一种优化百子莲胚性愈伤组织玻璃化超低温保存效果的方法技术

本发明专利技术公开了一种优化百子莲胚性愈伤组织玻璃化超低温保存效果的方法，为采用含有碳纳米材料的玻璃化溶液处理大花蕙兰类原球茎以提高其保存效果，具体包括：预培养、装载液处理、玻璃化溶液处理和液氮保存步骤，其中所述玻璃化溶液含有0.1~0.5g/L石墨烯量子点。本发明专利技术中公开的方法对百子莲胚性愈伤组织的保存效果优化显著，通过添加石墨烯量子点作为外源物质对植物玻璃化超低温保存起到促进作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物或其局部的保存领域，具体涉及一种优化百子莲胚性愈伤组织玻璃化超低温保存效果的方法。
技术介绍
超低温保存是上世纪70年代发展起来的一项现代种质资源离体保存技术。通常在液氮中保存，被保存材料细胞内的物质代谢和生长活动几乎完全停止，处在相对稳定的生物学状态，达到长期保存种质的目的，超低温保存是目前唯一不需要连续继代的中长期保存方式。玻璃化法超低温保存是将细胞或组织置于由一定比例的渗透性和非渗透性保护剂组成的玻璃化溶液中，使材料及其玻璃化溶液在足够快的降温速率下固化成非结晶的玻璃化态，并以这种玻璃态在低温下保存。玻璃化法因操作简单快捷，成本低，适宜保存种类广泛，保存材料遗传性稳定，保存效果好等优点，是近十年来用于优良种质资源中长期保存的首选方法。 百子莲别名蓝百合、非洲百合，为百子莲科百子莲属多年生植物，原产于非洲南部。因其植株挺拔，叶形秀美、叶色浓绿，花量大、色彩鲜艳而备受人们的喜爱，在国外已成为常见的观赏花卉，多用于庭院栽培和切花生产；此外，百子莲还具有固沙护坡的生态作用以及镇痛等药用。我国引入百子莲的时间不长(2000年)，且在上海的结实率低，多依赖于国外进口种子繁殖，因此，通过体细胞胚胎发生的离体快速繁殖和百子莲种质资源的保存对百子莲优质种苗的需求至关重要。相关研究建立了百子莲胚性愈伤组织超低温保存体系，保存后细胞的相对存活率达到了56.94％，但仍不足以满足生产与科研的需求。
技术实现思路
鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种新的优化百子莲胚性愈伤组织玻璃化超低温保存效果的方法，以克服现有技术中植物及其组织中长期保存难以实现，以及超低温保存的植物或其组织恢复生长率低的缺点。 为了实现上述目的或者其他目的，本专利技术是通过以下技术方案实现的。 一种优化百子莲胚性愈伤组织玻璃化超低温保存效果的方法，采用玻璃化超低温保存的方法对百子莲胚性愈伤组织进行保存，具体步骤如下： 1)预培养：将百子莲胚性愈伤组织置于预培养基上，在0～10℃下预培养1～4天； 2)装载液处理：室温下，将百子莲胚性愈伤组织在装载液中浸泡处理40～60分钟后移除装载液； 3)玻璃化溶液处理：在0～25℃下使用玻璃化溶液浸泡脱水处理百子莲胚性愈伤组织40～60分钟； 4)液氮保存：保持百子莲胚性愈伤组织被玻璃化溶液浸泡的状态，并将其置于液氮中 保存； 所述玻璃化溶液为含有0.1～0.5g/L石墨烯量子点的玻璃化冷冻保护液。 本专利技术中所述MS培养液含有1900mg/L KNO3，1650mg/L NH4NO3，170mg/L KH2PO4，370mg/L MgSO4·7H2O，440mg/L CaCl2·2H2O，37.3mg/L Na2-EDTA，27.8mg/L FeSO4·7H2O，100mg/L肌醇，0.5mg/L烟酸，0.5mg/L盐酸吡哆醇，0.1mg/L盐酸硫胺素，2mg/L甘氨酸，0.83mg/L KI，6.2mg/L H3BO3，22.3mg/L MnSO4·4H2O，8.6mg/L ZnSO4·7H2O，0.25mg/L Na2MoO4·2H2O，0.025mg/L CuSO4·5H2O，0.025mg/L CoCl2·6H2O，余量为水，所述MS培养液的pH为5.8。 优选地，所述预培养基为含有0.4～0.8mol/L蔗糖的MS固体培养基。 优选地，所述预培养基为含有0.5mol/L蔗糖的MS固体培养基。 优选地，所述MS固体培养基含有1900mg/L KNO3，1650mg/L NH4NO3，170mg/L KH2PO4，370mg/L MgSO4·7H2O，440mg/L CaCl2·2H2O，37.3mg/L Na2-EDTA，27.8mg/L FeSO4·7H2O，100mg/L肌醇，0.5mg/L烟酸，0.5mg/L盐酸吡哆醇，0.1mg/L盐酸硫胺素，2mg/L甘氨酸，0.83mg/L KI，6.2mg/L H3BO3，22.3mg/L MnSO4·4H2O，8.6mg/L ZnSO4·7H2O，0.25mg/L Na2MoO4·2H2O，0.025mg/L CuSO4·5H2O，0.025mg/L CoCl2·6H2O，30g/L蔗糖，10g/L琼脂粉，余量为水，所述MS固体培养基的pH为5.8。 优选地，上述步骤1)中所述百子莲胚性愈伤组织为在预培养基上培养的方法为：将百子莲胚性愈伤组织在4℃下置于预培养基上1～4天。 优选地，上述步骤1)中所述百子莲胚性愈伤组织为在预培养基上培养的方法为：将百子莲胚性愈伤组织在4℃下置于预培养基上2天。 优选地，所述装载液为含有1～2mol/L丙三醇、0.3～0.5mol/L蔗糖和5～10mmol/L KNO3的MS培养液。 优选地，所述装载液为含有2mol/L丙三醇、0.4mol/L蔗糖和10mmol/L KNO3的MS培养液。 优选地，上述步骤2)中，室温下，将百子莲胚性愈伤组织在装载液中浸泡处理60分钟后移除装载液； 优选地，上述步骤3)中，在0℃下使用玻璃化溶液浸泡脱水处理百子莲胚性愈伤组织40分钟。 优选地，所述玻璃化溶液为含有300g/L丙三醇，150g/L乙二醇，150g/L二甲基亚砜、0.4mol/L蔗糖和0.1～0.5g/L石墨烯量子点的MS培养液。 优选地，所述玻璃化溶液为含有300g/L丙三醇，150g/L乙二醇，150g/L二甲基亚砜、0.4mol/L蔗糖和0.1～0.3g/L石墨烯量子点的MS培养液。 更优选地，所述玻璃化溶液为含有300g/L丙三醇，150g/L乙二醇，150g/L二甲基亚砜、0.4mol/L蔗糖和0.1g/L石墨烯量子点的MS培养液；或所述玻璃化溶液为含有300g/L丙三醇，150g/L乙二醇，150g/L二甲基亚砜、0.4mol/L蔗糖和0.3g/L石墨烯量子点的MS培养液。 一种百子莲胚性愈伤组织的解冻及再培养方法，所述百子莲胚性愈伤组织为采用如上述所述方法保存的百子莲胚性愈伤组织，所述百子莲胚性愈伤组织的解冻本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种优化百子莲胚性愈伤组织玻璃化超低温保存效果的方法，其特征在于，采用玻璃化超低温保存的方法对百子莲胚性愈伤组织进行保存，具体步骤如下：1)预培养：将百子莲胚性愈伤组织置于预培养基上，在0～10℃下预培养1～4天；2)装载液处理：室温下，将百子莲胚性愈伤组织在装载液中浸泡处理40～60分钟后移除装载液；3)玻璃化溶液处理：在0～25℃下使用玻璃化溶液浸泡脱水处理百子莲胚性愈伤组织40～60分钟；4)液氮保存：保持百子莲胚性愈伤组织浸泡在玻璃化溶液的状态，并将其置于液氮中保存；所述玻璃化溶液为含有0.1～0.5g/L石墨烯量子点的玻璃化冷冻保护液。

【技术特征摘要】
1.一种优化百子莲胚性愈伤组织玻璃化超低温保存效果的方法，其特征在于，采用玻璃化
超低温保存的方法对百子莲胚性愈伤组织进行保存，具体步骤如下：
1)预培养：将百子莲胚性愈伤组织置于预培养基上，在0～10℃下预培养1～4天；
2)装载液处理：室温下，将百子莲胚性愈伤组织在装载液中浸泡处理40～60分钟后移
除装载液；
3)玻璃化溶液处理：在0～25℃下使用玻璃化溶液浸泡脱水处理百子莲胚性愈伤组织
40～60分钟；
4)液氮保存：保持百子莲胚性愈伤组织浸泡在玻璃化溶液的状态，并将其置于液氮中
保存；
所述玻璃化溶液为含有0.1～0.5g/L石墨烯量子点的玻璃化冷冻保护液。
2.如权利要求1所述优化百子莲胚性愈伤组织玻璃化超低温保存效果的方法，其特征在
于，所述百子莲胚性愈伤组织预培养基为含有0.4～0.8mol/L蔗糖的MS固体培养基。
3.如权利要求1所述优化百子莲胚性愈伤组织玻璃化超低温保存效果的方法，其特征在
于，所述装载液为含有1～2mol/L丙三醇、0.3～0.5mol/L蔗糖和5～10mmol/L KNO3的
MS培养液。
4.如权利要求1所述优化百子莲胚...

【专利技术属性】
技术研发人员：申晓辉，陈冠群，任丽，张洁，张琰，张荻，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：上海;31