人附睾分泌蛋白4定量测定试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种适用于全自动化学发光免疫分析仪Caris 200的人附睾分泌蛋白4(HE4)定量测定试剂盒，特别涉及双抗体夹心吖啶酯标记管式化学发光法定量检测人体血清中HE4浓度水平的试剂盒的制备工艺。该试剂盒采用双抗体夹心免疫分析方法，利用化学发光磁性微球免疫技术，包被抗-HE4抗体的磁性微球将和反应杯中的标准品/样本中的HE4特异结合，然后再与吖啶盐标记的另一株抗-HE4抗体反应形成免疫复合物，经预激发液(Pre-Trigger)和激发液(Trigger)的酸碱化学反应，即可测量化学发光反应的相对光单位(RLU/s)；标准品/样本中HE4的含量和光学系统所测量出的相对光单位(RLU/s)成正比关系，通过标准曲线拟合，从而对可对血清标本中HE4含量进行定量测定；具有灵敏度高、特异性强、稳定性好、操作简便及成本低廉等显著优点。

【技术实现步骤摘要】
人附睾分泌蛋白4定量测定试剂盒
本专利技术涉及一种适用于全自动化学发光免疫分析仪Caris 200的人附睾分泌蛋 白4化uman巧ididymiS secretory protein 4,肥4)定量测定试剂盒，特别涉及双抗体夹 也吓巧醋标记管式化学发光法定量检测人体血清中肥4浓度水平的试剂盒的制备工艺。
技术介绍
卵巢癌在妇科肿瘤中发病率仅次于子宫颈癌和子宫体癌居第H位，而其致死率却 占据首位。该主要是因为卵巢深藏在骨腔内，卵巢癌早期症状十分不明显，且该些症状易与 其他的非癌性情况相混淆，超过70%的患者就诊时已经是晚期，因此卵巢癌又被称为沉 默杀手。目前卵巢癌的诊断方法主要有细胞学和组织学检测；影像学检查和妇科检查； W及血液与体液检测（肿瘤标志物）该H种方法。细胞学和组织学检测涉及穿刺取样，有 一定创伤，作为确诊手段，一般不用于常规的筛查。适用于早期筛查的无创检查方法主要是 影像学检查/妇科检查和肿瘤标志物检测。影像学诊断则包括超声，CT等，近年来还发展了 超音波阴道检查（trans-vaginal sonogram)方法，该些方法只能提示卵巢形态出现异常， 需要其他方法配合进一步检查。妇科检查是常见的体检方法，主要通过医生对盆腔或者体 表能触及的异常部位的检查来发现，该对于医生要求比较高。因此，肿瘤标志物已成为卵巢 癌治疗及病情监测不可少的手段。I期卵巢癌经治疗后约90%可长期生存，但I期卵巢癌 能被早期诊断的尚不到25%。因此，联合检测血清中的肥4与CA125,为早期筛查卵巢癌带 来了希望。到目前为止，CA125和肥4联合检测是区分盆腔肿块性质最有效的无创检测方 法。但临床应用才刚刚开始，尤其对于肥4该一新标志物。 肥4是一种新的肿瘤标志物，它的编码基因最早是由Kichhoff等人于1991年从 附睾上皮远端分离出来，位于染色体20q上，全长为12化左右，由5个外显子和4个内含子 组成。大样本的临床研究表明；该一新的血清标记物在良性肿瘤患者和正常人血清中含量 极低，而在93%的卵巢浆液性癌及100%的卵巢子宫内膜样癌中呈阳性表达，因此肥4在鉴 别卵巢肿瘤的良恶性质时明显优于CA125的43. 3% (特异度为95%时）--肥4灵敏度达 到72. 9% (特异度为95%时）。单一肥4对I期卵巢癌诊断的敏感度45. 9% (特异度为 95%时），也明显优于单一CA125对I期15. 1% (特异度为95%时）的灵敏度。在2011年 9月，抑A批准ROMA联合蛋白肥4和CA125血液测试的销售和使用。 化学发光免疫测定间iemiIuminesent Immunoassay,化IA)是免疫测定技术继酶 免技术巧IA)、放免技术巧IA)、英光免疫技术（FIA)和时间分辨英光免疫技术（TRFIA)之 后发展的一项新兴测定技术。根据发光物质（原理）的不同，可W分为直接化学发光免疫 分析和化学发光酶免疫分析、W及电化学发光几大类型。其中直接化学发光剂在发光免疫 分析过程中不需酶的催化作用，直接参与发光反应，它们在化学结构上有产生发光的特有 基团，可直接标记抗原或抗体，而且采用纳米磁性微珠分离。如用吓巧醋直接标记抗体（抗 原），与待测标本中相应的抗原（抗体）发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-吓 巧醋标记抗体复合物，该时只需加入氧化剂化2〇2)和化OH使成碱性环境，吓巧醋在不需要 催化剂的情况下分解、发光。化IA特异性强、敏感性高，可检测到l(Ti5mol/L的抗原量。快 速，一般几十分钟或1-3小时内完成；操作简便，可进行固相和均相分析；试验重复性好，试 剂易标准化和商品化，且不象放射分析那样存在强烈的环境污染和健康危害，是一种非常 优秀的定量分析方法。目前已用于多种药物、激素、病原微生物及其代谢产物、抗体及其他 生物活性物质的测定，并在临床尤其是大型医院有着较为广泛的应用。纳米磁性微珠分离 是目前世界上最先进的分离手段，直接发光法不受血清中任何物质干扰，是目前世界技术 最领先的发光模式。 针对肥4该一肿瘤标志物，已有几家外国公司的产品问世。目前，全自动化学发光 仪器及试剂完全依赖进口，W雅培、罗氏，西口子等国际知名公司的产品为主，几乎占据了 我国90%的高端免疫学诊断市场。所W研制开放式的检测系统及配套试剂成为我国体外诊 断检测系统打破技术/产品垄断和国产化的主要方向之一。 本专利技术人利用单位及合作团队共同研制的具有自主知识产权的全自动化学发光 免疫分析仪Caris200,开发研制了一种适用于Caris200的配套的定量测定肥4的试剂盒， 应用于人血清内肥4含量的检测，从而辅助卵巢癌早期诊断及预后监测等医疗需求。 本专利技术的试剂盒作为国内首个适用于Caris200的配套的定量测定肥4的试剂盒， 并利用管式吓巧醋标记的化学发光法，其性能已达到并超过对照同类ROC肥公司进口的 HE4定量测定试剂盒，具有灵敏度高、特异性强、稳定性好、操作简便及成本低廉等显著优 点。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种适用于全自动化学发光免疫分析仪Caris 200的人 附睾分泌蛋白4 (肥4)定量测定试剂盒（W下简称肥4-化IA试剂盒）。该试剂盒采用双抗 体夹也免疫分析方法，利用化学发光磁性微球免疫技术，包被抗-肥4抗体的磁性微球将和 反应杯中的标准品/样本中的肥4特异结合，然后再与吓巧盐标记的另一株抗-肥4抗体反 应形成免疫复合物，经预激发液（Pre-Trigger)和激发液（Trigger)的酸碱化学反应，即可 测量化学发光反应的相对光单位（RLU/s);标准品/样本中肥4的含量和光学系统所测量 出的相对光单位（RLU/s)成正比关系，通过标准曲线拟合，从而对可对血清标本中肥4含量 进行定量测定。 为了实现本专利技术，专利技术人采用了 W下技术方案： 1、筛选确认试剂反应实现所需的核也原料： 为了实现本专利技术，需要对试剂盒所使用的原料进行筛选，从而确定最佳的核也原 料，该一筛选过程包括校准品配制基质、配对抗体、包被磁珠、吓巧醋盐及其相应浓度和配 方等。 2、确定试剂盒的组分及其制备工艺，包括：分析缓冲液配方、磁珠包被工艺、抗体 标记工艺等。 本专利技术提供的一种人附睾分泌蛋白4化E4)定量测定试剂盒，包括： 1)M试剂；1瓶（100测试装；7. 0血)6F8抗体包被的磁性微球，胆存于含有1. 5%? 2% BSA稳定剂的0. IM Tris缓冲液中。防腐剂；0. 02%?0. 06% NaNjD 2) Rl试剂；1瓶（100测试装；6. 0血）分析缓冲液，胆存于含有1. 5%?2% BSA稳 定剂的0. IM Tris缓冲液中。防腐剂；0. 02%?0. 06% NaNs。 [001引 ^R2试剂；1瓶（100测试装；7. 0血）吓巧盐标记的册抗体，胆存于含有0. 1 %? 0. 2% BSA稳定剂的0. 5% Tris缓冲液中。防腐剂；0. Ol?0. 02% NaNs。 4)预激发液；1. 1%?1. 4% (w/v)过氧化氨。 [001引 5)激发液；0. 30N?0. 40N氨氧化轴。 6)洗涂液：含0. 03 %?本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种适用于全自动化学发光免疫分析仪Caris 200的人附睾分泌蛋白4(human epididymis secretory protein 4，HE4)定量测定试剂盒，试剂盒包括：分别装有M1试剂、R1试剂、R2试剂、激发液、预激发液、校准品、质控品、洗涤液和样品稀释液的试剂瓶。

【技术特征摘要】
1. 一种适用于全自动化学发光免疫分析仪Caris 200的人附睾分泌蛋白4(human epididymis secretory protein 4，HE4)定量测定试剂盒，试剂盒包括：分别装有Ml试剂、 R1试剂、R2试剂、激发液、预激发液、校准品、质控品、洗涤液和样品稀释液的试剂瓶。2. 根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于该试剂适用于全自动化学发光免疫分析仪 Caris200〇3. 根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于该试剂盒用抗HE4单克隆抗体6F8作为包 被抗体，H5作为标记抗体。4. 根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于所用吖啶酯盐标记物为苏州工业园区亚 科化学试剂有限公司的吖啶盐（NSP-DM...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐伟文，张琼，余娟平，李志雄，吴英松，李明，
申请(专利权)人：广州市达瑞抗体工程技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44