一种基于“睡美人”转座子系统制作高效转染各类细胞的方法技术方案

技术编号:10748204 阅读:203 留言:0更新日期:2014-12-10 19:15
本发明专利技术公开一种基于“睡美人”转座子系统制作高效转染各类细胞的方法,采用BglⅡ和NotⅠ酶切位点以及NotⅠ和EcoRⅠ酶切位点在pT/HB转座子载体上加入长度为589bp的CMV启动子和长度为720bp的EGFP(增强型绿色荧光蛋白)基因,构建为全长4849bp的pT-CMV-EGFP重组载体;利用脂质体转染pT-CMV-EGFP转座子及辅助转座酶SB11,脂质体的用量为总DNA质量的3-4倍,转座酶SB11与转座子pT-CMV-EGFP质量比1:4体系转染贴壁细胞3T3,悬浮细胞H22和原代培养DC细胞。本发明专利技术方法经36-48小时培养后,利用倒置荧光显微镜和流式细胞仪检测,筛选得到一个较通用的转染体系,可高效稳定的转染各种细胞系,并具有较好的适用性和可操作性。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种基于“睡美人”转座子系统制作高效转染各类细胞的方法,其特征在于:(1)利用 BglⅡ和NotⅠ酶切位点以及NotⅠ和EcoRⅠ酶切位点在pT/HB转座子载体上加入长度为589bp的CMV启动子和长度为720bp的EGFP(增强型绿色荧光蛋白)基因,构建全长为4849bp的pT‑CMV‑EGFP重组载体;(2)利用脂质体转染pT‑CMV‑EGFP转座子及辅助转座酶SB11,脂质体的用量为总DNA质量的3‑4倍,转座酶SB11与转座子pT‑CMV‑EGFP质量比1:4体系转染贴壁细胞3T3,悬浮细胞H22和原代培养细胞DC。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:杨柳苏晓三王翼寅陈睿张蕾
申请(专利权)人:昆明市第一人民医院
类型:发明
国别省市:云南;53

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