基于肠上皮细胞对35nm的纳米银生物安全性的评价方法技术

技术编号:10757314 阅读:134 留言:0更新日期:2014-12-11 13:13
本发明专利技术基于肠上皮细胞对35nm的纳米银生物安全性的评价方法选取人结肠癌上皮细胞Caco-2细胞株作为研究对象,采用细胞毒性较强的纳米氧化锌(26.21nm)为阳性对照,不加入纳米材料的正常细胞为空白对照,通过AO/EB双染法、WST-1法初步探究究纳米材料的细胞毒性。使用氧化应激的方法,通过检测Caco-2细胞内ROS、SOD、GSH释放量的影响,来探讨纳米银对细胞的氧化损伤作用及可能机制。实验结果表明,35.48nm的银粒子在低剂量(<50µg/ml)时对肠上皮细胞的活性没有影响,不会造成氧化应激损伤;在染毒剂量为75µg/ml和100µg/ml对肠上皮细胞(Caco-2)的毒性存在剂量-效应和时间-效应,并对细胞造成了程度较弱的氧化应激损伤。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种基于肠上皮细胞对35.48nm的纳米银生物安全性的评价方法,其特征在于包括如下步骤:1)细胞培养:将人结肠癌上皮细胞Caco‑2细胞株加入含10%胎牛血清的DMEM培养基中,在培养箱内培养,细胞生长2~3 d换1次液,取对数生长期细胞进行后续实验;2)细胞传代:Caco‑2细胞贴壁生长,经过3~4 d,细胞生长至单层80%~95%时,弃掉上清液,用适量PBS轻轻冲洗,弃掉废液,加入0.25%胰蛋白酶进行消化3‑5 min,在倒置显微镜下观察到细胞刚刚变圆时,加入少量10%胎牛血清的DMEM培养基终止细胞消化过程,用吸管吸取培养基,轻轻吹打使细胞不再贴壁,将细胞悬液转移到新的培养瓶中,并加入适量培养基,放入培养箱中培养3‑4 d后,进行下一次传代培养;3)将纳米银和纳米氧化锌粉末分散在无血清的DMEM培养基中,制成不同浓度的纳米银、纳米氧化锌悬液,放入4 ℃冰箱中备用,因为这两种纳米材料易发生团聚,使得该分散体系不稳定,因此每次使用前,需使用超声波细胞破碎仪使纳米材料解聚;4)通过AO/EB双染法、WST‑1法进行细胞毒性分析,使用氧化应激法,通过Caco‑2细胞内ROS、SOD、GSH水平检测,来分析纳米银对细胞的氧化损伤作用及可能机制。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:关荣发王彦波宋益娟伍义行吕飞刘明启
申请(专利权)人:中国计量学院
类型:发明
国别省市:浙江;33

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