人乳头瘤病毒L1L2衣壳蛋白相互作用位点及其应用制造技术

本发明专利技术属于分子病毒学领域。具体地，本发明专利技术涉及人乳头瘤病毒主要衣壳蛋白L1与次要衣壳蛋白L2相互作用的结合位点。所述蛋白结合位点及区域可用于作为预防HPV感染及由HPV感染所导致的疾病例如宫颈癌等的靶位点。本发明专利技术还涉及HPV突变型L1蛋白。本发明专利技术还涉及一种药物组合物以及所述药物组合物用于制备治疗和/预防和/辅助治疗HPV感染或者由HPV感染所导致的疾病例如宫颈癌等的用途。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术属于分子病毒学领域。具体地，本专利技术涉及人乳头瘤病毒主要衣壳蛋白L1与次要衣壳蛋白L2相互作用的结合位点。所述蛋白结合位点及区域可用于作为预防HPV感染及由HPV感染所导致的疾病例如宫颈癌等的靶位点。本专利技术还涉及HPV突变型L1蛋白。本专利技术还涉及一种药物组合物以及所述药物组合物用于制备治疗和/预防和/辅助治疗HPV感染或者由HPV感染所导致的疾病例如宫颈癌等的用途。 CCTCC NO:C201268 2012.05.31【专利说明】人乳头瘤病毒L1L2衣壳蛋白相互作用位点及其应用
本专利技术涉及分子病毒学领域。具体地，本专利技术涉及人乳头瘤病毒主要衣壳蛋白L1 与次要衣壳蛋白L2相互作用的结合位点。所述蛋白结合位点可用于作为预防HPV感染及 由HPV感染所导致的疾病例如宫颈癌等的靶位点。本专利技术还涉及HPV突变型L1蛋白。本 专利技术还涉及一种药物组合物以及所述药物组合物用于制备治疗和/预防和/辅助治疗HPV 感染或者由HPV感染所导致的疾病例如宫颈癌等的用途。
技术介绍
人乳头瘤病毒（Human Papillomavirus, HPV)属于乳头瘤病毒科 (Papillomaviridae)乳头瘤病毒属，为无包膜DNA病毒。该病毒基因组为双链闭环DNA，大 小约为7. 2 - 8kb，具有8个开放阅读框。HPV病毒颗粒直径为45 - 55nm，核衣壳呈20面 体对称，有72个壳微粒，由L1及L2组成。目前已经发现的100多种型的HPV中，根据其 与肿瘤发生的关系可以分为两类：低危型一包括HPV6和HPV11，致癌风险低，主要引起尖锐 湿疣；高危型一包括即￥16、18、31、33、35、39、45、52、58、59等，是导致包括女性宫颈癌在内 的多种肿瘤疾病的主要原因 （Clifford GM，Smith JS，Plummer M, et al. Br J Cancer, 2003, 88(1) :63-73)。 HPV LI蛋白为主要衣壳蛋白，分子量为55 - 60kDa，是HPV疫苗主要靶蛋白。在多 种表达系统中表达的HPV L1蛋白可形成在形态结构上与天然病毒颗粒相似的病毒样颗粒 (Virus-Like Particle, VLP)。该病毒样颗粒保留了病毒颗粒的天然表位，具有较强的免疫 原性，可诱导针对同型HPV病毒的中和抗体（Kirnbauer，R.，F. Booy，et al. 1992Proc Natl Acad SciUSA89(24): 12180-4)。因此，VLP疫苗已成为HPV疫苗发展的主要方向。目前已 上市的hpv疫苗为Merck的Gai>das ￡ 1?及gsk的Cervar iX? ,上述两种疫苗分别含有 HPV6/11/16/18及HPV16/18VLP。此外，现有的研究结果表明，可以通过预防HPV感染来预 防宫颈癌等疾病的发生。 研究表明，HPV L2约有473个氨基酸，分子量约为51KD，目前L2蛋白结构尚未解 析。研究发现L2的N端和C端都有一段富含正电荷的氨基酸区域以及C端有一入核信号 肤，在病毒 DNA 核定位中有重要作用（Day PM.，Gambhira R.，Roden RB.，et al. Mechanisms of human papillomavirus typel6neutralization by 12cross_neutralizing and lltype-specific antibodies.J Virol. 2008May ；82(9):4638-46. Epub2008Feb27.)〇 L2 在病毒感染初期的免疫逃逸、入侵宿主细胞、病毒DNA的核定位及病毒颗粒的高效组装等 过程中均具有重要作用（Fahey LM.，Raff AB.，Da Silva DM. A major role for the minor capsid protein of human papillomavirus typel6in immune escape J Immunol. 2009Novl5 ； 183 (10) : 6151-6. Epub20090ct28)。随着研究的深入，人们逐渐对HPV的入胞和致癌机制等 均有一定的认识，但天然HPV颗粒的组装机制及其成熟释放的过程及HPVL1与L2相互作用 尚未完全清楚。目前，HPV16L2与L1相互作用位点的研究仅有报道L2通过其C端396-439 位附近的氨基酸与L1疏水相互作用插入到五聚体背面的空洞中，仅有一小段暴露在表面 (Finnen RL, Erickson KD, Chen XS, et al, Interactions between papillomavirus LI and L2capsid proteins. J Virol. 2003Apr ;77 (8) :4818-26)。然而这些研究缺乏实验数据的支 持，且描述的L1和L2的作用区域过于宽泛，应用价值有限。 因此，研究HPV的衣壳组装和HPVL1与L2相互作用对HPV预防性和治疗性疫苗设 计及HPV与宫颈癌之间的致病研究具有重要指导意义。
技术实现思路
本专利技术人经过深入地研究和创造性的劳动，得到了位于HPV L1蛋白上的4个氨基 酸位点。本专利技术人惊奇地发现，这4个氨基酸位点是L1蛋白与L2蛋白相互作用的位点。通 过筛选抑制这些作用位点的药物，能够得到抑制HPV特别是HPV16以及治疗和/或预防和 /辅助治疗宫颈癌的药物。由此提供了下述专利技术： 本专利技术的一个方面涉及一种分离的多肽，其氨基酸序列为：SEQID N0 :1中的第 256、315、317、340位中的任意一个或者任意几个位点（例如2、3或4个）发生突变、替换 或缺失；具体地，所述4个位点中的任意一个或者任意几个（例如2、3或4个）位点突变为 丙氨酸；更具体地，为 SEQ IDN0 :9、SEQ IDN0 :19、SEQ IDN0 :20 或 SEQ IDN0 :21 所示的序列。 具体地，所述分离的多肽为HPV突变型L1蛋白。 本专利技术的另一方面涉及一种分离的多核苷酸，其编码本专利技术的分离的多肽；具体 地，所述多核苷酸的序列如 SEQ IDN0 :33、SEQ IDN0 :43、SEQ IDN0 :44 或 SEQ IDN0 :45 所示。 本专利技术的再一方面涉及一种重组载体，其含有一个或多个相同或不同的本专利技术的 多核苷酸；具体地，所述重组载体为重组pAAV或重组pT0-T7。 本专利技术的再一方面涉及一种重组宿主细胞，其含有本专利技术的重组载体；具体地，所 述重组细胞为重组大肠杆菌细胞。 本专利技术的再一方面涉及一种融合蛋白，其含有一个或多个相同或不同的本专利技术的 分离的多肽。 本专利技术的再一方面涉及一种假病毒，其含有本专利技术的重组载体；具体地，所述假病 毒为HPV假病毒；更具体地，所述假病毒为HPV16假病毒。 本专利技术的再一方面涉及一种病毒样颗粒（VLPs)，其含有本专利技术的多肽或者本专利技术 的融合蛋白。 本专利技术的再一方面涉及一种组合物，其包含一个或多个相同或不同的本专利技术的多 肽或者本专利技术的融合蛋本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽，其氨基酸序列为：SEQ ID NO：1中的第256、315、317、340位中的任意1个、2个、3个或4个位点发生突变、替换或缺失；具体地，所述4个位点中的任意1个、2个、3个或4个位点突变为丙氨酸；更具体地，为SEQ IDNO：9、SEQ IDNO：19、SEQ IDNO：20或SEQ IDNO：21所示的序列。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：李少伟，吴坤宝，张丽，刘亚静，王大宁，俞海，张军，夏宁邵，
申请(专利权)人：厦门大学，厦门万泰沧海生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：福建;35