本发明专利技术公开了一种类胚胎干细胞先驱细胞群，该细胞群是通过系统性筛选人类间叶基质干/先驱细胞并通过选自于由CD34、CD117、CD133、CD201及GloboH所组成的群组的细胞抗原进行细胞分选，而从人类组织中分离，以及将该分选的细胞培养于添加至少一或多种类固醇及一或多种生长因了的培养基中。本发明专利技术的细胞会表达CD34并于初代具有球状细胞聚落生成，且会表现表达多能性类胚胎干细胞(ESCs)的特征。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】人类多能性类胚胎干细胞先驱细胞
本专利技术涉及一群前驱/先驱细胞，其特别富集有多能性类胚胎干细胞间叶共同前驱细胞（mesenchymalcommonprogenitorcells，MCPCs）群，亦涉及富集这些细胞的方法。
技术介绍
在再生医学中，鉴别出高度安全且有效的干细胞来源，为发展生物材料，用以修复及更新损坏及具缺陷的组织的第一步。人类胚胎干细胞（hESCs）可保持为未分化的状态；但当将其培养于适当环境中时，便会开始自发地分化为多种不同型态的细胞。这一重要的启示，在于胚胎干细胞的培养可作为生产多种不同细胞型态的来源。然而，这种方法却非有效率的方法，原因在于仍须控制胚胎干细胞的分化（参阅：干细胞：科学进度及未来研究方向（StemCells:ScientificProgressandFutureResearchDirections）。DepartmentofHealthandHumanSevice，2001年6月）。间叶干细胞或MSCs为多能性干细胞，可分化为多种不同的细胞型态。MSCs可从胎盘、脂肪组织、肺、骨髓、牙髓及血液分离。已知MSCs于活体外或活体内可分化的细胞型态包括成骨细胞、软骨细胞、肌细胞、脂肪细胞及β-胰岛细胞。从骨髓中可发现稀少的MSCs，在10,000有核细胞中占约1个。虽然该MSCs并非永生的，但这些细胞在培养时，具可增殖数倍的能力，且仍维持其生长及分化多向的潜能。Pittenger等人（科学284,143(1999)）公开了分离的间叶（干）细胞都一致表达SH2、SH3、CD29、CD44、CD71、CD90、CD106、CD120a、CD124及其它许多表面蛋白；然而这些间叶细胞不表达造血细胞系的其它标记，包括脂多醣体受器CD14、CD34，及白血球共同抗原CD45。MSCs可通过许多分子（包含CD44及CD105）的表达以及不表达造血性标记CD34、CD45及CD14来鉴定。报导指出，羊膜的间叶基质细胞及人类绒毛膜的间叶基质细胞可从胎盘中分离。这些细胞的表面抗原表达，如下表A所示，显示其无法表达CD45、CD34、CD14及HLA-DR（Parolini等人，干细胞26:300-311,2008）。表A.羊膜的间叶基质细胞及人类绒毛膜的间叶基质细胞于2-4代时，其特定抗原的表达阳性(≥95%)阴性(≤2%)CD90CD45CD73CD34CD105CD14HLA-DRCaplice（US7,790,453B2）教示衍生自血液的成体平滑肌先驱细胞为CD34阳性的。然而，Caplice所公开的平滑肌先驱细胞并没有将其特征化描述为间叶基质干／先驱细胞，且这些先驱细胞具有局限的分化潜能。Lucas等人（US7,259,011B2）教示表达CD13、CD34、CD56及CD117的分离的人类多能的成体干细胞（PPASCs）。根据Lucas等人，该PPASCs不会表达CD10、CD14及阶段特异性胚胎抗原SSEA2。该PPASCs也未被特征化描述为间叶基质干／先驱细胞。Hariri（US7,468,276B2）教示分离的人类胎盘干细胞为OCT4+及CD34+。由Hariri公开的人类胎盘干细胞为SSEA3-及SSEA4-。由Hariri公开的人类胎盘干细胞未被特征化描述为间叶基质干／先驱细胞。Edinger等人（US2008/0206343A1）公开来自胎盘的非附着的CD34+CD45-干细胞。根据Edinger等人所述的胎盘干细胞为非附着的，故其不是间叶的。对于组织工程而言，年轻且可长时间自我更新的富集化多能性干细胞群为组织工程所期望的。
技术实现思路
因此，本专利技术提供一群类胚胎干细胞前驱细胞，其为富集化的多能性人类间叶共同先驱细胞（MCPCs）群。这些细胞是通过系统性筛选人类间叶基质干／先驱细胞，接着以选自于由CD34、CD117、CD133、CD201及GloboH所组成群组的细胞抗原进行细胞分选（cellsorting），自人类体细胞组织中分离，然后培养于添加至少一种或多种类固醇，及一种或多种生长因子的培养基中。本专利技术不可预期的发现，这些细胞会表达CD34；这些细胞在本专利技术中称为MCPCs，其与公知的不表达CD34的人类间叶基质（干）细胞不同。这些MCPCs于初代时会形成球状细胞聚落，且在活体外会表达多能性类胚胎干细胞（ESCs）的特性。在一方面，本专利技术提供一群富集化的多能性人类间叶共同先驱细胞（MCPCs），其鉴定为间叶基质干／先驱细胞，且具有至少下列特征：CD14+、CD34+、CD117+、CD133+(AC133+)、CD201+、Nestin+、SSEA3+、SSEA4+及GloboH+。另一方面，本专利技术提供一种制备本专利技术的富集化的多能性人类MCPCs群的方法，包含通过系统性筛选人类间叶基质干／先驱细胞，接着以选自于由CD34、CD117、CD133、CD201及GloboH所组成群组的细胞抗原进行细胞分选，以从人类体细胞组织中分离，以及培养于添加选自于由皮质类固醇及胆固醇所组成群组中至少一或多种类固醇，及至少一或多种选自于由表皮生长因子（EGF）、纤维母细胞生长因子（FGF）、类胰岛素生长因子（IGF）、胰岛素、血小板衍生生长因子（PDGF）、IL-6、及血小板生成素（TPO）所组成群组中生长因子的培养基中。另一方面，本专利技术提供一种组合物，其包含包埋于褐藻胶（alginate）中的本专利技术的富集化种多能性人类MCPCs群。又另一方面，本专利技术提供一种用于干细胞培养的供养细胞层（feedercelllayer），其包含本专利技术的富集化的多能性人类MCPCs群。再另一方面，本专利技术提供一种干细胞小生境（stemcellniche），其包含一支架（scaffold）及种植于该支架上的本专利技术的富集化的多能性人类MCPCs群。附图说明本专利技术的
技术实现思路
以及实施方式，在阅读时可搭配附图以更好地理解本专利技术。图1显示人类胎盘羊膜间叶细胞的细胞型态。图1A为AM-MSCs-CD34+细胞的相位差影像。图1B为AM-MSCs-CD34-细胞的相位差影像。图2显示AM-MSCs-CD34+及AM-MSCs-CD34-细胞的细胞表面标记的图谱；其中图2A显示CD29、CD44、CD73、CD90、CD105、CD31、CD56、EGFR及PDGFR的表达；以及图2B显示CD34、CD117、CD133、SSEA1、SSEA3、SSEA4、GloboH及CD201的表达。图3A提供以CD34分选的MSCs进行神经的及寡树突细胞分化的示意图。图3B提供以CD34分选的MSCs进行多巴胺神经元分化的示意图。图4显示，于多巴胺神经元诱导后，CD34+或CD34-AM-MSC的TuJ1、TH及MAP2表达状况；其中图4A提供CD34+AM-MSC诱导的神经元的TuJ1(上)、GFAP(中)及DAPI(下)的免疫荧光染色影像；图4B提供CD34-AM-MSC诱导的神经元的TuJ1(上)、GFAP(中)及DAPI(下)的免疫荧光染色影像；图4C提供CD34+AM-MSC诱导的神经元的TH(上)、MAP2(中)及DAPI(下)的免疫荧光染色影像；以及图4D提供CD34-AM-MSC诱导的神经元的TH(上)、本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种富集化的多能性人类间叶共同先驱细胞（MCPCs）群，其被鉴定为具有至少以下特征：CD14+、CD34+、CD117+、CD133+（AC133+）、CD201+、Nestin+、SSEA3+、SSEA4+及GloboH+的间叶基质干／先驱细胞。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.10.18 US 61/394,0731.一种富集化的多能性人类CD34+间叶共同先驱细胞(MCPCs)群，其被鉴定为间叶基质干/先驱细胞，且进一步具有至少以下特征：CD14+、CD117+、CD133+、CD201+、Nestin+、SSEA3+、SSEA4+及GloboH+。2.根据权利要求1所述的富集化的多能性人类CD34+间叶共同先驱细胞(MCPCs)群，其特征在于，该MCPCs具有下列特征中至少一个：CD44+、CD54+、CD56+、CD105+、CD146+及PDGFR+。3.根据权利要求1所述的富集化的多能性人类CD34+间叶共同先驱细胞(MCPCs)群，其特征在于，其从人类体细胞组织分离。4.根据权利要求1所述的富集化的多能性人类CD34+间叶共同先驱细胞(MCPCs)群，其为具有以下特征：CD14+,CD34+,CD117+,CD133+,CD201+,Nestin+,SSEA3+,SSEA4+,GloboH+,CD44+,CD54+,CD56+,CD105+,CD146+及PDGFR+的间叶基质干/先驱细胞。5.根据权利要求3所述的富集化的多能性人类CD34+间叶共同先驱细胞(MCPCs)群，其中该人类体细胞组织选自于由羊膜、绒毛膜、脐带、子宫内膜、齿龈、骨髓及脂肪所组成的群组。6.根据权利要求5所述的富集化的多能性人类CD34+间叶共同先驱细胞(MCPCs)群，其中该人类体细胞组织为羊膜。7.根据权利要求1所述的富集化的多能性人类CD34+间叶共同先驱细胞(MC...
【专利技术属性】
技术研发人员：丹尼尔·子弼·施，
申请(专利权)人：尚翔股份有限公司，
类型：发明
国别省市：中国台湾;71
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