本发明专利技术公开一种维生素B12的测定方法，样品前处理采用冷冻干燥粉碎，然后再通过维生素B12富集的方法，使维生素B12在低含量的软糖中可检出，而且检出结果准确，检测手段为高效液相色谱与质谱联用。与现有技术相比，本发明专利技术的维生素B12的测定方法，可以解决维生素B12在软糖中难富集和准确测定含量的问题，同时可以简化维生素B12利用生物法的间接含量测定方法，简化维生素B12低添加量下的糖果产品含量测定和质量控制方法。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开一种维生素B12的测定方法，样品前处理采用冷冻干燥粉碎，然后再通过维生素B12富集的方法，使维生素B12在低含量的软糖中可检出，而且检出结果准确，检测手段为高效液相色谱与质谱联用。与现有技术相比，本专利技术的维生素B12的测定方法，可以解决维生素B12在软糖中难富集和准确测定含量的问题，同时可以简化维生素B12利用生物法的间接含量测定方法，简化维生素B12低添加量下的糖果产品含量测定和质量控制方法。【专利说明】—种维生素BI 2的测定方法
本专利技术涉及维生素测定领域，确切地说是一种维生素B12的测定方法。
技术介绍
维生素B12又称钴胺素或氰钴素，是一种由含钴的卟啉类化合物组成的B族维生素，是唯一含金属元素的维生素。自然界中的维生素B12都是微生物合成的，高等动植物不能制造维生素B12。维生素B12是需要一种肠道分泌物(内源因子)帮助才能被吸收的惟一的一种维生素。有的人由于肠胃异常，缺乏这种内源因子，即使膳食中来源充足也会患恶性贫血。而植物性食物中基本上没有维生素B12。 按照GB/T17819-1999，低含量的维生素B12在植物胶软糖等营养果糖中很难检出。其他的常规检测如微生物法、发酵法，由于维生素B12性质不稳定，易分解，上述常规方法为测定钴元素，并不能确定完整的维生素B12分子式。
技术实现思路
针对上述缺陷，本专利技术解决的技术问题在于提供一种对低含量维生素B12的测定方法，可以解决维生素B12在软糖中难富集和准确测定含量的问题，同时可以简化维生素B12利用生物法的间接含量测定方法，简化维生素B12低添加量下的糖果产品含量测定和质量控制方法。 为了解决以上的技术问题，本专利技术的一种维生素B12的测定方法，包括如下步骤: I)、取冷冻至硬的含有维生素B12的样品，粉碎； 2)、取粉碎后的样品加热溶解提取，提取液待用； 3)、取固相萃取柱，加醇类活化，再用水进行平衡，取步骤2的提取液加到固相萃取柱上，上样后，用水进行淋洗，完毕后负压抽干，再加入醇类洗脱，洗脱液收集到比色管内，水浴氮吹干，然后加入水漩涡溶解，过滤膜过滤后待上机测定； 4)、进行液相色谱分析，液相色谱的条件如下: 色谱柱:菲罗门Kinetex HTT,TC, 10mmX4.6mm ID2.6um ； 流动相:乙腈+1mM铵盐溶液+酸溶液； 流速:0.4-0.8mL/min ； 进样量:2_4uL; 柱温:25-40O ； 5)、进行质谱分析，质谱条件为: 离子源:ESI； 扫描方式:ESI+; 检测方式:MRM; 裂解电压:100-200V; 雾化器压力:45psi ； 加热辅助气流速:8-15L/min ; 辅助气温度:200-400°C； 定性、定量离子对，碰撞气能量和去簇电压见下表: 【权利要求】1.一种维生素B12的测定方法，其特征在于，包括如下步骤: 1)、取冷冻至硬的含有维生素B12样品，粉碎； 2)、取粉碎后的样品加热溶解提取，提取液待用； 3)、取固相萃取柱，加醇类活化，再用水进行平衡，取步骤2的提取液加到固相萃取柱上，上样后，用水进行淋洗，完毕后负压抽干，再加入醇类洗脱，洗脱液收集到比色管内，水浴氮吹干，然后加入水漩涡溶解，过滤膜过滤后待上机测定； 4)、进行液相色谱分析，液相色谱的条件如下: 色谱柱:菲罗门 Kinetex HILIC, 10mmX4.6mm ID2.6um ； 流动相:乙腈+1mM铵盐溶液+酸溶液；流速:0.4-0.8mL/min ； 进样量:2-4uL ； 柱温:25-40 0C ； 5)、进行质谱分析，质谱条件为: 尚子源:ESI ； 扫描方式=ESI+ ； 检测方式:MRM ； 裂解电压:100-200V ； 雾化器压力:45psi ； 加热辅助气流速:8-15L/min ； 辅助气温度:200-400°C ； 定性、定量离子对，碰撞气能量和去簇电压见下表:化合物定性离子对定量离子对碰撞气能量裂解电压6)、吸取l_5ul标准溶液和试样溶液注入高效液相串联质谱仪中，以保留时间和质荷比定性，峰面积定量，用标准曲线法进行测定； 7)、维生素B12含量(ug/100g)其中: C1——由标准曲线求得试样溶液中维生素B12的浓度，单位ng/mL ； C0-空白试剂维生素B12的浓度,单位ng/mL ； V1-样品定量体积，单位mL ； V2——试样溶液上样体积,单位mL ； m——样品取样量，单位g。2.根据权利要求1所述的一种维生素B12的测定方法，其特征在于，步骤2中，取粉碎后样品4.000-6.0OOg放入10mL烧杯中，加入约25mL纯水，置于50°C _80°C水浴加热溶解，样液转移至50mL容量瓶，再分别两次用1mL润洗烧杯，洗液合并至容量瓶，纯水定容至刻度，样液待用。3.根据权利要求2所述的一种维生素B12的测定方法，其特征在于，步骤2中，取粉碎后样品5.0OOg放入10mL烧杯中，加入约25mL纯水，置于70°C水浴加热溶解，样液转移至50mL容量瓶，再分别两次用1mL润洗烧杯，洗液合并至容量瓶，纯水定容至刻度，样液待用。4.根据权利要求1所述的一种维生素B12的测定方法，其特征在于，步骤3中，取固相萃取柱，先加2-10mL醇类进行活化，再用2-10倍水进行平衡，速度为1_3滴/s，取步骤2中提取液4.00-6.0OmL加到固相萃取柱上,上样后,用4_6mL水进行淋洗,完毕后负压抽干，加入4-10mL醇类洗脱，洗脱液收集至1mL比色管，30-70°C水浴氮吹干，然后再加入0.50-2.0OmL水漩涡溶解，过滤膜后待上机测定。5.根据权利要求4所述的一种维生素B12的测定方法，其特征在于，步骤3中，取固相萃取柱，先加2-10mL醇类进行活化，再用3倍水进行平衡，速度为I滴/s，取步骤2中提取液5.0OmL加到固相萃取柱上,上样后，用5mL水进行淋洗,完毕后负压抽干，加入4-1OmL醇类洗脱，洗脱液收集至1mL比色管，50°C水浴氮吹干，然后再加入1.0OmL水漩涡溶解，过滤月旲后待上机测定。6.根据权利要求5所述的一种维生素B12的测定方法，其特征在于，步骤3中，加醇类进行活化，所述醇类为甲醇，甲醇的量为2.00?10.0OmL ;加入醇类洗脱，所述醇类为甲醇，甲醇的量为5.00?10.0OmL。7.根据权利要求1所述的一种维生素B12的测定方法，其特征在于，步骤3中，固相萃取柱为 APEL HLB、PhenomenexSTRATA-X或 Water s Oasis HLB 固相萃取柱。8.根据权利要求1所述的一种维生素B12的测定方法，其特征在于，步骤4中，进行液相色谱分析，液相色谱的条件如下: 色谱柱:菲罗门 Kinetex HILIC, 10mmX4.6mm ID2.6um ； 流动相:乙腈+1mM乙酸铵溶液+乙酸，其中，乙腈体积为50mL，1mM乙酸铵溶液体积为49.8mL,乙酸体积为0.2mL ；流速:0.5mL/min ； 进样量:3uL ； 柱温:30°C。9.根据权利要求1所述的一种维生本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种维生素B12的测定方法，其特征在于，包括如下步骤：1)、取冷冻至硬的含有维生素B12样品，粉碎；2)、取粉碎后的样品加热溶解提取，提取液待用；3)、取固相萃取柱，加醇类活化，再用水进行平衡，取步骤2的提取液加到固相萃取柱上，上样后，用水进行淋洗，完毕后负压抽干，再加入醇类洗脱，洗脱液收集到比色管内，水浴氮吹干，然后加入水漩涡溶解，过滤膜过滤后待上机测定；4)、进行液相色谱分析，液相色谱的条件如下：色谱柱：菲罗门Kinetex HILIC，100mm×4.6mm ID2.6um；流动相：乙腈+10mM铵盐溶液+酸溶液；流速：0.4‑0.8mL/min；进样量：2‑4uL；柱温：25‑40℃；5)、进行质谱分析，质谱条件为：离子源：ESI；扫描方式：ESI+；检测方式：MRM；裂解电压：100‑200V；雾化器压力：45psi；加热辅助气流速：8‑15L/min；辅助气温度：200‑400℃；定性、定量离子对，碰撞气能量和去簇电压见下表：6)、吸取1‑5ul标准溶液和试样溶液注入高效液相串联质谱仪中，以保留时间和质荷比定性，峰面积定量，用标准曲线法进行测定；7)、维生素B12含量(ug/100g)X=(C1-C0)×V1m×V2×103×100]]>其中：C1——由标准曲线求得试样溶液中维生素B12的浓度，单位ng/mL；C0——空白试剂维生素B12的浓度，单位ng/mL；V1——样品定量体积，单位mL；V2——试样溶液上样体积，单位mL；m——样品取样量，单位g。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王磊，何健，蒋丽，
申请(专利权)人：汤臣倍健股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。