本发明专利技术公开了一种Triton X-100定量检测方法，它是采用高效液相色谱法检测，步骤如下：(1)制备供试品溶液：取待检样品，制成供试品溶液；(2)制备对照品溶液：取标准品Triton X-100，溶于水，制成对照品溶液；(3)检测：采用高效液相色谱法测定，其中，固定相为C18色谱柱，其填料的孔径为流动相为甲醇-水溶液，二者的体积比为85:15～75:25，检测波长为225nm；(4)以对照品溶液的峰面积为纵坐标，以对照品溶液浓度为横坐标，绘制Triton X-100的标准曲线，根据标准曲线计算供试品中Triton X-100的含量。本发明专利技术可以准确检测供试品中Triton X-100含量，克服了本技术领域的技术偏见，方法更为简单、低廉。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种TritonX-100定量检测方法，它是采用高效液相色谱法检测，步骤如下：（1)制备供试品溶液：取待检样品，制成供试品?谷液；(2)制备对照品?谷液：取标准品TritonX-100，溶于水，制成对照品溶液；(3)检测：采用高效液相色谱法测定，其中，固定相为C18色谱柱，其填料的孔径为300人，流动相为甲醇-水溶液，二者的体积比为85:15?75:25，检测波长为225mn;(4)以对照品溶液的峰面积为纵坐标，以对照品溶液浓度为横坐标，绘制TritonX-100的标准曲线，根据标准曲线计算供试品中TritonX-100的含量。本专利技术可以准确检测供试品中TritonX-100含量，克服了本
的技术偏见，方法更为简单、低廉。【专利说明】Tr i ton X-100含量的高效液相色谱检测方法
本专利技术属于高效液相色谱分析检测领域，具体涉及Triton X-100含量的高效液相 色谱检测方法，特别涉及生物制品中Triton X-100残留量的高效液相色谱检测方法。
技术介绍
Triton X-100,中文名：聚乙二醇辛基苯基醚，分子式：C14H220(C2H 40)n，其中，η为9 或10,分子量为603?647,是一种非离子型表面活性剂（或称去污剂），在生物制品、组织 学、清洁剂、电子和光学显微镜等多方面均具有广泛的用途。 在高效液相色谱法中，存在下述常识：分析分子量小于2000的化合物应选择孔径 在15nm ( lnm=10 Α)以下的填料，分析分子量大于2000的化合物则应选择孔径在30nm 以上的填料（中华人民共和国药典，2010年版，二部，附录V D高效液相色谱法）。Triton X-100的分子量为603?647,因此，通常本领域的技术人员在对Triton X-100进行检测时， 只会选择填料孔径在15nm ( lnm=10 AJ以下的色谱柱。 在生物制品领域，通常使用Triton x-100与磷酸三丁酯配伍进行病毒灭活，称S/ D法。例如，在生产吸附无细胞百白破联合疫苗时，会使用Triton X-100来去除细菌内毒 素。由于大量Triton X-100对人体有害，因此，需要在后续步骤除去Triton X-100,同时要 对生物制品成品中Triton X-100的残留量进行检测，以确定生物制品是否合格。 基于前述常识，当采用高效液相色谱法检测生物制品中的Triton X-100残留量 时，就陷入了两难的境地： 一、难以直接检测生物制品中的Triton X-100 ; 由于只能采用孔径15nm以下的色谱柱对Triton X-100进行检测，生物大分子会 堵塞色谱柱，因此，为了避免生物大分子对色谱柱造成堵塞，通常需要对检测样品中的生物 大分子与Triton X-100进行预先分离（即预处理），再对Triton X-100进行高效液相色谱 检测，例如：用固相提取柱提取待检样品中的Triton X-100 ;再用高效液相色谱仪检测，在 中国专利申请CN 102590427 A中公开的一种抗毒素/抗血清中TritonX-100残留量的测 定方法，就是这样一种方法，先采用"固相萃取柱过滤"对供试品进行预处理，提取待检样品 中的Triton X-100,再用Aglientl200高效液相色谱仪进行检测。 二、将生物制品中的Triton X-100分离后再检测的方法其结果又不准确； 由于上述现有技术对生物制品类样品的预处理方法会带来Triton X-100的损失， 必然导致检测结果不准确，同时也使得检测方法更加复杂，不易操作，检测成本更高。 为此，我们需要寻找一种新的思路和方法方便地对Triton X-100含量进行高效液 相色谱检测，进而实现对生物制品中的Triton X-100残留量更为方便、简单、准确的检测。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种简单、准确的新的Triton X-100含量的高效液相色谱 检测方法。 在本专利技术中，小分子是指分子量小于2000的化合物。 本专利技术Triton X-100定量检测方法，它是采用高效液相色谱法检测，步骤如下： (1)制备供试品溶液：取待检样品，制成供试品溶液； (2)制备对照品溶液：取标准品Triton X-100,溶于水，制成对照品溶液； (3)检测：采用高效液相色谱法测定，其中，固定相为C18色谱柱，其填料的孔径为 30(.)八,流动相为甲醇-水溶液，二者的体积比为85:15?75:25，检测波长为22511111; (4)以对照品溶液的峰面积为纵坐标，以对照品溶液浓度为横坐标，绘制Triton X-100的标准曲线，根据标准曲线计算待检样品中Triton X-100的含量。 步骤（1)中，所述待检样品是生物制品或者Triton X-100水溶液。 进一步，步骤（1)中，所述生物制品为无细胞百日咳纯化抗原、无细胞百日咳脱毒 抗原或吸附无细胞百白破联合疫苗。 进一步，步骤（1)中，所述吸附无细胞百白破联合疫苗按照下述步骤制成供试品 溶液：将吸附无细胞百白破联合疫苗离心，取上清液，经〇. 2 μ m膜过滤，即可。 步骤（2)中，所述对照品溶液按照下述方法配制：将标准品Triton X-100溶解于 水中，分别制成浓度为4、8、12、16、20μ g/ml的Triton X-100对照品溶液。 所述步骤⑶中，色谱柱为Agilent SB 300C18色谱柱，其规格为4. 6mmX250mm， 其填料的粒径为5 μ m。 所述步骤（3)中，甲醇与水的体积比为80:20。 所述步骤⑶中，所述流动相的流速为0. 8ml/min ;测定时，进样量为10 μ 1。 所述步骤⑶中，测定时，色谱柱温为25?35°C。优选地，所述色谱柱温为30°C。 在高效液相色谱法中，分析分子量小于2000的化合物只有选择孔径在 15nm ( 1_=〖〇 A)以下的填料，才能有效检测（中华人民共和国药典，2010年版，二部，附 录V D高效液相色谱法）。Triton X-100的分子量仅603?647,小于2000,应当选孔径 小于15nm的色谱柱进行检测，如杨鹏云等就是采用孔径为100A的色谱柱对血浆制品中的 Triton X-100残留量进行检测（血浆制品中Triton X-100残留量测定方法的建立·中国 生物制品学杂志.2003年，第16卷第4期）。 然而，专利技术人却研究发现，在特定条件下，采用填料孔径为30nm的色谱柱也可以 有效检测待检样品中Triton X-100的含量，克服了本领域关于"分析分子量小于2000的化 合物应当选择孔径在15nm(lnm= 1〇 Λ ')以下的填料"的技术偏见，为高效液相色谱分析检 测分子量小于2000的化合物提供了一种新的思路和方法。 从而，当使用本专利技术方法检测生物制品时，由于大分子蛋白也可以顺利通过这种 填料孔径的色谱柱，避免了现有方法的缺陷，即，因大分子蛋白会破坏小孔径的色谱柱，在 检测生物制品中的Triton Χ-100残留量时，必须对待测样品进行预处理，将Tri本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种Triton X‑100定量检测方法，其特征在于：它是采用高效液相色谱法检测，步骤如下：(1)制备供试品溶液：取待检样品，制成供试品溶液；(2)制备对照品溶液：取标准品Triton X‑100，溶于水，制成对照品溶液；(3)检测：采用高效液相色谱法测定，其中，固定相为C18色谱柱，其填料的孔径为流动相为甲醇‑水溶液，二者的体积比为85:15～75:25，检测波长为225nm；(4)以对照品溶液的峰面积为纵坐标，以对照品溶液浓度为横坐标，绘制Triton X‑100的标准曲线，根据标准曲线计算待检样品中Triton X‑100的含量。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：秦敏，杨国友，唐浩，蔡峰，
申请(专利权)人：成都生物制品研究所有限责任公司，
类型：发明
国别省市：四川;51
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