有纤维素分解增强活性的分离的GH61多肽及其多核苷酸。 W02011/041504披露了来自甲壳嗜热子囊菌（Thermoascus crustaceus)的具有纤维素 分解增强活性的分离的GH61多肽及其多核苷酸。W02012/030799披露了来自棘孢曲霉 (Aspergillus aculeatus)的具有纤维素分解增强活性的分离的GH61多肽及其多核苷酸。 W02012/113340披露了来自疏棉状嗜热丝孢菌（Thermomyceslanuginosus)的具有纤维素 分解增强活性的分离的GH61多肽及其多核苷酸。W02012/122477披露了来自Aurantiporus alborubescens、囊状长毛盘菌（Trichophaeasaccata)、以及托姆青霉（Penicillium thomii)的具有纤维素分解增强活性的分离的GH61多肽及其多核苷酸。W02012/135659 披露了来自柄篮状菌（Talaromyces stipitatus)的具有纤维素分解增强活性的分离的 GH61多肽及其多核苷酸。W02012/146171披露了来自特异腐质霉（Humicola insolens) 的具有纤维素分解增强活性的分离的GH61多肽及其多核苷酸。W02012/101206披露了 来自樟绒枝霉（Malbranchea cinnamomea)、Talaromyces leycettanus、以及嗜热毛壳菌 (Chaetomium thermophilum)的具有纤维素分解增强活性的分离的GH61多肽及其多核苷 酸。W02013/043910披露了来自梭孢端梗霉（Acrophialophorafusispora)以及瘤孢棒囊孢 壳（Corynascus sepedonium)的具有纤维素分解增强活性的分离的GH61多肽及其多核苷 酸。 W02012/044835和W02012/044836披露了具有纤维素分解增强活性连同改善的热 活性和热稳定性的GH61多肽变体。 在本领域中存在对具有纤维素分解增强活性连同增加的热稳定性的GH61多肽的 需求，用作木质纤维素在高温下的降解中使用的酶组合物的组分。 本专利技术提供了具有增加的热稳定性的GH61多肽变体。 专利技术概述 本专利技术涉及分离的GH61多肽变体，其包含在与SEQ ID N0:30的成熟多肽的位 置 26、32、34、40、41、42、47、56、72、102、123、138、149、152、163、164、166、169、186、200、207、 213、219、222、234、246、249、以及250相对应的一个或多个（例如若干个）位置处的取代， 其中这些变体具有纤维素分解增强活性。 本专利技术还涉及编码这些变体的分离的多核苷酸；包含这些多核苷酸的核酸构建 体、载体和宿主细胞；以及产生这些变体的方法。 本专利技术还涉及用于降解或转化纤维素材料的方法，包括：在本专利技术的GH61多肽变 体的存在下，用酶组合物处理该纤维素材料。在一个方面，这些方法进一步包括回收降解的 或转化的纤维素材料。 本专利技术还涉及产生发酵产物的方法，包括：(a)在本专利技术的GH61多肽变体的存在 下，用酶组合物使纤维素材料糖化；(b)用一种或多种（例如若干种）发酵微生物发酵糖化 的纤维素材料，以产生该发酵产物；以及（c)从发酵中回收该发酵产物。 本专利技术还涉及发酵纤维素材料的方法，包括：用一种或多种（例如若干种）发酵微 生物发酵该纤维素材料，其中该纤维素材料在本专利技术的GH61多肽变体的存在下用酶组合 物糖化。在一个方面，发酵纤维素材料产生发酵产物。在另一个方面中，这些方法进一步包 括从发酵中回收该发酵产物。 附图简要说明 图1示出编码具有纤维素分解增强活性的GH61B多肽的烟曲霉基因的基因组DNA 序列（SEQ ID N0:29)和推断的氨基酸序列（SEQ ID N0:30)。 图2示出pMMar44的限制性图谱。 图3示出pMMar49的限制性图谱。 图4示出pMMar45的限制性图谱。 图5示出pDFngll3的限制性图谱。 图6示出pDFngl53-4的限制性图谱。 图7示出pDFngl54-17的限制性图谱。 图8示出pDFngl55-33的限制性图谱。 图9示出pDFngl56-37的限制性图谱。 图10示出pDFngl57-51的限制性图谱。 图11示出pBGMH16的限制性图本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种GH61多肽变体，其包含在与SEQ ID NO:30的成熟多肽的位置138、219、26、32、34、40、41、42、47、56、72、102、123、149、152、163、164、166、169、186、200、207、213、222、234、246、249、以及250相对应的一个或多个位置处的取代，其中该变体具有纤维素分解增强活性，并且其中该变体与亲本GH61多肽的氨基酸序列具有至少60％，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但少于100％的序列一致性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.04.27 US 61/639,6481. 一种GH61多肽变体，其包含在与SEQ ID N0:30的成熟多肽的位置138、219、26、32、 34、40、41、42、47、56、72、102、123、149、152、163、164、166、169、186、200、207、213、222、234、 246、249、以及250相对应的一个或多个位置处的取代，其中该变体具有纤维素分解增强活 性，并且其中该变体与亲本GH61多肽的氨基酸序列具有至少60%，至少65%、至少70%、至 少75 %、至少80 %、至少81 %、至少82 %、至少83 %、至少84 %、至少85 %、至少86 %、至少 87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少 99%、但少于100%的序列一致性。2. 如权利要求1中任一项所述的变体，该变体是亲本GH61多肽的一种选自下组的变 体，该组由以下各项组成： (a) 与 SEQ ID N0:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、 42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、 92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、 132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、56、158、160、162、164、166、168、 409、或411的成熟多肽具有至少60%序列一致性的一种多肽； (b) 由多核苷酸编码的一种多肽，该多核苷酸在至少低严谨度条件下与以下各项杂 交：（i)SEQ ID ΝΟ:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、 45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、 95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、 135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161、163、165、167、408、或 410 的成熟多肽编码序列，或（ii) (i)的全长互补体； (c) 由与 SEQ ID ΝΟ:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、 41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、 91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、 131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161、163、165、167、 408、或410的成熟多肽编码序列具有至少60%序列一致性的多核苷酸编码的一种多肽；以 及 (d) SEQ ID N0:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、 44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、 94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、 134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、56、158、160、162、164、166、168、409、或 411的成熟多肽的一个片段，其具有纤维素分解增强活性。3. 如权利要求2所述的变体，其中该亲本GH61多肽包含SEQ ID N0:2、4、6、8、10、 12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、 62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、 110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、 148、150、152、154、56、158、160、162、164、166、168、409、或 411 的成熟多...

【专利技术属性】
技术研发人员：J林，D博安，M马兰塔，L贝雷斯福德，M拉姆萨，M斯威尼，M沃顾里斯，E兹纳梅罗斯基，FW拉斯马森，
申请(专利权)人：诺维信股份有限公司，诺维信公司，
类型：发明
国别省市：美国;US