辅助鉴定H9亚型禽流感病毒和鸡传染性支气管炎病毒的引物组合物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种辅助鉴定H9亚型禽流感病毒和鸡传染性支气管炎病毒的引物组合物及其应用。本发明专利技术提供的特异引物对，由序列表的序列3所示单链DNA分子和序列表的序列4所示单链DNA分子组成。本发明专利技术还保护一种引物组合物，由引物对甲和所述特异引物对组成；所述引物对甲由序列表的序列1所示单链DNA分子和序列表的序列2所示单链DNA分子组成。本发明专利技术提供的特异引物对可鉴定鸡传染性支气管炎病毒，本发明专利技术提供的引物组合物结合双重RT-PCR可同时鉴定鸡传染性支气管炎病毒和H9亚型禽流感病毒，均具有灵敏度高、特异性强、普适性强、所需时间短、成本低等优点，可以对多种临床样本进行检测，操作简单、容易推广，便于基层操作和应用。

【技术实现步骤摘要】
辅助鉴定H9亚型禽流感病毒和鸡传染性支气管炎病毒的引物组合物及其应用
本专利技术涉及一种辅助鉴定H9亚型禽流感病毒和鸡传染性支气管炎病毒的引物组合物及其应用。
技术介绍
H9亚型禽流感和鸡传染性支气管炎是目前危害我国养禽业的主要疫病。H9亚型禽流感病毒可以感染多种禽和哺乳动物，并可导致禽类发病死亡，严重影响养禽业的健康发展。鸡传染性支气管炎也是一种危害我国养禽业的重要传染病，病鸡主要表现呼吸道症状。临床上两病症状相似，两种病毒感染均导致肉鸡生长缓慢和蛋鸡产蛋率下降，给养禽业造成严重的经济损失。此外，H9亚型禽流感病毒和鸡传染性支气管炎病毒抗原特性的变异，导致常规血清学方法无法检出流行毒株。因此，建立一种快速有效的鉴别两种病毒流行毒株的诊断方法，对于及时采取有效控制措施和防止疫情扩散具有重要的意义。对于传统的检测方法，如病毒分离、气管环培养试验、血凝抑制试验、神经氨酸酶试验等，费时、费力，不能做出快速而及时的诊断；而且不能在同一检测反应中检测不同的对象，即无法同时进行鉴别诊断。由于变异株的出现，常常导致这些方法无法检出病毒，出现漏检的情况。因此，建立一种能够快速鉴别诊断H9亚型禽流感病毒和鸡传染性支气管炎病毒，而且很好的覆盖当前流行毒株的检测方法非常重要。传统的流感病毒检测方法为采用鸡胚进行病毒分离培养（需时2-3天），然后采用血凝抑制试验进行流感病毒亚型的鉴定（需时1天）。鸡传染性支气管炎病毒检测方法通常采用鸡胚进行病毒分离培养或者气管环组织培养这种传统的检测方法，其中利用鸡胚进行病毒分离培养需要10天时间，而气管环组织培养技术难度比较大，操作不易。总之，传统的检测方法具有费时、费力的弊端，难以做出快速而及时的诊断；而且不能在同一检测反应中检测不同的对象，即无法同时进行鉴别诊断。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种辅助鉴定H9亚型禽流感病毒和鸡传染性支气管炎病毒的引物组合物及其应用。本专利技术提供的特异引物对，由序列表的序列3所示单链DNA分子和序列表的序列4所示单链DNA分子组成。本专利技术还保护所述特异引物对在制备试剂盒中的应用；所述试剂盒的用途为如下（a）或（b）：（a）辅助鉴定鸡传染性支气管炎病毒；（b）辅助鉴定待测样本中是否含有鸡传染性支气管炎病毒。所述待测样本可为鸡的肝、脑、肺等组织，也可为鸡的口腔拭子、泄殖腔拭子等拭子样品。所述待测样本还可为食品，所述食品为鸡的内脏组织（肝、脑、肺等）或鸡的内脏组织（肝、脑、肺等）加工得到的生鲜食品或熟食。本专利技术还保护一种试剂盒，包括所述特异引物对；所述试剂盒的用途为如下（a）或（b）：（a）辅助鉴定鸡传染性支气管炎病毒；（b）辅助鉴定待测样本中是否含有鸡传染性支气管炎病毒。所述待测样本可为鸡的肝、脑、肺等组织，也可为鸡的口腔拭子、泄殖腔拭子等拭子样品。所述待测样本还可为食品，所述食品为鸡的内脏组织（肝、脑、肺等）或鸡的内脏组织（肝、脑、肺等）加工得到的生鲜食品或熟食。本专利技术还保护一种辅助鉴定鸡传染性支气管炎病毒的方法，包括如下步骤：以待测病毒的cDNA为模板，用所述特异引物对进行PCR扩增，如果得到PCR扩增产物、待测病毒为候选的鸡传染性支气管炎病毒，如果没有得到所述PCR扩增产物、待测病毒为候选的非鸡传染性支气管炎病毒。所述PCR扩增产物的大小为600-700bp,具体可为655bp。所述待测病毒可为H9N2亚型禽流感病毒、鸡传染性支气管炎病毒、H4N6亚型禽流感病毒、H3N8亚型禽流感病毒、传染性喉气管炎病毒、减蛋综合症病毒或新城疫病毒。所述方法为非疾病治疗和诊断方法。本专利技术还保护一种辅助鉴定待测样本中是否含有鸡传染性支气管炎病毒的方法，包括如下步骤：以待测样本的cDNA为模板，用所述特异引物对进行PCR扩增，如果得到PCR扩增产物、待测样本疑似含有鸡传染性支气管炎病毒，如果没有得到所述PCR扩增产物、待测样本疑似不含有鸡传染性支气管炎病毒。所述PCR扩增产物的大小为600-700bp,具体可为655bp。所述待测样本可为死亡的鸡的肝、脑、肺等组织，也可为死亡的鸡的口腔拭子、泄殖腔拭子等拭子样品。所述待测样本还可为食品，所述食品为鸡的内脏组织（肝、脑、肺等）或鸡的内脏组织（肝、脑、肺等）加工得到的生鲜食品或熟食。所述方法为非疾病治疗和诊断方法。本专利技术还保护一种引物组合物，由引物对甲和引物对乙组成；所述引物对甲由序列表的序列1所示单链DNA分子和序列表的序列2所示单链DNA分子组成；所述引物对乙由序列表的序列3所示单链DNA分子和序列表的序列4所示单链DNA分子组成。本专利技术还保护所述引物组合物在制备试剂盒中的应用；所述试剂盒的用途为如下（c）或（d）：（c）辅助鉴定鸡传染性支气管炎病毒和H9亚型禽流感病毒；（d）辅助鉴定待测样本中是否含有鸡传染性支气管炎病毒和H9亚型禽流感病毒。所述H9亚型禽流感病毒具体可为H9N2亚型禽流感病毒。所述待测样本可为鸡的肝、脑、肺等组织，也可为鸡的口腔拭子、泄殖腔拭子等拭子样品。所述待测样本还可为食品，所述食品为鸡的内脏组织（肝、脑、肺等）或鸡的内脏组织（肝、脑、肺等）加工得到的生鲜食品或熟食。本专利技术还保护一种试剂盒，包括所述引物组合物；所述试剂盒的用途为如下（c）或（d）：（c）辅助鉴定鸡传染性支气管炎病毒和H9亚型禽流感病毒；（d）辅助鉴定待测样本中是否含有鸡传染性支气管炎病毒和H9亚型禽流感病毒。所述H9亚型禽流感病毒具体可为H9N2亚型禽流感病毒。所述待测样本可为鸡的肝、脑、肺等组织，也可为鸡的口腔拭子、泄殖腔拭子等拭子样品。所述待测样本还可为食品，所述食品为鸡的内脏组织（肝、脑、肺等）或鸡的内脏组织（肝、脑、肺等）加工得到的生鲜食品或熟食。本专利技术还保护所述引物组合物对在辅助鉴定鸡传染性支气管炎病毒和H9亚型禽流感病毒中的应用。应用所述引物对进行所述辅助鉴定时的方法如下：以待测病毒的cDNA为模板，用所述引物组合物进行PCR扩增，如果得到600-700bpPCR扩增产物、待测病毒为候选的鸡传染性支气管炎病毒，如果得到400-500bpPCR扩增产物、待测病毒为候选的H9亚型禽流感病毒，如果均没有得到上述两种PCR扩增产物、待测病毒为候选的非鸡传染性支气管炎病毒且非H9亚型禽流感病毒。所述600-700bpPCR扩增产物具体可为655bp。所述400-500bpPCR扩增产物具体可为473bp。所述H9亚型禽流感病毒具体可为H9N2亚型禽流感病毒。所述待测病毒可为H9N2亚型禽流感病毒、鸡传染性支气管炎病毒、H4N6亚型禽流感病毒、H3N8亚型禽流感病毒、传染性喉气管炎病毒、减蛋综合症病毒或新城疫病毒。所述应用中不包括疾病治疗和诊断方法。本专利技术还保护所述引物组合物对在辅助鉴定待测样本中是否含有鸡传染性支气管炎病毒和H9亚型禽流感病毒中的应用。应用所述引物对进行所述辅助鉴定时的方法如下：以待测样本的cDNA为模板，用所述引物组合物进行PCR扩增，如果得到600-700bpPCR扩增产物、待测样本疑似含有鸡传染性支气管炎病毒，如果得到400-500bpPCR扩增产物、待测样本疑似含有H9亚型禽流感病毒，如果均没有得到上述两种PCR扩增产物、待测样本疑似均不含有鸡传染性支气管炎病毒和H9亚型禽流感病毒。所述600-70本文档来自技高网...

【技术保护点】
特异引物对，由序列表的序列3所示单链DNA分子和序列表的序列4所示单链DNA分子组成。

【技术特征摘要】
1.特异引物对，由序列表的序列3所示单链DNA分子和序列表的序列4所示单链DNA分子组成。2.权利要求1所述特异引物对在制备试剂盒中的应用；所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)：(a)辅助鉴定鸡传染性支气管炎病毒；(b)辅助鉴定待测样本中是否含有鸡传染性支气管炎病毒。3.一种试剂盒，包括权利要求1所述特异引物对；所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)：(a)辅助鉴定鸡传染性支气管炎病毒；(b)辅助鉴定待测样本中是否含有鸡传染性支气管炎病毒。4.引物组合物，由引物对甲和引物对乙组成；所述引物对甲由序列表的序列1所示单链DNA分子和序列表的序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒲娟，刘金华，魏延迪，俞晨芳，裴星瑶，齐鲁，张谞霄，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京;11