一种海水中氟甲喹手性对映体的检测方法技术

一种海水中氟甲喹手性对映体的检测方法，其特征在于步骤：取养殖海水80～110mL于烧杯中，加入氟甲喹标准品1mg～2mg，超声使其完全溶解，取3～5mL过HLB固相萃取小柱，经4～6mL去离子水淋洗后用5～10mL甲醇洗脱；洗脱液氮吹至近干，乙醇复溶，定溶至3mL，过0.22～0.45μm微孔滤膜后得到溶液A；以正己烷与乙醇体积比为10～40:90～60做为流动相，并在流动相中添加体积含量为0.1％～0.3％的甲酸和乙酸铵水溶液(5mmol/L)对氟甲喹对映体进行分离；用高效液相色谱仪对上述溶液A进行检测，选用CHIRALCEL OD-H手性柱，柱温为室温，流速为0.5mL/min～0.7mL/min，波长为254nm。本发明专利技术能成功实现氟甲喹手性对映体的拆分，从而检测海水中氟甲喹对映体的残留量，为海水养殖中氟甲喹的残留风险评估及合理、安全使用提供依据。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】，其特征在于步骤：取养殖海水80?llOmL于烧杯中，加入氟甲喹标准品lmg?2mg，超声使其完全溶解，取3?5mL过HLB固相萃取小柱，经4?6mL去离子水淋洗后用5?10mL甲醇洗脱；洗脱液氮吹至近干，乙醇复溶，定溶至3mL，过0.22?0.45ym微孔滤膜后得到溶液A;以正己烷与乙醇体积比为10?40:90?60做为流动相，并在流动相中添加体积含量为0.1%?0.3%的甲酸和乙酸铵水溶液（5mnol/L)对氟甲喹对映体进行分离；用高效液相色谱仪对上述溶液A进行检测，选用CHIRALCEL0D-H手性柱，柱温为室温，流速为0.5mL/min?0.7mL/min,波长为254nm0本专利技术能成功实现氟甲喹手性对映体的拆分，从而检测海水中氟甲喹对映体的残留量，为海水养殖中氟甲喹的残留风险评估及合理、安全使用提供依据。【专利说明】
本专利技术涉及。
技术介绍
氟甲喹（FLU)为第二代氟喹诺酮类抗菌药，是动物专用抗菌药物，对治疗革兰氏 阴性菌感染，特别是对大肠杆菌、支原体、嗜水气单胞菌引起的畜、禽及水产动物疾病有较 好疗效。其作用机理主要是抑制DNA旋转酶A亚单位，破坏它的活性，结果使脱氧核糖核酸、 核糖核酸及蛋白质的合成受干扰，使细胞不能再进行分裂，从而起到杀菌作用。由于氟甲喹 具有高安全性、耐受性和独特的高渗透性，其在水产动物的细菌性疾病的预防和治疗中已 经得到广泛应用。氟甲喹在淡水中溶解度不高，但能溶于pH值较高的海水中，因此，氟甲喹 常用于海水鱼的鱼体浸浴消毒。然而，带有氟甲喹残留的废水往往直接排入河流或海洋中， 这将直接或间接地危害环境及人类健康。已有研究发现高剂量氟甲喹可引起大鼠胚胎发育 畸变，虽然低剂量氟甲喹对人体的危害尚未见报道，但长期摄入有氟甲喹残留的食品，其潜 在风险不容低估。 氟甲喹是一种手性药物，具有一个手性碳原子，两个手性对映体，其对映体结构式 如图1所示。手性药物的不同对映体间往往显示出不同的药效学、药动学和毒理学特征，因 此，对手性药物的不同对映体进行检测尤为重要。目前，针对氟甲喹外消旋体在水产品中的 残留检测研究不少，但是尚没有针对氟甲喹对映体在海水中的残留检测。因此，开展检测海 水中氟甲喹对映体的研究，将为氟甲喹在海水中残留的风险评估以及合理、安全使用提供 依据。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供，采 用高效液相色谱法手性固定相法检测海水中氟甲喹对映体的残留量，可成功实现氟甲喹手 性对映体的拆分。 本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种海水中氟甲喹手性对映体的 检测方法，其特征在于包括以下步骤： 1)取养殖海水80?110mL于烧杯中，加入氟甲喹标准品1?2mg，超声使其完全 溶解，取3?5mL过HLB固相萃取小柱，经4?6mL去离子水淋洗后用5?10mL甲醇洗脱， 洗脱液收集于容量瓶中； 2)将步骤1)的洗脱液氮吹至近干，用乙醇复溶，定溶至3mL，过0. 22?0. 45 μ m 微孔滤膜后得到溶液A; 3)采用高效液相色谱仪对上述溶液A进行检测；检测时选用CHIRALCEL 0D-H手 性柱，手性柱的柱温为室温，流动相为正己烷和乙醇，其体积比为40?10:60?90,流动相 中添加甲酸（色谱纯，纯度3 98wt% )和乙酸铵水溶液，使它们体积含量分别为0. 1%? 0. 3%，乙酸铵水溶液浓度4. 5?5. 5mmol/L，检测时的流速为0. 5mL/min?0. 7mL/min，波 长为254nm。 作为改进，所述步骤1)的HLB固相萃取小柱是经甲醇+水活化。 作为优选，所述步骤3)的正己烷和乙醇的体积比为20:80。 作为改进，所述步骤3)的CHIRALCEL 1C手性柱的填料为5 μ m硅胶表面涂布纤维 素-三。 作为优选，所述乙酸铵水溶液浓度5mmol/L。 作为优选，所述步骤3)的检测时的流速为0. 6mL/min。 最后，所述步骤3)流动相中添加甲酸和乙酸铵水溶液，使它们体积含量分别为 0· 2%。 与现有技术相比，本专利技术的优点在于：采用高效液相色谱法手性固定相法检测海 水中氟甲喹对映体的残留量，成功实现了氟甲喹手性对映体的拆分，从而可对海水中氟甲 喹对映体的残留量进行检测，为海水中氟甲喹的合理、安全使用提供理论依据。其中，对映 体在0.04mg/L?10mg/L浓度范围内与其响应值呈良好的线性关系，左氟甲喹和右氟甲喹 的回归方程及相关系数分别为 y = 113. 93χ-7· 2217、R2 = 0· 9994 及 y = 117. 71χ-9· 9342、 R2 = 0. 9998,样品平均回收率分别为88. 53 %和89. 26%，日间精密度分别为5. 71 %和 4. 25%，定量限均为(λ 04mg/L。 【专利附图】【附图说明】 图1是本专利技术提供的氟甲喹对映体结构式； 图2是本专利技术实施例中氟甲喹的色谱图。 【具体实施方式】 以下结合附图实施例对本专利技术作进一步详细描述。 ，包括以下步骤： (1)取养殖海水100mL于烧杯中，加入氟甲喹标准品lmg?2mg，超声使其完全溶 解，取3?5mL过HLB固相萃取小柱（经5mL甲醇+5mL水活化），经5mL去离子水淋洗后用 5?10mL甲醇洗脱，洗脱液收集于10mL容量瓶中； (2)将步骤（1)中的洗脱液甲醇氮吹至近干，残液乙醇溶解并定溶至3mL，采用 0. 22 μ m微孔滤膜进行过滤后得到溶液A ; (3)采用高效液相色谱仪对上述溶液A进行检测；检测时选用CHIRALCEL 0D-H手 性柱，该手性柱的填料为5 μ m硅胶表面涂布纤维素-三，柱温 为室温；正己烷：乙醇按照40?10:60?90 (v:v)作为流动相；甲酸和乙酸铵水溶液的添 加量各为〇. 1 (v) %?0. 3 (v) % ;甲酸为色谱纯，纯度会98wt %，乙酸铵水溶液浓度4. 5? 5. 5mmol/L，检测时的流速为 0· 5mL/min ?0· 7mL/min，波长为 254nm。 在本实施例中，步骤（3)中使用正己烷与乙醇体积比分别为40:60、30:70、20:80 和10:90的流动相对氟甲喹进行手性拆分，拆分结果如表1所示，可以看出，随着流动相中 乙醇比例的增大，分离度增加，但柱压也随之增高。因此，所使用流动相正己烷与乙醇的最 佳体积比为20:80,在该流动相配比条件下，对映体分离效果良好且柱压较低。 表 1 【权利要求】1. ，其特征在于包括以下步骤： 1) 取养殖海水80?llOmL于烧杯中，加入氟甲喹标准品1?2mg，超声使其完全溶解， 取3?5mL过HLB固相萃取小柱，经4?6mL去离子水淋洗后用5?10mL甲醇洗脱，洗脱 液收集于容量瓶中； 2) 将步骤1)的洗脱液氮吹至近干，用乙醇复溶，定溶至3mL，过0. 22?0. 45 μ m微孔 滤膜后得到溶液A; 3) 采用高效液相色谱仪对上述溶液A进行检测；检测时选用CHIRALCEL 0D-H手性 柱，手性柱的柱温为室温，流动相为正己烷和乙醇，其体积比为40?10:60?90,流动相 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种海水中氟甲喹手性对映体的检测方法，其特征在于包括以下步骤：1)取养殖海水80～110mL于烧杯中，加入氟甲喹标准品1～2mg，超声使其完全溶解，取3～5mL过HLB固相萃取小柱，经4～6mL去离子水淋洗后用5～10mL甲醇洗脱，洗脱液收集于容量瓶中；2)将步骤1)的洗脱液氮吹至近干，用乙醇复溶，定溶至3mL，过0.22～0.45μm微孔滤膜后得到溶液A；3)采用高效液相色谱仪对上述溶液A进行检测；检测时选用CHIRALCEL OD‑H手性柱，手性柱的柱温为室温，流动相为正己烷和乙醇，其体积比为40～10:60～90，流动相中添加甲酸和乙酸铵水溶液，使它们体积含量分别为0.1％～0.3％，甲酸为色谱纯，纯度≧98wt％，乙酸铵水溶液浓度为4.5～5.5mmol/L，检测时的流速为0.5mL/min～0.7mL/min，波长为254nm。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：高小峰，聂晶，欧阳小琨，王阳光，杨立业，吴伟建，郁迪，徐红萍，李维，曾浩，杜军，李玄，
申请(专利权)人：浙江海洋学院，
类型：发明
国别省市：浙江;33