用于预测、检测和减少涉及免疫球蛋白单可变结构域的测定法中的非特异性蛋白干扰的技术制造技术

本发明专利技术提供，并且在某些具体但非限制性的方面中涉及：测定法，所述测定法可以用于预测给定的ISV是否遭受如本文所述的蛋白干扰和/或在所述测定法(如例如在ADA免疫测定法)中产生（非特异性）信号。所述预测性测定法可以例如用于测试给定的ISV是否可能具有产生所述蛋白干扰和/或所述信号的倾向；用于选择不易遭受或较不容易遭受所述蛋白干扰或产生所述信号的ISV’s；作为这样的测定法或测试，其可以用于测试对ISV的某些修饰是否(完全或部分)减少其产生这样的干扰或这样的信号的倾向；和/或作为这样的测定法或测试，其可以用于指导ISV的修饰或改进从而减少其产生所述蛋白干扰或信号的倾向；-方法，所述方法用于修饰和/或改进ISV’s从而消除或减少其产生所述蛋白干扰或所述信号的倾向；-可以引入ISV的修饰，其消除或减少所述ISV产生所述蛋白干扰或所述信号的倾向；-被特异性选择(例如，使用本文所述的测定法)从而不具有或具有较低/减小的产生所述蛋白干扰或所述信号的倾向的ISV’s；-被修饰和/或改进的ISV’s，其不具有或具有较低/减小的产生所述蛋白干扰或所述信号的倾向。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本专利技术提供，并且在某些具体但非限制性的方面中涉及：测定法，所述测定法可以用于预测给定的ISV是否遭受如本文所述的蛋白干扰和/或在所述测定法(如例如在ADA免疫测定法)中产生（非特异性）信号。所述预测性测定法可以例如用于测试给定的ISV是否可能具有产生所述蛋白干扰和/或所述信号的倾向；用于选择不易遭受或较不容易遭受所述蛋白干扰或产生所述信号的ISV’s；作为这样的测定法或测试，其可以用于测试对ISV的某些修饰是否(完全或部分)减少其产生这样的干扰或这样的信号的倾向；和/或作为这样的测定法或测试，其可以用于指导ISV的修饰或改进从而减少其产生所述蛋白干扰或信号的倾向；-方法，所述方法用于修饰和/或改进ISV’s从而消除或减少其产生所述蛋白干扰或所述信号的倾向；-可以引入ISV的修饰，其消除或减少所述ISV产生所述蛋白干扰或所述信号的倾向；-被特异性选择(例如，使用本文所述的测定法)从而不具有或具有较低/减小的产生所述蛋白干扰或所述信号的倾向的ISV’s；-被修饰和/或改进的ISV’s，其不具有或具有较低/减小的产生所述蛋白干扰或所述信号的倾向。【专利说明】用于预测、检测和减少涉及免疫球蛋白单可变结构域的测 定法中的非特异性蛋白干扰的技术 本专利技术涉及免疫球蛋白单可变结构域领域。 免疫球蛋白单可变结构域或"ISV"在本文中通常定义为这样的氨基酸序列，其 -包含免疫球蛋白折叠或在适合的条件下（如生理条件下）能够形成免疫球蛋白 折叠（即通过折叠），即从而形成免疫球蛋白可变结构域（如，例如，VH，VL或VHH结构域）； 和 -形成（或在这样适合的条件下能够形成）免疫球蛋白可变结构域，其包含功能 性抗原结合位点（在其不需要与另一个免疫球蛋白可变结构域相互作用（如VH-VL相互作 用）以形成功能性抗原结合位点的意义上）。 本领域目前已知的免疫球蛋白单可变结构域的一些实例是VHH's和/或（其它） 纳米抗体，dAb' s和（单）结构域抗体。在这些之中，到提交本申请之日时，各种纳米抗体 处于I期和II期临床试验中。这使得获得可靠的测定法变得重要，所述测定法用于分析来 自用ISV' s治疗的人（如临床试验受试者，和在所述ISV' s上市后，用所述ISV' s治疗的 患者）的生物样品。 这不仅对于管理目的是重要的，而且对于用生物药物治疗患者也是重要的，因为 开出所述治疗处方的临床医生也希望获得监测治疗的各个方面的可靠测定法。 例如，在生物药物分子的临床开发中，重要的是评估它们的免疫原潜力，以及具体 地它们可以激发所谓"抗-药物抗体"或"ADA's"的程度。这可以使用所谓的"抗-药物抗体" 或"ADA's"(免疫测定法)进行测定（见例如Shankar等的综述，Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis(药物和生物医学分析杂志），48(2008), 1267-1281;以及 Mire-Sluis 等，J. Immunol. Meth. 289 (2004)，1-16; Peng 等，Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis(药物和生物医学分析杂志），54, (2011)，629-635;和 Loyet 等，J. Immunol. Meth. 345 (2009)，17-28。所述ADA测定法和进行该测定法的方法是药学领 域的标准常识并且在生物药物产品的临床开发中常规使用它们（并且也为世界上的各个 管理机构所要求）。 例如，如在Mire-Sluis的文章第3和第4页上所述，并且如例如也在Peng的文章 的图中示意性地举例，已知许多不同的ADA测定法形式，如"ELISA-桥接形式"，"ELISA-直 接形式"，"间接形式"，放射免疫沉淀测定法（RIP)，"表面等离振子共振"和"电化学发光-桥 接形式"。本领域技术人员清楚进行ADA免疫测定法的其它形式。 技术人员也熟悉许多不同的商购技术平台，其已经显示适合于建立和进行ADA 测定法。这些包括但不限于MSD平台（Mesoscale)，Gyrolab (Gyros)和octet平台 (Fortebio)〇 ADA测定形式的一些非限制性实例也在图1A-1C中示意性地显示。 通常，应该注意在这些用于检测或测量针对ISV的ADA' S的ADA测定法中，ISV 用作"分析试剂"（即，作为用于检测任何ADA' s在测试样品中是否存在的化合物）"，并且 ADA's是"抗原"（即，在测试的样品中待检测的化合物）。因此，在这些测定法中，ISV通常 /经常结合于载体(如ELISA板)，而ADA' s (如果存在）在进行测定法的样品中存在。 为了更好地理解本文所述的本专利技术，也应该注意-作为对比-在本文中用于预测 ISV是否产生蛋白干扰的方法中，ISV通常用作"抗原"（即，作为待检测的化合物），并且抗 体(其如本文进一步所述）用作"分析试剂"（即作为分别检测给定的ISV是否结合；并且由 此分别检测其是否具有产生蛋白干扰的较高或增加的风险的工具）。因此，在根据本专利技术的 这种方法中，用作分析试剂的抗体（其在本文中也称为"分析抗体"）通常结合于载体（即 结合于ELISA板），并且ISV(存在）于待测试的样品中。然而，通常应该注意到本专利技术不 限于其中"分析抗体"结合于载体的测定法。例如，在进行根据本专利技术的测定法的备选方法 中（如例如在图1中显示并且在实施例中描述），分析抗体替代性地用作桥接剂（bridging agent)，并且因此在溶液中而不是结合于板（尽管其通过包被在板上的ISV间接结合于 板）。然而，也在实施例中所述的特异性桥接测定法中（其是竞争性测定法），分析抗体仍 旧用作分析试剂（即，分别确定目的ISV是否结合；并且因此分别确定其是否具有产生蛋 白干扰的较高风险或增加的风险）。还设想，基于本文进一步的公开内容，技术人员能够设 计其他的测定形式，其中分析抗体可以用作分析试剂从而分别确定给定的ISV是否能够结 合；并由此确定其是否具有产生蛋白干扰的较高或增加的风险）。 作为研究单链Fv's或"ScFv's"(其是包含免疫球蛋白单可变结构域的构建体，并 且类似于ISV' S，不与恒定结构域缔合）的结果，已经在本领域中描述，免疫球蛋白可变结 构域的C端形成疏水补片（hydrophobic patch),其在抗体中被埋在可变结构域和恒定结 构域之间的界面中，但是当可变结构域不与恒定结构域缔合时，成为溶剂-暴露的（Nieba 等，Protein Engineering, 10, 435-444(1997))。还描述了暴露的 C-端可以形成 B-细胞 表位，其可以产生抗-药物抗体和/或与(新出现和/或预先存在的）抗-药物抗体相互作 用（W0 11/07586)，可以接着使用上述提及的ADA测定法来确定它的存在。为此原因，已经 提议对形成可变结构域的C-端的部分的一些氨基酸残基进行突变以减少所述疏水性和/ 或去除所述表位。例如，Nieba等提议突变VH区的位置11，14, 41，84, 87和/或89 (按照 Kabat编号），而在W0 11/07586中，提议突变VL结构域的位置99本文档来自技高网...

【技术保护点】
免疫球蛋白单可变结构域(ISV)，其是纳米抗体或包含VH序列(即，不同于纳米抗体的)或衍生自VH序列的ISV，所述ISV具有序列为VTVSS(X)n的C‑端末端，其中：‑n=1,2或3(并且优选地1或2)，其中每个X=Ala或Gly；或‑n=1,2或3(并且优选地1或2)，其中每个X=Ala；或‑n=1,2或3(并且优选地1或2)，其中每个X=Gly；或‑n=2或3，其中至少一个X=Ala或Gly(其余的氨基酸残基X独立地选自任何天然存在的氨基酸但是优选独立地选自Val,Leu和/或Ile)；或‑n=2或3，其中除了一个X之外所有的X=Ala或Gly(其余的氨基酸残基X独立地选自任何天然存在的氨基酸但是优选独立地选自Val,Leu和/或Ile);或在其C‑端末端包含所述ISV(优选地所述纳米抗体)的蛋白或多肽。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：尤迪特·鲍迈斯特，玛丽葆拉·吕西安娜·阿曼达·布什，卡罗·布东，玛丽安格·比斯，维尔勒·斯诺尔克，斯特凡妮·斯塔埃朗，
申请(专利权)人：埃博灵克斯股份有限公司，
类型：发明
国别省市：比利时;BE