结核分枝杆菌药敏指示剂的使用方法技术

本发明专利技术涉及对结核分枝杆菌的耐药性进行试验的医学检验领域，具体为一种结核分支枝杆菌药敏指示剂的使用方法，包括以下步骤：对提供的标本进行前处理，制成浓集标本；向浓集标本中加入液体增菌培养基，制成液态增菌培养标本，增菌培养0～7天；将固体培养基加温熔化，制成液态的固体培养基，然后将其温度降至与上述液态增菌培养标本相应的培养温度；将液态增菌培养标本与液态的固体培养基混合，制成液态药敏试验标本；将液态药敏试验标本凝固，制成带有药敏纸片的固态药敏试验标本；将固态药敏试验标本培养5～15天；通过指示剂指示观察药物抑菌圈；本发明专利技术能缩短结核分支枝杆菌药敏试验过程所需的时间。

【技术实现步骤摘要】

 本专利技术涉及对结核分枝杆菌的耐药性进行试验的医学检验领域，具体为一种结核分支枝杆菌药敏指示剂的使用方法。
技术介绍
结核病的耐药性是一个日益严重的公共卫生问题，严重威胁着结核病的控制。中国工程院院士钟南山在两会期间曾称，中国其有450万活动性结核病人，带菌者高达5.5亿，而带菌者一生中有10％的可能性会发病。2009年4月，中国卫生部部长陈竺在北京举行的“耐多药／广泛耐药结核病高负担国家”部长级会议上通报了中国耐药结核病的情况：中国疾病防控中心的抽样调查显示，中国结核病人中，耐多药发病率为8.32％，总计约为12万人，居世界第二位，广泛耐药发病率为0.68％，总计大约1万人，其危害远远超过艾滋病。药敏试验是对结核分枝杆菌的耐药性进行检测的重要试验。现有的结核分枝杆菌药敏试验方法，一般有纸片检验法和浓度检验法。纸片检验法是通过观察由于贴在固体培养基表面上药物纸片形成的药物抑菌圈来确定结核分枝杆菌对药物的敏感性；浓度检验法是通过观察检测不同药物和不同药物浓度试验容器中结核分枝杆菌的生长情况来确定结核分枝杆菌对药物的敏感性。不管是纸片检验法还是浓度检验法，其整个药敏试验过程一般可分为标本前处理、增殖或分离培养和药敏检验三个阶段。现有的纸片检验法，标本前处理阶段的步骤为：①用吸管吸取提供的标本置于试验容器中；②向试验容器中加入消化液，对标本粘液进行消化，使标本中粘液和杂质包裹的细菌充分暴露；③离心分离，倒掉上清液，获得浓集的标本；在获得浓集的标本后再进行增殖或分离培养。增殖或分离培养阶段的步骤为：④取已经浓集的标本少部分制成浓菌液；⑤将浓菌液接种于固体培养基例如罗氏培养基上进行增殖或分离培养，一般需在37℃培养箱中培养1月左右，把单个细菌培养成细菌菌落；在获得细菌菌落后再进入药敏检验阶段。药敏检验阶段的步骤为：⑥取少量的细菌菌落，一般是取1――3个细菌菌落，将其溶解分散制成浓菌液；⑦将浓菌液接种于固体培养基例如琼脂培养基表面上；⑧在固体培养基表面上贴上药物纸片；⑨放入37℃培养箱中培养1个月左右，观察药物抑菌圈，确定结核分枝杆菌对药物的敏感性。现有的纸片检验法的优点是操作方便、设备简单、投资小；但其存在以下缺点：⑴整个检验所需的时间太长：增殖或分离培养阶段需要1个月左右，药敏检验阶段大约需要1个月左右，整个试验过程大约需要2个月左右。如果在药敏试验得到结果后再使用药物治疗，就会严重影响治疗时机。而临床上在没有药敏试验的情况下使用药物治疗一是可能会造结核分枝杆菌耐药的严重后果；二是对感染耐药性结核分枝杆菌的结核病患者很难达到好的治疗效果。⑵不安全。整个试验需要两次人工接种，由于结核分枝杆菌具有传染性，这样对操作人员形成安全隐患，对环境形成污染隐患。 现有的浓度检验法，其在增殖培养阶段采用固体培养基，其标本前处理、增殖或分离培养二个阶段的步骤与现有的纸片检验法相同，但药敏检验阶段的步骤与现有的纸片检验法不同，具体为：从固体培养基上取增殖或分离培养获得的细菌菌落，一般是取1个或数个细菌菌落，→→将其溶解分散制成菌悬液→→将菌悬液倒入按不同的药物和不同的浓度配制成的多个试验容器中，制成对比试验标本→→观察检测试验容器中细菌生长情况，确定结核分枝杆菌对药物的敏感性。这种检验方法的优点是设备简单、投资小；但其存在以下缺点：⑴所需的时间长。增殖或分离培养阶段的方法和步骤与现有的纸片检验法的方法和步骤相同，因此，仅增殖或分离培养阶段所需的时间就需要1个月左右；⑵操作麻烦、不安全且容易造成错误的检验结果。由于需要配制多个试验容器，配制过程很麻烦且不安全，对操作人员形成安全隐患，对环境也形成污染隐患；在配制多个试验容器过程中比较容易被其他细菌污染，这样就可能造成错误的检验结果。 此外，还有利用仪器鉴定药物敏感性的方法，例如BACTEC —TB460系统及BACTEC 960系统，其优点是操作简单，试验过程时间短，平均检出时间为14.4天,最快10天左右。但其存在的主要缺点是仪器设备的价位高，投资大；使用成本高，一是仪器设备的使用成本高，二是需要多个对比试验标本，试剂的成本较高，其费用较大，一般医院难以承受，难以推广普及。 从上面详细分析现有的结核分枝杆菌药敏试验方法可以看出，现有的纸片检验法和浓度检验法存在以下缺点：（1）整个检验过程所需的时间长。（2）操作麻烦。（3）不安全。（4）容易出现误检。而利用仪器鉴定药物敏感性的方法投资大，使用成本高，难以推广普及。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种能缩短结核分支枝杆菌药敏试验过程所需时间的结核分支枝杆菌药敏指示剂的使用方法。 为实现上述目的，本专利技术结核分支枝杆菌药敏指示剂的使用方法，其特征在于，包括以下步骤 （1）对提供的标本进行前处理，制成浓集标本； （2）向浓集标本中加入液体增菌培养基，制成液态增菌培养标本，增菌培养0～7天； （3）将固体培养基加温熔化，制成液态的固体培养基，然后将其温度降至与上述液态增菌培养标本相应的培养温度； 所述的固体培养基具有50℃～95℃的熔化温度， 25℃～45℃的凝固温度； 所述的固体培养基包括有琼脂或琼脂糖，以及营养物质； （4）将液态增菌培养标本与液态的固体培养基混合，制成液态药敏试验标本； （5）将液态药敏试验标本凝固，制成带有药敏纸片的固态药敏试验标本； （6）将固态药敏试验标本培养5～15天； （7）通过指示剂指示观察药物抑菌圈； 所述的指示剂包括亚碲酸盐，或亚碲酸盐和尿素；  所述指示剂亚碲酸盐是在完成将固态药敏试验标本培养5～15天后，向固态药敏试验标本中滴入；尿素是在固体培养基中加入。 由于本专利技术在固体培养基中加入指示剂尿素，结核分枝杆菌会产生尿素酶分解尿素,使固态药检试验标本呈粉红色或淡黄色，通过观察固态药敏试验标本的颜色，初步判断固态药敏试验标本中结核分枝杆菌生长情况，在固态药敏试验标本呈粉红色或淡黄色后，说明固态药敏试验标本中的结核分枝杆菌数量达到了形成抑菌圈需要的数量，滴入亚碲酸盐指示剂，在2到48小时内即能形成明显的抑菌圈，因此，利用本专利技术做结核分枝杆菌药敏试验，与现有的纸片检验法和浓度检验法相比，缩短了结核分支枝杆菌药敏试验过程所需时间。 由于在进行结核分枝杆菌药敏试验过程中，本专利技术指示剂的使用方法是指示剂尿素加入到固体培养基中的，而指示剂亚碲酸盐滴在固态药敏试验标本的上表面，因此使用安全方便。 附图说明 下面结合附图和实施例对本专利技术结核分支枝杆菌药敏指示剂的使用方法作进一步说明 图1所示为利用本专利技术进行结核分枝杆菌药敏试验的加热恒温机俯视图示意图。 图2为图1所示加热恒温机的A—A剖视图示意图。 图3所示为利用本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种结核分支枝杆菌药敏指示剂的使用方法，其特征在于，包括以下步骤（1）对提供的标本进行前处理，制成浓集标本；（2）向浓集标本中加入液体增菌培养基，制成液态增菌培养标本，增菌培养0～7天；（3）将固体培养基加温熔化，制成液态的固体培养基，然后将其温度降至与上述液态增菌培养标本相应的培养温度；所述的固体培养基具有50℃～95℃的熔化温度， 25℃～45℃的凝固温度；所述的固体培养基包括有琼脂或琼脂糖，以及营养物质；（4）将液态增菌培养标本与液态的固体培养基混合，制成液态药敏试验标本；（5）将液态药敏试验标本凝固，制成带有药敏纸片的固态药敏试验标本；（6）将固态药敏试验标本培养5～15天；（7）通过指示剂指示观察药物抑菌圈；所述的指示剂包括亚碲酸盐，或亚碲酸盐和尿素； 所述指示剂亚碲酸盐是在完成将固态药敏试验标本培养5～15天后，向固态药敏试验标本中滴入；尿素是在固体培养基中加入。

【技术特征摘要】
2010.06.02 CN 201010188846.41.一种结核分支枝杆菌药敏指示剂的使用方法，其特征在于，包括以下步骤
（1）对提供的标本进行前处理，制成浓集标本；
（2）向浓集标本中加入液体增菌培养基，制成液态增菌培养标本，增菌培养0～7天；
（3）将固体培养基加温熔化，制成液态的固体培养基，然后将其温度降至与上述液态增菌培养标本相应的培养温度；
所述的固体培养基具有50℃～95℃的熔化温度， 25℃～45...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭钧，
申请(专利权)人：湖南省天骑医学新技术有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43