双光源照明金标免疫层析试纸检测分析方法技术

本发明专利技术公开了一种双光源照明金标免疫层析试纸检测分析方法。由于试纸条的检测线只在特定的波长区域有吸收(吸收峰的波长范围在520nm到600nm之间)所以当用非吸收波长的光线照射时，在本底和检测线区域有相同程度的反射。本发明专利技术采用两种不同波长的光对试纸条分别进行照射，各自采集图像后进行差值的方式来确定本底区域。利用双光源折射方法去除本底区域，检测精度高，同时省去了复杂的图像处理区域提取的过程，具有计算方式简单，运算量小，可在低速处理器上运行的优点，大大降低检测仪器成本。同时利于检测仪器的小型化和便携性设计。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种。由于试纸条的检测线只在特定的波长区域有吸收(吸收峰的波长范围在520nm到600nm之间)所以当用非吸收波长的光线照射时，在本底和检测线区域有相同程度的反射。本专利技术采用两种不同波长的光对试纸条分别进行照射，各自采集图像后进行差值的方式来确定本底区域。利用双光源折射方法去除本底区域，检测精度高，同时省去了复杂的图像处理区域提取的过程，具有计算方式简单，运算量小，可在低速处理器上运行的优点，大大降低检测仪器成本。同时利于检测仪器的小型化和便携性设计。【专利说明】
本专利技术涉及胶体金试纸条定量分析领域，具体涉及一种。
技术介绍
免疫胶体金标记技术(immunogoldlabeling technique, ILT)是 19 世纪 80 年代初期继酶免疫标记、荧光免疫标记、放射性同位素免疫标记三大标记技术之后，发展起来的新型固相标记免疫测定技术。具有简便、迅速、准确、特异性强、敏度高、无污染、假阳性率低等的优势。胶体金免疫层析法的基本原理是:借助毛细管虹吸作用，使样品与喷在玻璃纤维上的胶体金标记物混合在一起在硝酸纤维膜上移动，若样品中含有抗原(或抗体)，与胶体金标记的抗体(或抗原)结合，扩散至膜上检测区再与未标记的抗体(或抗原)结合，形成金标抗原抗体复合物，滞留在检测线上并显色，可得到直观的检测结果。 胶体金试纸条上一般有两条线，检测线(简称T线)和对照线(简称C线)。T线上一般包被的是待测物的另一特异性抗体，而C线上一般包被的是金标结合垫上胶体金标记过的受体的抗体。C线用于检测此次测试是否有效，如果线上未观察到颜色即胶体金的颇色红色或紫色，则表示此次测试无效，线上的结果不可取，无意义如果线上观察到颜色，则根据T线上的颜色来判定结果。 胶体金免疫层析技术主要应用在需要定性检测的场合。当待检溶液中样本的浓度超过一定的范围时，会出现比较明显的颜色变化，反之则没有。该技术特别适用在疾病定性监测当中，分析血清、尿液中有没有异常升高的物质，例如怀孕时尿液中HCG的含量等。这种方法简单以是否超过正常参考值上限为阳性界限，检测结果为是或者不是这种二值关系O 随着生产工艺的进步，胶体金试纸条中的NC膜的质量控制越来越严格，很多专业的厂商(如Kinma-tic Automat1n公司等)提供精密的加液、切割和组装器材，而且还提供自动化全套的生产流水线，因此在执行严格质量控制的条件下已能生产出性质基本一致的免疫胶体金金渗滤试剂盒和胶体金免疫层析测试条。基本保证了每次检测时加入进去的样本会和金标结合物混合在一起沿着NC膜上推进的均一性和速度的一致性，使根据T线的颜色深浅来判读样本的浓度称为可能。 肉眼判读主要是和标准比色卡进行比对，具有检测速度慢，自动化程度低的明显缺点。而且检测人员的主观性大，无法保证检测结果一直安全有效，误差率大。利用设备进行定量分析的方法主要有:光敏电阻测量方案、反射光纤传感器测量反射光强方案、图像传感器采集图像方案。利用图像传感器采集图像信号进行分析处理，是免疫层析检测设备中近年来非常流行的方法。CCD和CMOS是现在普遍采用的两种半导体图像传感器，它们具有很快速的响应时间，很高的采样精度，而且采样时受到的干扰较小，可以很好的保证采集图像的质量。利用图像处理方法标定T线区域，然后检测该区域的灰度，利用灰度值反推样品溶液的浓度是目前的主流方法。 在利用图像法进行分析时，由于测定样品中存在核酸、蛋白质、细胞和组织碎片的干扰；此外还有生化反应的偶然性的影响，图像质量会受到一些干扰。另外由于加入样品液体积不同、温度湿度不同，以及不同光照条件、不同试纸条质量的区别和灰尘污染等原因，试纸条上的待测区域的形状会受到较大影响，不会是标准的矩形形状，经常会有破损的区域出现，同时边缘部分也会影响浓度结果的判断。为了准确提取反应结果的灰度值，同时减少计算量，免去复杂的图像处理算法，使分析过程可以在小型处理器上完成，便于判读仪器的小型化，需要一种快速简便的计算方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种，可以快速检测出待检线的灰度区域，去除图像中的本底区域。可以排除加入样品液体积不同、温湿度不同、有缺陷试纸条等干扰的情况，具有计算方式简单，运算量小，可适用于低速处理器的优点。 本专利技术一种，本专利技术采用两种不同波长的光对试纸条分别进行照射，并各自采集图像。其中一种波长是试纸条检测线的吸收波长，另外一种是试纸条检测线的非吸收波长。由于试纸条的检测线只在特定的波长区域有吸收(吸收峰的波长范围在520nm到600nm之间)所以当用非吸收波长的光线照射时，在本底和检测线区域有相同程度的反射。而用吸收波长的光线照射时，在本底区域进行反射，而在检测线区域有较大吸收。当对在不同条件下采集到的两幅图像进行差值时，就可以把本底区域去除掉，吸收现象明显的地方就是检测线的灰度区域。对该区域的灰度值进行判读，就可以反推出样品液的浓度。 两组光源的位置要接近，排除照射角度的影响，使不同波长的反射光在试纸条上不同位置的分布一致。比较典型的是选用高亮度发光二极管来做为光源，可以降低成本。高亮度发光二极管具有输出功率稳定、能耗低、体积小、亮度高、寿命长的优点。而且高亮度发光二极管具有多种型号，几乎覆盖可见区任意波段，而且近紫外发光二极管也已经投放市场，这就可以方便的选择发光二级管的型号来适应各种吸收波段。 利用双光源折射方法去除本底区域，检测精度高，同时省去了复杂的图像处理区域提取的过程，具有计算方式简单，运算量小，可在低速处理器上运行的优点，大大降低检测仪器成本。同时利于检测仪器的小型化和便携性设计。 【专利附图】【附图说明】 附图是双光源照射方法示意图。 【具体实施方式】 下面结合附图说一下具体的实施方式。附图是双光源照射方法示意图。图中I是需要检测的胶体金试纸条，上面有两条测试线，2是图像采集设备，3和4是两组光源。光源(3)和光源(4)并列放置，置于胶体金试纸条(I)的斜上方，保证两组光源相对与试纸条 (I)的位置基本一致，排除照射角度的影响。图像采集设备(2)置于胶体金试纸条的上方，可以采集试纸条反应后的图像，由聚焦透镜和图像采集芯片组成。光源⑶和⑷采用倾斜照射的方式，避免阻碍图像采集设备(2)采集胶体金试纸条的图像信息。光源(3)的波长在试纸条(I)测试线的吸收波长范围以内，光源(4)的波长远离试纸条(I)测试线的吸收波长。 检测开始时，首先打开光源(4)，关闭光源(3)，图像采集设备(2)采集第一幅图像Plo然后关闭光源(4)，打开光源(3)，图像采集设备(2)采集第二幅图像P2。图像Pl是试纸条在远离测试线吸收波长的光线照射下的图像，因为测试线没有吸收现象，只测得了本底的光强分布。图像P2是试纸条在测试线吸收波长范围内的光线照射下的图像，测试线有明显的吸收现象。因为本底为白色，对任意可见光波长的光线反射吸收现象基本一致。下一步对图像Pl和P2进行数据差值处理时，数值变化较大的区域就是测试线区域，然后对图像P2测试线区域的灰度值进行平均，就可以得到检测结果。 利用双光源折射方法去除本底区域，检测精度高，同时省去了复杂的图像处理区域提取的过程，具有计本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种双光源照明金标免疫层析试纸检测分析方法，本专利技术采用两组光线对试纸条分别进行照射，各自采集图像后进行差值的方式来确定本底区域；其特征在于：所采用的两组光线的中心波长不一样，一个在胶体金试纸条检测线的吸收波长范围以内，另外一个远离试纸条检测线的吸收波长。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：叶青，梅剑春，田建国，
申请(专利权)人：南开大学，
类型：发明
国别省市：天津;12