经由FcγIIB促进抗原消除的抗原结合分子制造技术

本发明专利技术提供：抗原结合分子，其包含(i)对抗原的结合活性随离子浓度条件而变化的抗原结合结构域、(ii)具有FcγRIIb选择性结合活性的Fcγ结合结构域和(iii)在pH酸性范围条件下具有FcRn结合活性的FcRn结合结构域；以及与给予该分子前相比降低该抗原的血浆中浓度的方法，其包括给予该分子。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】经由FcγIIB促进抗原消除的抗原结合分子
本专利技术提供：抗原结合分子在从血浆中消除抗原中的使用；从血浆中消除抗原的方法，其包括给予抗原结合分子；药物组合物，其包含可从血浆中消除抗原的抗原结合分子；以及用于从血浆中消除抗原的抗原结合分子的制备方法。
技术介绍
抗体在血浆中的稳定性高、副作用也少，因而作为医药品受到关注。其中，IgG型的抗体药物有大量上市，现在也正在开发着数量众多的抗体药物(非专利文献1和非专利文献2)。另一方面，作为能适用于第二代抗体药物的技术，开发有各种技术，报道了使效应子功能、抗原结合能力、药代动力学、稳定性提高的技术或者使免疫原性风险降低的技术等(非专利文献3)。通常，抗体药物的给药量非常高，因而作为课题可考虑到难以制作皮下给药制剂，制备成本高等。作为降低抗体药物的给药量的方法，可考虑改善抗体的药代动力学的方法和使抗体与抗原的亲和性提高的方法。作为改善抗体的药代动力学的方法，报道有恒定区的人工氨基酸取代(非专利文献4和5)。作为增强抗体对抗原的结合活性和/或中和活性的技术，报道有亲和性成熟技术(非专利文献6)，通过对可变区的CDR区等的氨基酸导入突变可以增强对抗原的结合活性。通过增强抗原结合能力，可以使体外的生物活性提高，或者降低给药量，进而也可以使体内(机体内)的药效提高(非专利文献7)。另一方面，每一分子具有中和活性的抗体能够中和的抗原量依赖于亲和性，为了以少的抗体量中和抗原，可以通过各种方法增强抗体的亲和性(非专利文献6)。进而，只要是可共价地与抗原结合、对抗原的亲和性无限大的抗体，则可以用一分子的抗体来中和一分子的抗原(二价的情形为二抗原)。但是，这样的方法中，限制是一分子抗体对一分子抗原(二价的情形是二抗原)的化学计量的中和反应，不可能用抗原量以下的抗体量来完全中和抗原。即，在通过增强亲和性来中和抗原的效果方面存在限制(非专利文献8)。中和抗体的情形中，为了使其中和效果持续一定期间，需要给予机体内在该期间产生的抗原量以上的抗体量，仅通过上述的抗体药代动力学改善或者亲和性成熟技术，在降低必要抗体给药量方面存在限制。因此，为了用抗原量以下的抗体量来使抗原的中和效果持续目标时间，需要用一个抗体来中和多个抗原。作为实现其的新方法，最近报道了pH和/或金属离子浓度依赖性地与抗原结合的抗原结合分子(专利文献1和2)。在血浆中的pH中性和/或高钙离子浓度条件下与抗原强结合、在内体内的pH酸性和/或低钙离子浓度条件下从抗原解离的离子浓度依赖性抗原结合分子，其可在内体内从抗原解离。离子浓度依赖性抗原结合分子解离抗原后，若该分子通过FcRn再循环至血浆中，则可再次与抗原结合。因此，一个离子浓度依赖性抗原结合分子可重复结合多个抗原。另一方面，与结合至FcRn而被再循环的抗体相比，抗原的血浆中滞留性非常短。然而，即使抗原自身的血浆中滞留性短，若是这种血浆中滞留性长的普通抗体与该抗原结合，那么抗体抗原复合体的血浆中滞留性也变得与抗体一样长。因此，通常，如果给予抗体，那么由于该抗体结合的抗原以抗体抗原复合体的形式存在，准确地说，血浆中滞留性变长(难以从血浆中消除)，故而血浆中的抗原浓度上升。另一方面，离子浓度依赖性抗原结合分子可通过在内体内从抗原解离来抑制血浆中抗原浓度的上升。但是，上述对血浆中抗原浓度上升的抑制受到与该抗原在体内产生的量的平衡的影响。因此还考虑了，存在通过给予这样的离子浓度依赖性抗原结合分子却使血浆中抗原浓度与给予该分子前相比上升的情况的可能性(专利文献3)。最近，制作了在中性条件下具有FcRn结合的抗原结合分子。已发现，通过给予离子浓度依赖性地与抗原结合、在中性条件下具有FcRn结合的抗原结合分子，可使血浆中抗原浓度与给予该分子前相比降低(专利文献3)。与普通抗体通过给予抗体使血浆中抗原浓度上升相比，在pH中性条件下具有FcRn结合活性的抗原结合分子和离子浓度依赖性地与抗原结合、在pH中性条件下具有FcRn结合活性的抗原结合分子可通过给予该分子使血浆中抗原浓度降低。这样的抗原结合分子可经由作为与FcRn结合的结果所引起的胞吞作用主动地从血浆中除去抗原，因此作为药物极其有用。另一方面，作为IgG受体，除了FcRn之外，还存在多种Fcγ受体(FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIIa)(非专利文献9)。抗体的活性型Fcγ受体结合活性在抗体的细胞毒活性中发挥重要作用，因此，迄今开发了通过增强活性型Fcγ受体结合活性增强了细胞毒活性的以膜型抗原为靶标的抗体(非专利文献10、11)。同样地，抑制型Fcγ受体(FcγRIIb)结合活性在免疫抑制活性(非专利文献12、13、14)、激动活性(非专利文献15、16)等中发挥重要作用，因此，抑制型Fcγ受体结合活性增强的以膜型抗原为靶标的抗原的研究正在进行中(非专利文献17、18)。对于与可溶型抗原结合的抗体对Fcγ结合的影响，主要从副作用的观点进行了研究。例如，已知在给予了抗VEGF抗体贝伐单抗(bevacizumab)的患者组中血栓栓塞风险上升(非专利文献19)。另外，在抗CD40配体抗体的临床开发试验中，也同样地观察到血栓栓塞，中止了临床试验(非专利文献20)。在血小板细胞上发现了活性型Fcγ受体FcγRIIa而非抑制型Fcγ受体FcγRIIb(非专利文献21)，但是通过之后使用动物模型等的研究表明，给予的任一抗体均经由与血小板上FcγRIIa的结合使血小板聚集，其结果形成血栓(非专利文献22、非专利文献23)。据报道，在自身免疫疾病之一的系统性红斑狼疮患者中，通过FcγRIIa依赖性机制活化血小板，血小板的活化与严重性相关(非专利文献24)。另外，有报道称，使用增强了FcγRIIb结合的抗体作为药物时，可望降低抗抗体的产生风险(非专利文献25)，膜型抗原结合抗体的FcγRIIa结合增强的抗体增强树突细胞或巨噬细胞介导的抗体依赖性吞噬活性(ADCP)(非专利文献26)。然而，以可溶型抗原为靶标的抗体的活性型和/或抑制型Fcγ受体结合活性对于给予了该抗体的机体中该抗体或该抗体所结合的抗原的血浆中动力学的效果尚属未知。现有技术文献专利文献专利文献1：WO2009/125825专利文献2：WO2012/073992专利文献3：WO2011/122011非专利文献非专利文献1：JaniceMReichert,ClarkJRosensweig,LauraBFaden&MatthewCDewitz,Monoclonalantibodysuccessesintheclinic.,Nat.Biotechnol.(2005)23,1073-1078非专利文献2：PavlouAK,BelseyMJ.,Thetherapeuticantibodiesmarketto2008.,Eur.J.Pharm.Biopharm.,(2005)59(3),389-396非专利文献3：KimSJ,ParkY,HongHJ.,Antibodyengineeringforthedevelopmentoftherapeuticantibodies.,Mol.Cells,(2005)20(1),17-29非专利文献4：HintonPR,Xio本文档来自技高网...

【技术保护点】
抗原结合分子在使该抗原从血浆中消除中的使用，其中所述抗原结合分子包含对抗原的结合活性随离子浓度条件而变化的抗原结合结构域和以EU编号表示的238位的氨基酸为Asp、且271位的氨基酸为Gly的Fc区。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.02.24 JP PCT/JP2012/054624;2012.08.24 JP 20121.抗原结合分子在制备使抗原从血浆中消除的药物组合物中的使用，其中所述抗原结合分子包含：为抗体可变区且对该抗原的结合活性随离子浓度条件而变化的抗原结合结构域，和以EU编号表示的238位的氨基酸为Asp、且271位的氨基酸为Gly的Fc区，其中所述离子浓度条件是钙离子浓度条件和/或pH条件，其中，(i)所述抗原结合结构域为抗原结合活性以下述方式变化的抗原结合结构域：在低钙离子浓度条件下对所述抗原的结合活性比在高钙离子浓度条件下对所述抗原的结合活性低，KD(Ca3μM)/KD(Ca2mM)的值为2以上；或(ii)所述抗原结合结构域为抗原结合活性以下述方式变化的抗原结合结构域：在pH酸性范围条件下对所述抗原的结合活性比在pH中性范围条件下对所述抗原的结合活性低，KD(pH5.8)/KD(pH7.4)的值为2以上，其中所述Fc区包含Fcγ受体结合结构域，所述Fcγ受体结合结构域对含有同种异型H131的FcγRIIa的KD值除以对FcγRIIb-1或FcγRIIb-2的KD值而得到的值为1.2以上。2.权利要求1的使用，其中，所述Fc区为选自以EU编号表示的下述位置的至少一个以上的氨基酸进一步被取代的Fc区：233位、234位、237位、264位、265位、266位、267位、268位、269位、272位、274位、296位、326位、327位、330位、331位、332位、333位、355位、356位、358位、396位、409位和419位。3.权利要求2的使用，其中，所述Fc区含有以EU编号表示的下述位置的氨基酸中的任一个以上：233位的氨基酸为Asp，234位的氨基酸为Tyr，237位的氨基酸为Asp，264位的氨基酸为Ile，265位的氨基酸为Glu，266位的氨基酸为Phe、Met或Leu中的任一个，267位的氨基酸为Ala、Glu、Gly或Gln中的任一个，268位的氨基酸为Asp、Glu或Gln中的任一个，269位的氨基酸为Asp，272位的氨基酸为Asp、Phe、Ile、Met、Asn、Pro和Gln中的任一个，274位的氨基酸为Gln，296位的氨基酸为Asp或Phe中的任一个，326位的氨基酸为Ala或Asp中的任一个，327位的氨基酸为Gly，330位的氨基酸为Lys或Arg中的任一个，331位的氨基酸为Ser，332位的氨基酸为Thr，333位的氨基酸为Thr、Lys或Arg中的任一个，355位的氨基酸为Gln，356位的氨基酸为Glu，358位的氨基酸为Met，396位的氨基酸为Asp、Glu、Phe、Ile、Lys、Leu、Met、Gln、Arg或Tyr中的任一个，409位的氨基酸为Arg，和419位的氨基酸为Glu。4.权利要求1～3中任一项的使用，其中，所述Fc区为在SEQIDNO：14、15、16或17的任一个中含有的Fc区中以EU编号表示的238位的氨基酸为Asp、且271位的氨基酸为Gly的Fc区。5.权利要求1～3中任一项的使用，其中，所述Fc区在pH酸性范围条件下的FcRn结合活性与SEQIDNO：14、15、16或17的任一个中含有的Fc区的FcRn结合活性相比增强。6.权利要求5的使用，其中，所述增强结合的Fc区为在SEQIDNO：14、15、16或17的任一个中含有的Fc区的氨基酸序列中选自以EU编号表示的下述位置的至少一个以上的氨基酸被取代的Fc区：244位、245位、249位、250位、251位、252位、253位、254位、255位、256位、257位、258位、260位、262位、265位、270位、272位、279位、283位、285位、286位、288位、293位、303位、305位、307位、308位、309位、311位、312位、314位、316位、317位、318位、332位、339位、340位、341位、343位、356位、360位、362位、375位、376位、377位、378位、380位、382位、385位、386位、387位、388位、389位、400位、413位、415位、423位、424位、427位、428位、430位、431位、433位、434位、435位、436位、438位、439位、440位、442位或447位。7.权利要求6的使用，其中，所述增强结合的Fc区含有在SEQIDNO：14、15、16或17任一个中含有的Fc区的氨基酸序列中选自以EU编号表示的下述位置的氨基酸中的至少一个以上的氨基酸：244位的氨基酸为Leu，245位的氨基酸为Arg，249位的氨基酸为Pro，250位的氨基酸为Gln或Glu中的任一个，251位的氨基酸为Arg、Asp、Glu或Leu中的任一个，252位的氨基酸为Phe、Ser、Thr或Tyr中的任一个，254位的氨基酸为Ser或Thr中的任一个，255位的氨基酸为Arg、Gly、Ile或Leu中的任一个，256位的氨基酸为Ala、Arg、Asn、Asp、Gln、Glu、Pro或Thr中的任一个，257位的氨基酸为Ala、Ile、Met、Asn、Ser或Val中的任一个，258位的氨基酸为Asp，260位的氨基酸为Ser，262位的氨基酸为Leu，270位的氨基酸为Lys，272位的氨基酸为Leu或Arg中的任一个，279位的氨基酸为Ala、Asp、Gly、His、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Trp或Tyr中的任一个，283位的氨基酸为Ala、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Trp或Tyr中的任一个，285位的氨基酸为Asn，286位的氨基酸为Phe，288位的氨基酸为Asn或Pro中的任一个，293位的氨基酸为Val，307位的氨基酸为Ala、Glu、Gln或Met中的任一个，308位的氨基酸为Ile、Pro或Thr中的任一个，309位的氨基酸为Pro，311位的氨基酸为Ala、Glu、Ile、Lys、Leu、Met、Ser、Val或Trp中的任一个，312位的氨基酸为Ala、Asp或Pro中的任一个，314位的氨基酸为Ala或Leu中的任一个，316位的氨基酸为Lys，317位的氨基酸为Pro，318位的氨基酸为Asn或Thr中的任一个，332位的氨基酸为Phe、His、Lys、Leu、Met、Arg、Ser或Trp中的任一个，339位的氨基酸为Asn、Thr或Trp中的任一个，341位的氨基酸为Pro，343位的氨基酸为Glu、His、Lys、Gln、Arg、Thr或Tyr中的任一个，375位的氨基酸为Arg，376位的氨基酸为Gly、Ile、Met、Pro、Thr或Val中的任一个，377位的氨基酸为Lys，378位的氨基酸为Asp、Asn或Val中的任一个，380位的氨基酸为Ala、Asn、Ser或Thr中的任一个，382位的氨基酸为Phe、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个，385位的氨基酸为Ala、Arg、Asp、Gly、His、Lys、Ser或Thr中的任一个，386位的氨基酸为Arg、Asp、Ile、Lys、Met、Pro、Ser或Thr中的任一个，387位的氨基酸为Ala、Arg、His、Pro、Ser或Thr中的任一个，389位的氨基酸为Asn、Pro或Ser中的任一个，423位的氨基酸为Asn，427位的氨基酸为Asn，428位的氨基酸为Leu、Met、Phe、Ser或Thr中的任一个，430位的氨基酸为Ala、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Tyr中的任一个，431位的氨基酸为His或Asn中的任一个，433位的氨基酸为Arg、Gln、His、Ile、Lys、Pro或Ser中的任一个，434位的氨基酸为Ala、Gly、His、Phe、Ser、Trp或Tyr中的任一个，436位的氨基酸为Arg、Asn、His、Ile、Leu、Lys、Met或Thr中的任一个，438位的氨基酸为Lys、Leu、Thr或Trp中的任一个，440位的氨基酸为Lys，442位的氨基酸为Lys。8.权利要求1～3中任一项的使用，其中，所述抗原结合分子为抗体。9.药物组合物，其包含含有下述结构的抗原结合分子：为抗体可变区且对抗原的结合活性随离子浓度条件而变化的抗原结合结构域，和以EU编号表示的238位的氨基酸为Asp、且271位的氨基酸为Gly的Fc区，其中所述离子浓度条件是钙离子浓度条件和/或pH条件，其中，(i)所述抗原结合结构域为抗原结合活性以下述方式变化的抗原结合结构域：在低钙离子浓度条件下对所述抗原的结合活性比在高钙离子浓度条件下对所述抗原的结合活性低，KD(Ca3μM)/KD(Ca2mM)的值为2以上；或(ii)所述抗原结合结构域为抗原结合活性以下述方式变化的抗原结合结构域：在pH酸性范围条件下对所述抗原的结合活性比在pH中性范围条件下的抗原结合活性低，KD(pH5.8)/KD(pH7.4)的值为2以上，其中所述Fc区包含Fcγ受体结合结构域，所述Fcγ受体结合结构域对含有同种异型H131的FcγRIIa的KD值除以对FcγRIIb-1或FcγRIIb-2的KD值而得到的值为1.2以上。10.权利要求9的药物组合物，其中，所述Fc区为选自以EU编号表示的下述位置的至少一个以上的氨基酸进一步被取代的Fc区：233位、234位、237位、264位、265位、266位、267位、268位、269位、272位、274位、296位、326位、327位、330位、331位、332位、333位、355位、356位、358位、396位、409位和419位。11.权利要求10的药物组合物，其中，所述Fc区含有以EU编号表示的下述位置的氨基酸中的任一个以上：233位的氨基酸为Asp，234位的氨基酸为Tyr，237位的氨基酸为Asp，264位的氨基酸为Ile，265位的氨基酸为Glu，266位的氨基酸为Phe、Met或Leu中的任一个，267位的氨基酸为Ala、Glu、Gly或Gln中的任一个，268位的氨基酸为Asp、Glu或Gln中的任一个，269位的氨基酸为Asp，272位的氨基酸为Asp、Phe、Ile、Met、Asn、Pro或Gln中的任一个，274位的氨基酸为Gln，296位的氨基酸为Asp或Phe中的任一个，326位的氨基酸为Ala或Asp中的任一个，330位的氨基酸为Lys或Arg中的任一个，327位的氨基酸为Gly，331位的氨基酸为Ser，332位的氨基酸为Thr，333位的氨基酸为Thr、Lys或Arg中的任一个，355位的氨基酸为Gln，356位的氨基酸为Glu，358位的氨基酸为Met，396位的氨基酸为Asp、Glu、Phe、I1e、Lys、Leu、Met、Gln、Arg或Tyr中的任一个，409位的氨基酸为Arg，419位的氨基酸为Glu。12.抗原结合分子的制备方法，其包括以下(a)～(e)的步骤：(a)获得为抗体可变区且对抗原的结合活性随离子浓度条件而变化的抗原结合结构域的步骤，其中所述离子浓度条件是钙离子浓度条件和/或pH条件，(b)获得编码在所述步骤(a)中选择的抗原结合结构域的基因的步骤，(c)将在所述步骤(b)中获得的基因与编码以EU编号表示的238位的氨基酸为Asp、且271位的氨基酸为Gly的Fc区的基因有效连接的步骤，(d)培养含有在所述步骤(c)中有效连接的基因的宿主细胞的步骤，(e)从在所述步骤(d)中获得的培养液分离抗原结合分子的步骤，其中，(i)所述抗原结合结构域为抗原结合活性以下述方式变化的抗原结合结构域：在低钙离子浓度条件下对所述抗原的结合活性比在高钙离子浓度条件下对所述抗原的结合活性低，KD(Ca3μM)/KD(Ca2mM)的值为2以上；或(ii)所述抗原结合结构域为抗原结合活性以下述方式变化的抗原结合结构域：在pH酸性范围条件下对所述抗原的结合活性比在pH中性范围条件下的结合活性低，KD(pH5.8)/KD(pH7.4)的值为2以上，其中所述Fc区包含Fcγ受体结合结构域，所述Fcγ受体结合结构域对含有同种异型H131的FcγRIIa的KD值除以对FcγRIIb-1或FcγRIIb-2的KD值而得到的值为1.2以上。13.权利要求12的制备方法，其中，所述Fc区为选自以EU编号表示的下述位置的至少一个以上的氨基酸进一步被取代的Fc区：233位、234位、237位、264位、265位、266位、267位、2...

【专利技术属性】
技术研发人员：井川智之，前田敦彦，岩柳有起，原谷健太，坚田仁，门野正次郎，味元风太，
申请(专利权)人：中外制药株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP