从罗布麻叶中提取总黄酮的方法技术

本发明专利技术公开了一种从罗布麻叶中提取总黄酮的方法，具体过程包含酶解提取，微滤，超滤膜除杂和大孔树脂纯化纯化和洗脱等工艺过程，与现有技术相比，本发明专利技术生产过程中只有大孔树脂洗脱工序需要乙醇，生产成本大大降低，并提高了生产的安全性；工艺过程中利用纯物理过程进行澄清、除杂、浓缩，可很大程度减轻环境污染，提高了产品质量安全；利用膜分离纯化后的提取液上大孔树脂柱进一步纯化，减小了大孔树脂被污染的程度，并大幅提高大孔树脂使用寿命，在优化的条件下，大孔树脂柱可反复使用13次以上，对黄酮的吸附量还可以保持在初次使用时吸附量的87%以上，远超一般方法所述的5～8次，所得罗布麻叶总黄酮提取物中总黄酮含量最高可达80%。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种，具体过程包含酶解提取，微滤，超滤膜除杂和大孔树脂纯化纯化和洗脱等工艺过程，与现有技术相比，本专利技术生产过程中只有大孔树脂洗脱工序需要乙醇，生产成本大大降低，并提高了生产的安全性；工艺过程中利用纯物理过程进行澄清、除杂、浓缩，可很大程度减轻环境污染，提高了产品质量安全；利用膜分离纯化后的提取液上大孔树脂柱进一步纯化，减小了大孔树脂被污染的程度，并大幅提高大孔树脂使用寿命，在优化的条件下，大孔树脂柱可反复使用13次以上，对黄酮的吸附量还可以保持在初次使用时吸附量的87%以上，远超一般方法所述的5?8次，所得罗布麻叶总黄酮提取物中总黄酮含量最高可达80%。【专利说明】
本专利技术涉及一种从罗布麻中提取总黄酮的方法，特别是一种从罗布麻叶中提取总 黄酮的方法。
技术介绍
罗布麻为夹竹桃科多年生宿根草本植物，罗布麻药用价值高，其根、茎、叶、 花、全草入药。早在本草纲目、救荒本草、中就有相关记载。1977年罗布麻被正式录入中 华人民共和国药典、能平肝安神、清热利水，用于治疗肝阳眩晕、心悸失眠、浮肿尿少、高 血压、神经衰弱、肾炎浮肿。罗布麻不同部位有着不同的治疗功效。罗布麻叶中主要含有黄 酮类物质，这些成分能够作用于人的心血管系统、神经系统、呼吸系统，从而起到降血压、 降血脂、抗抑郁、镇静、止咳平喘的功效，除此之外，这些成分还有抗氧化、延缓衰老、 抗突变和保肝的作用。 总黄酮是罗布麻叶中的主要活性成分，主要有槲皮素、山奈酚，及其衍生物组成。 罗布麻叶中黄酮类成分主要分布在叶脉维管束木质部导管壁、叶脉上下方的厚角组织、表 皮细胞及外方蜡质层。特化的角质层等外围组织对提取黄酮类成分阻碍作用较大，酶解纤 维素和角质层有助于黄酮类成分更好的溶出。 现在主流的主要是40?85%乙醇提取，并使用絮 凝剂澄清提取液、之后减压浓缩除去乙醇，更近一步的是利用大孔树脂或者聚酰胺进行进 一步纯化，获得获得罗布麻叶提取物浸膏，或者粉末。 中国专利CN200410064551.0、CN 103463147 A等使用乙醇提取、减压浓缩、壳聚糖 等絮凝、聚酰胺柱层析纯化提取液，获得纯度超过50%的总黄酮提取物。 上述工艺方法在罗布麻叶总黄酮的提取分离纯化上做了大量工作，但是还存在一 些不足：主要在利用40?85%乙醇提取的工艺由于需要使用乙醇，从安全生产的角度需要 防爆厂房，对生产设施的安全性要求较高；乙醇运输成本较高；食品级乙醇价格不菲，生产 成本较高；生产过程中需要反复浓缩，显而易见能耗较高；柱层析上柱液成分复杂，生产中 会大幅降低柱层析填料的使用寿命，增加生产成本；上柱液需要除去乙醇再上柱。 针对现有罗布麻叶总黄酮提取分离工艺的不足，研究开发一种节能高效、低成本 的罗布麻总黄酮提供工艺十分必要。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种节能高效、低成本的从罗布麻中提取总黄酮的方法，特 别是一种。 本专利技术的目的是通过以下过程实现的：将罗布麻叶粉碎后，首先以水为溶剂，加入 纤维素酶等水解酶进行提取，所得提取物用微滤膜进行澄清处理，滤过液用超滤膜除杂，除 杂后的液体用纳滤膜浓缩，浓缩液直接上大孔树脂柱，用水洗脱后，再用醇洗脱，洗脱液浓 缩除醇，喷雾干燥，即得到本专利技术的高纯度罗布麻叶总黄酮提取物。具体过程如下： 酶解提取： 将罗布麻叶除杂后，粉碎至150?600 μ m得罗布麻叶粉，按每Kg罗布麻叶粉加入纤维 素酶20000?80000U，加入水中提取，料液比为重量的1 :8?1 :50,在温度30?60°C，时 间 60 ?150min。 提取结束，过30?80 μ m滤筛，取滤液待用。所述的滤筛可以为滤袋、滤网或滤膜， 或者其他能达到200?400过滤精度过滤装置，譬如板框式过滤等。 所得滤渣最好进行重复提取1?3次，重复提取只用水，不加酶，加水量为第一次 加水量的30%?100%，最后合并滤液进入下一程序。 上述的罗布麻叶粉在加入纤维素酶的同时还可加入20000?80000U果胶酶，纤维 素酶与果胶酶二者的比例是3 :1?3 :9之间。 微滤：通过微滤膜进行澄清处理，去除纤维类杂质。 将酶解提取步骤中所得提取液用0. 1?0. 5μπι微滤膜过滤，所述的微滤膜可为 陶瓷膜或者有机膜，优选为陶瓷膜。 过滤时调节膜后压力为1?15 bar,膜前压力为1. 5?20bar，跨膜压力0· 5? 5bar，温度为15?60°C，膜分离取透过液。 上述的微滤过程至剩余1/3?1/5体积提取液时，再加入初始提取液体积1/3? 1/5的水，继续进行膜分离至再次剩余相当于1/3?1/5体积初始提取液时，终止分离，该过 程可进行1?3次。 合并上述所得透过液进入下一工序。 超滤膜除杂：通过超滤膜分离去除大分子物质。 上一步骤中的滤过液用1000?10000D的超滤膜除去提取液中的大分子物质，此 步骤中的膜可为有机膜或者陶瓷膜。优选的为陶瓷膜。过滤时调节膜后压力为5?30 bar， 膜前压力为5?35bar，跨膜压力0?8bar，提取液温度为15?60°C，膜分离，过滤至剩余 1/3?1/5体积提取液时，再加入初始提取液体积1/3?1/5的水，继续进行膜分离至再次 剩余相当于1/3?1/5体积初始提取液时，终止分离。截留液弃去，滤过液进入下一工序。 纯化：用大孔树脂纯化。 选用的大孔树脂可为 KX-28、KX-38、D101、AB-8、HPD400、HPD600、XDA-6、ADS-17 等。大孔树脂填装要求径高比为1 :6?1 :15,滤过液中总黄酮含量与填料用量(充分用水 浸泡后的体积）的使用量比例为每6?20mg总黄酮使用lmL填料。按需装填完树脂柱后， 按照1?3柱床体积/h的速度循环上样，即树脂柱流出液直接进入上样料液桶再次上样， 紫外检测器在340?380nm波长在线检测，至流出液的紫外吸收强度不再发生变化为止，此 时为上样终点。 洗脱：静置0. 5?24h后开始洗脱：初始洗脱液pH值5?7的水，洗脱速度1? 3倍柱床体积/h，洗脱液用量为1?4倍柱床体积；之后用10?30%乙醇洗脱，洗脱速度 1?3倍柱床体积/h，洗脱液用量为1?3倍柱床体积；继续用50?95%乙醇洗脱，洗脱速 度1?3倍柱床体积/h，洗脱液用量为1?3倍柱床体积，以该部分洗脱液作为收集目标， 收集完毕后，减压浓缩，干燥，得本专利技术的罗布麻叶总黄酮提取物。 与现有技术相比，本专利技术的优点在于：提取液中加入水解酶，酶解叶片组织，条件 温和，能够够呛较大程度地提高总黄酮的提取率；特别是生产过程中只有大孔树脂洗脱工 序需要用到乙醇，生产成本大大降低，并提高了生产的安全性；工艺过程中利用纯物理过程 进行澄清、除杂、浓缩，可很大程度减轻环境污染，提高了产品质量安全；利用膜分离纯化后 的提取液上大孔树脂柱进一步纯化，减小了大孔树脂被污染的程度，并大幅提高大孔树脂 使用寿命，在优化的条件下，大孔树脂柱可反复使用13次以上时，对黄酮的吸附量还可以 保持在初次使用时吸附量的87%以上，远超一般方法所述的5?8次，所得罗布麻叶总黄酮 提取物中总黄酮含量最高可本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从罗布麻叶中提取总黄酮的方法，其特征在于包含以下过程：酶解提取：将罗布麻叶除杂后，粉碎至150～600μm得罗布麻叶粉，按每Kg罗布麻叶粉加入纤维素酶20000～80000U，加入水中提取，料液比为重量的1：8～1：50，在温度30～60℃，时间60～150min后，过30～80μm滤筛，取滤液待用，所述的滤筛为滤袋、滤网或滤膜中的一种；微滤：通过微滤进行澄清处理，去除纤维类杂质，将酶解所得提取液用0.1～ 0.5μm微滤膜过滤，此处的微滤膜为陶瓷膜或者有机膜中的一种；超滤：通过超滤膜分离去除大分子物质，用1000～10000D的超滤膜除去提取液中的大分子物质，所述的超滤膜为有机膜或者陶瓷膜中的一种；纯化：用大孔树脂纯化，所述的大孔树脂为KX‑28、KX‑38、D101、AB‑8、HPD400、HPD600、XDA‑6、ADS‑17中的一种，大孔树脂填装径高比为1：6～1：15，装填完树脂柱后，按照1～3柱床体积/h的速度循环上样，即树脂柱流出液直接进入上样料液桶再次上样，紫外检测器在340～380nm波长在线检测，至流出液的紫外吸收强度不再发生变化为上样终点；洗脱：静置0.5～24h后进行洗脱，将所得洗脱液减压浓缩、干燥，得本专利技术的罗布麻叶总黄酮提取物。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李慕春，贺飞，宋良辉，
申请(专利权)人：乌鲁木齐华新分析测试高科技开发公司，
类型：发明
国别省市：新疆;65