一种牛樟芝中腺苷与鸟苷含量的测定方法技术

本发明专利技术涉及一种牛樟芝中腺苷与鸟苷含量的测定方法。所述的测定方法包括以下步骤：先称取腺苷及鸟苷对照品加水配制成混合对照品储备液，加入内标溶液，配制供含量测定用对照品溶液；再取樟芝菌干燥粉末先后进行超声提取、过滤、离心及减压浓缩等，配制供试品溶液；精密吸取对照品溶液加水定容至刻度，将溶液分别进样分析，进行线性回归，分别得腺苷与鸟苷的回归方程；最后对供试品溶液进行高效毛细管电泳分析，根据线性回归方程计算样品中腺苷及鸟苷的含量。本发明专利技术采用水作为溶剂进行超声提取，保证了核苷类成分的有效提取，在测定含量时，将毛细血管电泳条件进行优化，保证了不同种类核苷类成分的有效分离，且分析时间缩短。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及。所述的测定方法包括以下步骤：先称取腺苷及鸟苷对照品加水配制成混合对照品储备液，加入内标溶液，配制供含量测定用对照品溶液；再取樟芝菌干燥粉末先后进行超声提取、过滤、离心及减压浓缩等，配制供试品溶液；精密吸取对照品溶液加水定容至刻度，将溶液分别进样分析，进行线性回归，分别得腺苷与鸟苷的回归方程；最后对供试品溶液进行高效毛细管电泳分析，根据线性回归方程计算样品中腺苷及鸟苷的含量。本专利技术采用水作为溶剂进行超声提取，保证了核苷类成分的有效提取，在测定含量时，将毛细血管电泳条件进行优化，保证了不同种类核苷类成分的有效分离，且分析时间缩短。【专利说明】
本专利技术涉及一种真菌有效成份的含量测定，具体涉及。
技术介绍
樟芝Antrodia camphorata又称牛樟芝或牛樟燕,是只生长于我国台湾省牛樟树(Cinnamomumkanehirai)腐朽内壁的多孔真菌，也是台湾特有珍贵真菌。研究发现樟芝成分复杂，含有很多生理活性物质具有多种生理活性，如抗氧化、保肝、抗癌、解毒、消炎等，对食物中毒等危急病症具有神奇的疗效。 核苷类成分是樟芝中重要的一种生理活性物质，能抑制血小板的过度聚集.降低血液的粘度，从而改善人体血液循环，对年老血稠或有瘀血倾向者具有良好的抗血凝的效果.能防止血栓病如脑血栓、心肌梗塞等的发生。目前，我国台湾及日本已有樟芝保健食品上市，并作为食品进口销往内地市场。目前，已有研究报道多糖及三萜类成分分析，但腺苷成分分析及含量测定研究较少见或分析方法不成熟、灵敏度低。为此，本专利技术提供一种高效、简便、灵敏度高的樟芝腺苷含量的测定方法。
技术实现思路
针对上述现有技术的不足，本专利技术提供一种牛樟芝中腺苷与鸟苷含量的快速测定方法。 本专利技术的技术方案如下:，包括以下步骤:(O制备对照品溶液:准确称取腺苷及鸟苷对照品2-5g，加水10-15ml，混匀，，配制成混合对照品储备液；(2)制备供含量测定对照品溶液:量取步骤(I)中制得的混合对照品储备液2-5ml置入5ml量瓶中，加入内标溶液，制得浓度为40-60ug/ml的供含量测定用对照品溶液；(3)制备供试品溶液:取樟芝菌干燥粉末0.2-0.5g，加蒸馏水30-50ml超声提取，微孔滤膜过滤，取滤液离心，取上清液，加入等体积的蒸馏水，加热至65-70°C，加热20-30min，微孔滤膜过滤，取滤液减压浓缩，加蒸馏水定容至50ml，超声混匀10-30min，微孔滤膜过滤，取滤液作为供试品溶液； (4)绘制标准曲线:精密吸取对照品溶液0.2,0.4、1.0,2.0,4.0ml于1ml量瓶中加水定容至刻度，将定容后的溶液分别进样分析，以峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标进行线性回归，分别得腺苷与鸟苷的回归方程；(5)供试品浓液分析:对供试品溶液进行高效毛细管电泳分析，根据线性回归方程计算样品中腺苷及鸟苷的含量。 步骤(I)中所述的腺苷与鸟苷的称取量均为0.2-0.5g。 步骤(I)中所述的混合对照品储备液中腺苷与鸟苷的浓度均为0.05-0.2mg/ml。 步骤(2)中所述的内标溶液为SMZ溶液，浓度为0.1-0.3mg/ml，加入量为l_2ml。 步骤(3)中所述的超声提取条件为:40-60kHz，500-600W。 步骤(3)中所述的超声提取的时间为40_80min。 步骤(3)中所述的离心速度为12000-15000r/min，离心时间为10_20min。 步骤(5)中所述的电泳条件为:未涂溃标准熔融石英毛细管(75umX64.5cm，有效长度56cm)，检测波长254nm，分离电压:20kV，进样压力:5kPa，温度:25°C;缓冲液:60mmol/L硼砂含15mmol/L β环糊精。 步骤(5)中所述的电泳分析前毛细管采用氢氧化钠溶液、蒸馏水及缓冲液压力冲洗。 所述的氢氧化钠溶液、蒸馏水及缓冲液均以0.45um的微孔滤膜过滤且完成超声脱气。 本专利技术与现有技术相比，有益效果体现在以下几点:1.本专利技术中在对牛樟芝中核苷类成分进行分析时，先对其进行超声提取，研究显示，采用不同体积浓度的乙醇水溶液及水进行提取时，水提取率较高，本专利技术中采用水作为溶剂可充分有效提取樟芝中核苷类成分，此外，料液比对提取也有一定影响，本专利技术中樟芝菌粉末为0.2-0.5g，加蒸馏水30-50ml，既保证了核苷类成分的有效提取，也利于后续减压浓缩过程的进行。 2.研究显示，毛细血管电泳法测定真菌中核苷类成分时，其分离电压、缓冲液种类及浓度、运行温度、检测波长等均会明显影响核苷类成分的检测及分析，本专利技术中，将毛细血管电泳条件进行优化，保证了牛樟芝中不同种类核苷类成分的有效分离，且分析时间缩短。 3.文献报道，咖啡因和SMZ与核苷结构相近，而咖啡因的迁移时间比腺苷与鸟苷均短，而SMZ的迁移时间介于腺苷与鸟苷之间，且能与样品中核苷类成分及杂质均达基线分离，因此，本专利技术中将SMZ作为内标，保证了电泳的顺利进行。 【具体实施方式】 下面结合实施例对本专利技术做进一步说明。 实施例1，包括以下步骤:(1)制备对照品溶液:准确称取腺苷及鸟苷对照品2g，加水10ml，混匀，，配制成腺苷与鸟苷浓度均为0.05mg/ml的混合对照品储备液；(2)制备供含量测定对照品溶液:量取步骤(I)中制得的混合对照品储备液2ml置入5ml量瓶中，加入Iml浓度为0.lmg/ml的SMZ溶液作为内标溶液，制得浓度为40ug/ml的供含量测定用对照品溶液；(3)制备供试品溶液:取樟芝菌干燥粉末0.2g，加蒸馏水30ml超声提取40min，提取条件:40kHz，500W，微孔滤膜过滤，取滤液以12000r/min离心lOmin，取上清液，加入等体积的蒸懼水，加热至65°C,加热20min,微孔滤膜过滤,取滤液减压浓缩,加蒸懼水定容至50ml,超声混匀lOmin，微孔滤膜过滤，取滤液作为供试品溶液； (4)绘制标准曲线:精密吸取对照品溶液0.2,0.4、1.0,2.0,4.0ml于1ml量瓶中加水定容至刻度，将定容后的溶液分别进样分析，以峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标进行线性回归，分别得腺苷与鸟苷的回归方程；(5)供试品浓液分析:对供试品溶液进行高效毛细管电泳分析，根据线性回归方程计算样品中腺苷及鸟苷的含量。 步骤(5)中所述的电泳条件为:未涂溃标准熔融石英毛细管(75umX64.5cm，有效长度56cm)，检测波长254nm，分离电压:20kV，进样压力:5kPa，温度:25°C;缓冲液:60mmol/L硼砂含15mmol/L β环糊精。 步骤(5)中所述的电泳分析前毛细管采用氢氧化钠溶液、蒸馏水及缓冲液压力冲洗。 所述的氢氧化钠溶液、蒸馏水及缓冲液均以0.45um的微孔滤膜过滤且完成超声脱气。 实施例2，包括以下步骤:(1)制备对照品溶液:准确称取腺苷及鸟苷对照品5g，加水15ml，混匀，，配制成腺苷与鸟苷浓度均为0.2mg/ml的混合对照品储备液；(2)制备供含量测定对照品溶液:量取步骤(I)中制得的混合对照品储备液2ml置入5ml量瓶中，加入2ml浓度为0.3mg/ml的SMZ溶液作为内标溶液，制得浓度为60ug/ml的供含量测定用对照本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种牛樟芝中腺苷与鸟苷含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）制备对照品溶液：准确称取腺苷及鸟苷对照品2‑5g，加水10‑15ml，混匀，，配制成混合对照品储备液; （2）制备供含量测定对照品溶液：量取步骤（1）中制得的混合对照品储备液2‑5ml置入5ml量瓶中，加入内标溶液，制得浓度为40‑60ug/ml的供含量测定用对照品溶液；（3）制备供试品溶液：取樟芝菌干燥粉末0.2‑0.5g，加蒸馏水30‑50ml超声提取，微孔滤膜过滤，取滤液离心，取上清液，加入等体积的蒸馏水，加热至65‑70℃，加热20‑30min，微孔滤膜过滤，取滤液减压浓缩，加蒸馏水定容至50ml，超声混匀10‑30min，微孔滤膜过滤，取滤液作为供试品溶液；（4）绘制标准曲线：精密吸取对照品溶液0.2、0.4、1.0、2.0、4.0ml于10ml量瓶中加水定容至刻度，将定容后的溶液分别进样分析，以峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标进行线性回归，分别得腺苷与鸟苷的回归方程；（5）供试品浓液分析：对供试品溶液进行高效毛细管电泳分析，根据线性回归方程计算样品中腺苷及鸟苷的含量。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘巴宁，郑安乔，
申请(专利权)人：中山安荞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44