本发明专利技术公开了邻苯二甲酸在氨基酸分析中的应用，所述应用是指在用于氨基酸液相色谱－质谱联用分析的流动相中添加邻苯二甲酸，邻苯二甲酸的添加浓度为0.005～0.1mmol/L。本发明专利技术能够显著提高氨基酸的检测灵敏度，可同时改善其色谱分离效果，且应用方便，只需在流动相中加入适宜数量的邻苯二甲酸，无需改变其他分析条件，氨基酸的分析效果就会得到显著改善；另外，实验表明，长期使用添加有邻苯二甲酸的流动相，对色谱柱和质谱离子源均不会造成严重损害，且重现性好、易于定量分析，具有很好的应用推广价值。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了邻苯二甲酸在氨基酸分析中的应用，所述应用是指在用于氨基酸液相色谱一质谱联用分析的流动相中添加邻苯二甲酸，邻苯二甲酸的添加浓度为0.005?0.lmmol/L。本专利技术能够显著提高氨基酸的检测灵敏度，可同时改善其色谱分离效果，且应用方便，只需在流动相中加入适宜数量的邻苯二甲酸，无需改变其他分析条件，氨基酸的分析效果就会得到显著改善；另外，实验表明，长期使用添加有邻苯二甲酸的流动相，对色谱柱和质谱离子源均不会造成严重损害，且重现性好、易于定量分析，具有很好的应用推广价值。【专利说明】邻苯二甲酸在氨基酸分析中的应用
本专利技术涉及邻苯二甲酸在氨基酸分析中的应用，具体说，是涉及邻苯二甲酸作为 流动相添加剂在氨基酸液相色谱一质谱联用分析中的应用，属于氨基酸分析
。
技术介绍
氨基酸不仅是生物体内蛋白质的基本组成单元，也是体内合成神经递质、叶啉、多 胺等含氮化合物的重要前体。近期的研究表明，氨基酸还在体内起着重要的调控作用，如基 因表达过程、蛋白质的磷酸化、荷尔蒙的合成与分泌等。氨基酸在体内的存在形式主要有两 种，一种是以游离态存在于生理体液中，如血浆、尿液等之中，另一种是以结合态存在于多 肽和蛋白质中。氨基酸作为生物体内代谢循环的重要组成部分，对其定性定量分析在蛋白 质化学、生物化学、临床医学等领域的研究中都起着非常重要的作用。 目前氨基酸的分离、分析方法正在不断地拓展和完善中，这些方法包括液相色谱 与光学检测器联用技术（LC methods coupled with optical detection)、液相色谱一质谱 联用技术（简称：LC-MS)、毛细管电泳一质谱联用技术（简称：CE-MS)、气相色谱一质谱联 用技术（简称：GC_MS)、核磁方法（简称：NMR)等（参见H. Kaspar,K. Dettmer,ff. Gronwald, P. J. Oefne，Anal. Bioanal. Chem. 2009，393，445 ?452 ；C. W. Klampf 1，W. Buchberger, M. Turner, G. S. Fritz, J. Chromatogr. A. 1998，804，349 ?355.)。 液相色谱一质谱联用方法是氨基酸的重要分析方法之一。由于液相色谱在分 离热不稳定和高沸点化合物方面的优势以及质谱超高的灵敏度和强大的鉴定能力，使得 LC-MS方法成为分离分析复杂生物样本的有效手段。使用LC-MS方法分析氨基酸还可 以进一步分为两类，一类是游离氨基酸的直接分析，主要包括离子对反相色谱一质谱方 法(Ion-pair reversed-phase LC-MS)(参见 P. Chaimbault, K. Petritis, C. Elfakir, M. Dreux, J. Chromatogr. A. 1999,855,191 ~ 202.)和亲水相互作用色谱一质谱方法（简 称：HILIC-MS)(参见 S. Guo, J. A. Duan, D. ff. Qian, Y. P. Tang,，Y. F. Qian, D. ff. ffu, S. L. Su, E. X. Shang, J. Agric. Food Chem. 2013,61, 2709 ?2719.);另一类是衍生化间接分析法， 主要是指柱前化学衍生化结合反相色谱一质谱联用方法（参见K.Guo，C. Ji，L. Li, Anal. Chem. 2007, 79,8631-8638 ；ff. -C. Yang, H. Mirzaei, X. Liu, F. E. Regnier, Anal. Chem. 2006, 78,4702 ?4708.)。 游离氨基酸的直接分析操作简单，所需分析时间短，前处理时引入的误差因素较 少，在分析大量、复杂的生物样本时具有较为明显的优势。 亲水相互作用色谱（简称：HILIC)是近年来色谱领域研究的热点之一。它是一种 用来改善在反相色谱中保留较差的强极性物质保留行为的色谱技术。它通过采用强极性固 定性，并且结合高比例有机相/低比例水相组成的流动相来实现这一目的。而这样的流动 相组成尤其有利于提高电喷雾离子化质谱的灵敏度。采用亲水相互作用色谱一质谱联用技 术分离氨基酸时，无需对样品进行衍生化，样品经处理后直接进样，结合超高效液相色谱可 以在二十分钟内实现多种氨基酸的分离。由于氨基酸为两性化合物，为了有利于其分离和 改善峰形，通常需要在流动相中添加较高浓度的甲酸与甲酸铵或醋酸与醋酸铵形成的缓冲 溶液，而流动相中较高浓度的缓冲盐会抑制待测物的响应，影响了检测灵敏度。
技术实现思路
针对现有技术中存在的上述问题，本专利技术的目的是提供邻苯二甲酸作为流动相添 加剂在氨基酸液相色谱一质谱联用分析中的应用，以提高氨基酸的检测灵敏度和色谱分离 效果。 为实现上述专利技术目的，本专利技术采用如下技术方案： 本专利技术所述的邻苯二甲酸在氨基酸分析中的应用，是指在用于氨基酸液相色谱一 质谱联用分析的流动相中添加邻苯二甲酸，邻苯二甲酸的添加浓度为0. 005?0. lmmol/L, 优选为 0. 08mmol/Lo 作为优选方案，所述的流动相由水相和有机相组成，且水相和有机相中均含有甲 酸与甲酸铵。 作为进一步优选方案，所述的水相中含有5?10mmol/L的甲酸铵和0. IV %? 0. 3V%的甲酸，所述的有机相中含有1?5mmol/L的甲酸铵和0. 1V%?0. 3乂％的甲酸。 作为更进一步优选方案，所述的水相由0.005?0. lmmol/L邻苯二甲酸、5? 10mmol/L甲酸铵、0. 1V%?0. 3V%甲酸及水形成；所述的有机相由0. 005?0. lmmol/L邻 苯二甲酸、1?5mmol/L甲酸铵、0. 1V*%?0. 3V%甲酸、0. 1V%甲醇及乙腈形成。 作为最佳方案，所述的水相由0. 08mmol/L邻苯二甲酸、10mmol/L甲酸铵、0. 2V*% 甲酸及水形成；所述的有机相由0. 08mmol/L邻苯二甲酸、2mmol/L甲酸铵、0. 2V%甲酸、 0. 1V%甲醇及乙腈形成。 作为优选方案，所述的氨基酸液相色谱一质谱联用分析，包括如下步骤： a)配制一系列由标准溶液和内标溶液形成的工作溶液； b)采用本专利技术所述的添加有邻苯二甲酸的流动相，对步骤a)配制的一系列工作 溶液进行液相色谱串联质谱分析，绘制内标法标准曲线； c)采用与步骤b)相同的流动相，对待测的游离氨基酸样品进行液相色谱串联质 谱分析； d)根据已建立的内标法标准曲线计算样品中的氨基酸浓度。 作为进一步优选方案，所述液相色谱的分离方式为亲水相互作用色谱（HILIC)，所 述质谱的检测方式为多反应监测（MRM)。 作为进一步优选方案，所述标准溶液的配制方法如下：准确称取苯丙氨酸、亮氨 酸、异亮氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺、半胱氨酸、丙氨酸、甘氨酸、苏 氨酸、丝氨酸、精氨酸、谷氨酸、天门冬酰胺、组氨酸、Y -氨基丁酸、赖氨酸、天门冬氨酸和瓜 氨酸、羟基脯氨酸、2-氨基丁酸、￠本文档来自技高网...
【技术保护点】
邻苯二甲酸在氨基酸分析中的应用，其特征在于：在用于氨基酸液相色谱－质谱联用分析的流动相中添加邻苯二甲酸，邻苯二甲酸的添加浓度为0.005～0.1mmol/L。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：郭寅龙，祁婉舒，张立，张菁，吴梦茜，范若静，
申请(专利权)人：中国科学院上海有机化学研究所，
类型：发明
国别省市：上海;31
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。