一种抗人FcεRⅠα亚基单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抗人FcεRⅠα亚基单克隆抗体及其应用；一种产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株保藏在中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO：C201211。本发明专利技术制备的抗人FcεRⅠα单克隆抗体可与人IgE高亲和力受体FcεRⅠα结合，可应用于检测细胞表面FcεRⅠα的表达，该单克隆抗体对于与肥大细胞和嗜碱性粒细胞相关性疾病如变应性皮炎、皮肌炎、银屑病等的预防和治疗有重要意义，有较大的临床应用价值。本发明专利技术提供的杂交瘤细胞株长势良好，胞体大小均一，浑亮，透亮，分裂旺盛，有无限分裂的增生能力。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种抗人FeeRIa亚基单克隆抗体及其应用；一种产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株保藏在中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCCN0：C201211。本专利技术制备的抗人FeeRIa单克隆抗体可与人IgE高亲和力受体FeeRIa结合，可应用于检测细胞表面FceRIa的表达，该单克隆抗体对于与肥大细胞和嗜碱性粒细胞相关性疾病如变应性皮炎、皮肌炎、银屑病等的预防和治疗有重要意义，有较大的临床应用价值。本专利技术提供的杂交瘤细胞株长势良好，胞体大小均一，浑亮，透亮，分裂旺盛，有无限分裂的增生能力。【专利说明】-种抗人Fe ε R I α亚基单克隆抗体及其应用
本专利技术属于生物工程领域，特别涉及一种抗人Fe ε R I α亚基单克隆抗体及其应 用，以及分泌所述抗人FceR I α亚基单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
技术介绍
IgE(免疫球蛋白Ε)受体是过敏反应的重要介导物。肥大细胞和嗜碱性粒细胞是 I型变态反应性疾病和一些肥大细胞相关性疾病如变应性皮炎、皮肌炎、银屑病等的主要 效应细胞。过敏原与其特异性IgE结合形成的复合物与肥大细胞和嗜碱性粒细胞等细胞表 面IgE受体结合后使IgE受体发生微聚集，触发信号传导，包括蛋白激酶激活、磷脂酰肌醇 水解和Ca 2+流动等，引起细胞介质和细胞因子合成、黏附分子表达增加和细胞伸展、膜皱折 形成最终导致细胞脱颗粒，释放血管活性物质及某些酶类引起平滑肌收缩、黏液分泌、血压 降低和组织损伤。IgE受体有高、低亲和力两种，Fe eR I (IgE高亲和力受体）是其高亲和 力受体，主要分布于肥大细胞和嗜碱粒细胞，嗜酸性粒细胞表面也有少量表达。α亚单位 是Fe ε R I与IgE的结合部位。因此，抗Fe ε R I α亚基抗体是一种重要的抗体，其对研 究Fe ε R I表达与疾病的关系、探索经Fe ε R I介导的肥大细胞活化或抑制机制、研究IgE 及其抗体或拮抗剂、Fe ε R I及其抗体或拮抗剂等方面有极大的作用。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题就是针对现有的抗人FceR I α亚基单克隆抗体特异 性不强、免疫效果不佳的问题，提供一种特异性强，可大量生产的抗人FceR I α亚基单克 隆抗体及其应用，以及一种分泌该抗人FceR I α亚基单克隆抗体的杂交瘤细胞株。 为解决上述技术问题，本专利技术采取的技术方案之一是：一种杂交瘤细胞株，所述细 胞株保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO :C201211。 本专利技术还提供如上所述的杂交瘤细胞株的子代细胞。该杂交瘤细胞长势良好，大 小均一，浑亮，透亮，分裂旺盛，有无限分裂的增生能力。 本专利技术还提供上述杂交瘤细胞株在制备抗人Fe eR I α亚基单克隆抗体中的 应用。所述应用为本领域常规的应用，较佳地为利用所述杂交瘤细胞株分泌或制备抗人 Fe ε R I α亚基单克隆抗体。 为解决上述技术问题，本专利技术采取的技术方案之二是：一种抗人Fe ε R I α亚基 单克隆抗体，该单克隆抗体由上述杂交瘤细胞株分泌产生。 为解决上述技术问题，本专利技术采取的技术方案之三为：一种如上所述抗人 FceR I α亚基单克隆抗体的制备方法，所述制备方法包括以下步骤： (1)体外培养本专利技术所述杂交瘤细胞株得到培养液； (2)将步骤（1)所得培养液离心，收集上清纯化即得抗人Fe ε R I α亚基单克隆 抗体。 其中步骤（1)所述的体外培养为本领域常规的体外培养技术，所述培养的温度 优选地为37°C，培养的时间优选地为24小时，其中步骤（2)所述离心的速度优选地为 3000rpm，离心的时间优选地为5分钟。收集上清液，纯化处理即得小鼠抗人Fe eR I α亚 基单克隆抗体。其中所述的纯化技术为本领域常规的纯化技术，较佳地为利用市售可得的 单克隆抗体纯化试剂盒对所得上清液进行纯化处理。 本专利技术还公开了一种人Fc ε R I α亚基单克隆抗体的制备方法，该制备方法包括 以下步骤： (1)用人Fe ε Rl α亚基重组蛋白免疫小鼠，取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融 合，脾细胞与骨髓细胞的细胞数量融合比例为5:1?10:1筛选出对人Fe eR I α亚基有 反应性的杂交瘤细胞； (2)将所得杂交瘤细胞进行体外传代培养和扩大培养后，从杂交瘤细胞上清液或 从注射杂交瘤细胞后的动物腹水内获取抗人Fe eR I α亚基单克隆抗体。 其中步骤（1)所述免疫小鼠的脾细胞与骨髓细胞融合的比例为本领域常规的融 合比例，所述脾细胞与骨髓细胞的融合比例更佳地为：8:1?10:1，优选地为10:1。其中所 述骨髓细胞为本领域常规的骨髓细胞，骨髓细胞较佳地为SP2/0细胞。 其中步骤（2)所述的体外传代培养为本领域常规的体外传代培养技术，所述体外 传代培养的时间较佳地为六个月以上。其中所述抗人FceR I α亚基单克隆抗体的获取 方法为本领域常规的获取方法，所述方法较佳地包括：取8周龄左右BALB/c小鼠，腹腔注射 0. 3?0. 5ml石蜡油，2周后腹腔注射I X IO6个步骤（1)得到的杂交瘤细胞，注射7?10天 后取2?3ml腹水，3000rpm离心3min，收集上清液，即得纯化的小鼠抗人Fe ε R I α亚基 单克隆抗体。 本专利技术制备所得抗人Fe eR I α亚基单克隆抗体能够特异性地与人Fe eR I α 亚基相结合，因此该单克隆抗体可用于制备人FceR I α亚基表达的检测试剂，定性或定 量检测细胞中人FceR I α亚基的表达。 为解决上述技术问题，本专利技术采取的技术方案之四是：一种细胞人Fe ε R I α亚 基表达的检测方法，该检测方法包括以下步骤： (1)将本专利技术所述抗人Fe ε R I α亚基单克隆抗体与待检测的分离的细胞或该细 胞的裂解液进行接触； (2)通过免疫荧光分析方法、流式细胞术分析方法、免疫印迹分析方法、ELISA分 析方法、免疫组织化学分析方法或免疫沉淀分析方法来判断是否有阳性反应。 其中步骤（1)所述的细胞为本领域常规使用的细胞。所述细胞较佳地为真核细胞 或原核细胞，更佳地为哺乳动物细胞，优选地为来源于人、小鼠或猴的细胞。 其中步骤（2)所述免疫荧光分析方法为本领域常规的免疫荧光分析方法，其中所 述细胞培养板为本领域常规的细胞培养板，较佳地为96孔细胞培养板。其中所述离心的速 度较佳地为1〇〇〇印111，离心的时间较佳地为51^11 ;所述细胞的浓度较佳地为5\106个>1; 接种于96孔细胞培养板，每孔细胞的接种量较佳地为100 μ 1 ;每孔中抗人Fe ε R I α亚 基单克隆抗体的加入量较佳地为100?150 μ g，温浴的温度较佳地为20?30°C，温浴的时 间较佳地为8?12小时，洗涤后弃上清，每孔加入荧光标记的抗鼠IgG抗体进行温浴，所述 抗体优选地为羊抗鼠IgG(H+L)荧光抗体，温浴时间较佳地为30分钟，温浴的温度较佳地为 室温，所述室温通常是指20?30°C，荧光显微镜观察结果。 其中步骤（2)所述流式细胞术分析方法为本领域常规的流式细胞术分析方法， 其本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种杂交瘤细胞株，其特征在于，其保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C201211。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：李莉，王娟，
申请(专利权)人：李莉，王娟，
类型：发明
国别省市：上海;31