本发明专利技术公开了一种用于测定降钙素原的胶乳增强免疫比浊试剂盒及其制备方法和应用，属于疾病的诊断和检测技术领域。本发明专利技术一种用于测定降钙素原的胶乳增强免疫比浊试剂盒，包括稀释液、胶乳制剂、空白液、校准品和质控品；其中所述的胶乳制剂中含有分别偶联了PCT单克隆抗体以及PCT多克隆抗体的不同粒径大小的羧基化的聚苯乙烯胶乳。使用本发明专利技术的方法分别对PCT单克隆抗体和PCT多克隆抗体进行标记后，得到的大粒径胶乳可以提高检测灵敏度，小粒径胶乳可以拓宽线性范围，因此，本发明专利技术的复合胶乳制剂既可以提高检测灵敏度，又可拓宽检测线性范围，对降钙素原的检测来说具有检测快速、敏感度高、特异性强和准确性好等优点。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种用于测定降钙素原的胶乳增强免疫比浊试剂盒及其制备方法和应用，属于疾病的诊断和检测
。本专利技术一种用于测定降钙素原的胶乳增强免疫比浊试剂盒，包括稀释液、胶乳制剂、空白液、校准品和质控品；其中所述的胶乳制剂中含有分别偶联了PCT单克隆抗体以及PCT多克隆抗体的不同粒径大小的羧基化的聚苯乙烯胶乳。使用本专利技术的方法分别对PCT单克隆抗体和PCT多克隆抗体进行标记后，得到的大粒径胶乳可以提高检测灵敏度，小粒径胶乳可以拓宽线性范围，因此，本专利技术的复合胶乳制剂既可以提高检测灵敏度，又可拓宽检测线性范围，对降钙素原的检测来说具有检测快速、敏感度高、特异性强和准确性好等优点。【专利说明】-种用于测定降巧轰原的胶乳增强免疫比浊试剂盒及其制 备方法和应用
本专利技术公开了一种胶乳增强免疫比浊试剂盒及其制备方法和应用，特别涉及一种 用于测定降巧素原的胶乳增强免疫比浊试剂盒及其制备方法和应用，本专利技术属于疾病的诊 断或检测
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技术介绍
降巧素原（PCT)是无激素活性的降巧素前肤物质，由116个氨基酸组成，分子量为 13KD的糖蛋白。PCT的半衰期为25-30小时，在体外稳定性很好。 PCT来自定位于第11号染色体上（11P15,4)的单拷贝基因（与降巧素基因相关 肤为同一基因）。该基因由2800个碱基对组成，含6个外显子和5个内含子，基因全长约 7. 6肺。转录后经特定剪接产生PCTmRNA,再翻译成降巧素原前体（Pre-PCT),在高尔基复合 体及分泌囊中，经一系列水解酶作用最终形成PCT氨基酸多肤（aminoPCT)，降巧素（CT)及 駿基端21个氨基多肤（CT =CCP-I )。 正常条件下人血清PCT含量极低，约2. 5pg/ml (运用高效液相色谱分析)，而成熟 CT含量约6.化g/ml。髓质甲状腺肿瘤或其他神经内分泌肿瘤患者血清PCT及其组分均增 高，组分相对含量也发生变化。在一些非甲状腺损伤如慢性肾衰、吸入性烧伤、急性细菌感 染、中风、败血症等患者血清PCT及其组分也均增高，有些甚至成倍的上升，而CT略微升高， 说明除甲状腺髓质细胞分泌胆存PCT外，仍有其他细胞具有该些功能。 PCT选择性地对系统性细菌感染、真菌感染及寄生虫感染有反应，而对无菌性炎症 和病毒感染无反应或仅有轻度反应。许多学者研究发现，全身性细菌、真菌和寄生虫感染 时，PCT水平异常增高，增高的程度与感染的严重程度及预后相关，在全身性细菌感染和賊 毒症辅助鉴别诊断、预后判断、疗效观察等方面有很高的临床价值。PCT水平的监测，对于严 重威胁生命的感染性疾病过程和跟踪治疗方案是很有用的，PCT浓度的升高标志着炎症反 应正在进行中，使用足够的抗生素、炎症灶清除术治疗等，PCT值下降，证明治疗方案正确， 预后良好，反之改变治疗方案。 PCT为所有不知病因的炎症性疾病的鉴别诊断提供帮助与支持，如细菌性与毒素 性的急性成人呼吸窘迫综合症(ARDS)的鉴别；胆源性与毒素性膜腺炎的鉴别；细菌性与病 毒性脑膜炎的鉴别；微生物诱导的发热与非细菌性发热的鉴别，特别是发热待查（FOU)的 诊断，病毒感染或自身免疫失调与免疫抑制条件下的急性细菌感染的鉴别，发热的病因的 鉴别，如在肿瘤患者中被肿瘤溶解物或化疗诱导与细菌、真菌或其他感染病因区别，早期诊 断新生儿和婴儿全身性细菌感染与败血症引起的急性发热；术后常规，包括术后感染预警 及用药监测，术后切除感染灶巧日腹膜炎、软组织感染）后的治疗指导，监测腹膜炎、吻合口 漏和无典型腹部症状的疾病过程；器官移植后的监测，移植前排除急性细菌或其他感染，鉴 别急性器官排斥、急性病毒、细菌与真菌感染；长期在ICU的患者及长期机械通气患者的监 巧IJ，监测疾病过程及指导治疗；监测高危患者，早期获得有关并发症和内环境衰退的信息。 许多临床研究证明，PCT在不同医学领域对诊断和指导治疗有很高的价值，与目前 所应用的诊断指标相比，PCT在鉴别诊断和控制感染及严重炎症方面提供了额外的信息。随 着临床实践性研究的不断深入，临床数据的不断积累，PCT作为一个全身性细菌感染和賊毒 症辅助和鉴别诊断的常规指标将成为共识，并将得到广泛的应用。 目前，检测PCT较特异与敏感的分析方法有：双抗夹也免疫化学发光法(双抗夹也 法）和放射免疫分析法（RIA)。 双抗夹也法运用双单克隆抗体，其一作为捕获抗体直接结合PCT96-106氨基酸 残基即未成熟CT =CCP-I部分，另一作为示踪抗体直接结合PCT70-76氨基酸残基，即未 成熟CT分子，人工合成的PCT作为标准。该方法比较特异无交叉反应，其检测最低为 IOpg'11^-11，标准曲线线性范围为10-6化g'11^-1。批内、批间变异系数分别为7 %和8 %。 该法已有商品试剂，所需时间较短，易自动化，但该法不能检测到正常人血清中PCT。 RIA使用一种对人工合成的aminoPCT特异的多克隆抗体RIB7。RIB7直接作用PCT 的aminoPCT部分，故RIA既能检测游离的PCT，又能检测结合型的PCT，也可检测降巧素基 因相关前体（Pro-CGRP),此法可信的敏感度为4pg -ml-1。线性范围10-77pg -ml-1,50 % 的结合游离比为14化g ?na-l，该法能检测正常人血清PCT，故较双抗夹也法敏感，另一优点 是RIA与患者病程呈现正相关（r=0. 47, P=O. 071)。但是RIA的缺点是所需时间较长。
技术实现思路
针对现有技术中的问题，本专利技术提出了一种用于测定降巧素原的胶乳增强免疫比 浊试剂盒及其制备方法和应用，本专利技术所建立的用于测定降巧素原的胶乳增强免疫比浊试 剂盒采用免疫比浊法，W乳胶增强免疫比浊法为测定原理可实现对降巧素原快速且准确的 检测。 为了达到上述目的，本专利技术所采用的技术手段为： 本专利技术公开了一种用于测定降巧素原的胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于所 述的试剂盒包括稀释液、胶乳制剂、空白液、校准品和质控品；其中所述的胶乳制剂中含有 分别偶联了 PCT单克隆抗体W及PCT多克隆抗体的不同粒径大小的駿基化的聚苯己帰胶 乳。 在本专利技术中，优选的，偶联了 PCT单克隆抗体的駿基化的聚苯己帰胶乳的粒径为 76nm，偶联了 PCT多克隆抗体的駿基化的聚苯己帰胶乳的粒径的187nm。 在本专利技术中，优选的，所述的稀释液为含有2M化Cl，2% (w/w)PEG20000,0. 5%(w/ w) BSA，0. P/o (w/w) proclin-300 的 0. 05M Tris-HCL 缓冲液，pH=8. 4。 在本专利技术中，优选的，所述的胶乳制剂是按照W下方法制备得到的： (1)駿基化的聚苯己帰胶乳活化 [001引 lOmg/ml的駿基化的聚苯己帰胶乳Iml中加入50mM，P册.IMES溶解的Img邸C (1-(3-二甲氨基丙基）-3-己基碳二亚胺盐酸盐)和IOmgNHS (N-轻基玻巧醜亚胺)混匀活 化60分钟，离也8000巧m弃去上清，沉淀用PH7. 4的50mM PBS重息；按照上述方法分别制 备得到了粒径为76nm和187nm活化后的駿本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于测定降钙素原的胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于所述的试剂盒包括稀释液、胶乳制剂、空白液、校准品和质控品；其中所述的胶乳制剂中含有分别偶联了PCT单克隆抗体以及PCT多克隆抗体的不同粒径大小的羧基化的聚苯乙烯胶乳。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：金鑫，曾滨，
申请(专利权)人：北京美康生物技术研究中心有限责任公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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