本发明专利技术公开了一种含融合蛋白A1D3R1的结核病亚单位疫苗。所述结核病亚单位疫苗，其特征在于，含有融合蛋白A1D3R1，其浓度为0.1mg/ml至1mg/ml，所述融合蛋白A1D3R1其编码基因为Rv3407、PhoY2、Ag85A、Rv2626c以及RpfB基因按照Rv3407-PhoY2-Ag85A-Rv2626c-RpfB的顺序串联。所述疫苗佐剂，其特征在于，所述疫苗佐剂为油包水样溶液，含有0.4mg/ml至0.6mg/ml的单磷酰脂质A、0.4mg/ml至0.6mg/ml的海藻糖、体积分数2％至8％的角鲨烯油，体积分数2％至8％的司盘85以及体积分数0.2至0.8的吐温-80。本发明专利技术提供的疫苗及疫苗佐剂，免疫应答效果好，接种风险低。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种含融合蛋白A1D3R1的结核病亚单位疫苗。所述结核病亚单位疫苗，其特征在于，含有融合蛋白A1D3R1，其浓度为0.1mg/ml至1mg/ml，所述融合蛋白A1D3R1其编码基因为Rv3407、PhoY2、Ag85A、Rv2626c以及RpfB基因按照Rv3407-PhoY2-Ag85A-Rv2626c-RpfB的顺序串联。所述疫苗佐剂，其特征在于，所述疫苗佐剂为油包水样溶液，含有0.4mg/ml至0.6mg/ml的单磷酰脂质A、0.4mg/ml至0.6mg/ml的海藻糖、体积分数2％至8％的角鲨烯油，体积分数2％至8％的司盘85以及体积分数0.2至0.8的吐温-80。本专利技术提供的疫苗及疫苗佐剂，免疫应答效果好，接种风险低。【专利说明】一种含融合蛋白A1D3R1的结核病亚单位疫苗
本专利技术属于生物医药领域，更具体地，涉及一种含融合蛋白A1D3R1的结核病亚单位疫苗。
技术介绍
作为目前全球范围唯一预防结核病的疫苗，卡介苗(BCG)能够有效的预防婴幼儿粟粒样结核病及结核性脑膜炎的发生；但是，对于预防成人肺结核病的发生、发展的效果有限。因此，急需发展一种合适的BCG初免后的增强疫苗，以提高其对成人结核病的预防效果O 除此而外，BCG不适用于免疫力低下的人群，如HIV感染等免疫缺陷人群接种BCG后，反而引起死亡率的升高；BCG初免后，再次注射，增强免疫的效果有限，临床上推荐仅免疫一次。因此，结核病亚单位疫苗因为成分明确、安全稳定，便于生产，在结核病疫苗研制上受到广泛重视。但是，目前已知的结核病亚单位疫苗仍然存在免疫应答效果不理想的问题。
技术实现思路
针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本专利技术提供了一种含融合蛋白A1D3R1的结核病亚单位疫苗，其目的在于通过选择抗原基因和融合顺序制造出融合蛋白，配合本专利技术提供的疫苗佐剂，由此解决现有的结核病疫苗，有接种风险，免疫应答效果不理想的技术问题。 为实现上述目的，按照本专利技术的一个方面，提供了一种结核病亚单位疫苗，含有融合蛋白A1D3R1，其浓度为0.lmg/ml至lmg/ml，所述融合蛋白A1D3R1其编码基因为Rv3407、PhoY2、Ag85A、Rv2626c 以及 RpfB 基因按照 Rv3407-PhoY2_Ag85A-Rv2626c-RpfB 的顺序串联。 优选地，所述结核病亚单位疫苗，其融合蛋白A1D3R1的序列为: (I)由SEQ ID N0.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；或 (2)与序列SEQ ID N0.1限定的氨基酸序列同源性在80%至100%编码相同功能蛋白质的氨基酸序列；或 (3) SEQ ID N0.1所示的氨基酸序列经增加、缺失或替换一个或多个氨基酸具有同等活性的由(I)衍生的蛋白。 优选地,所述结核病亚单位疫苗,还含有0.2mg/ml至0.3mg/ml的单磷酰脂质A、0.2mg/ml至0.3mg/ml的海藻糖、体积分数1%至4%的角S烯油、体积分数1%至4%的司盘85以及体积分数0.1%至0.4%的吐温-80，所述结核病亚单位疫苗为油包水样溶液。 优选地，所述结核病亚单位疫苗，其所述海藻糖为6，6’ - 二分枝菌酸。 按照本专利技术的另一方面，提供了一种疫苗佐剂，所述疫苗佐剂为油包水样溶液，含有0.4mg/ml至0.6mg/ml的单磷酰脂质A、0.4mg/ml至0.6mg/ml的海藻糖、体积分数2%至8 %的角鲨烯油，体积分数2 %至8 %的司盘85以及体积分数0.2 %至0.8 %的吐温-80。 优选地，所述疫苗佐剂，其所述海藻糖为6，6’ - 二分枝菌酸。 总体而言，通过本专利技术所构思的以上技术方案与现有技术相比，能够取得下列有益效果: 1.细胞免疫是抗结核病的重要组成，其中⑶4+Thl型细胞免疫应答作用尤为重要。本专利技术中以融合蛋白A1D3R1刺激人群产生的IFN-Y水平较个亚组分蛋白单独刺激后产生水平显著提高，且在感染人群中水平显著高于未感染人群，证实本专利技术提供的结核病亚单位疫苗所使用的融合蛋白A1D3R1是一种良好的Thl型抗原，具有良好的免疫应答效果; 2.本专利技术提供的亚单位疫苗，其产生免疫应答效果的融合蛋白A1D3R1，不存在致病的能力，因此相对于现有的结核病疫苗，本专利技术提供的亚单位疫苗接种风险大大降低。 3.本专利技术提供的免疫佐剂能诱导产生明显的以IFN-Y和TNF-α为主的Thl型细胞免疫应答，增强疫苗效果；同时，所包含的单磷酰脂质Α、海藻糖为6，6’-二分枝菌酸以及角鲨烯等组成成分已应用于人体，安全性高，价格低廉且制备简便。 【专利附图】【附图说明】 图1是实施例2融合蛋白A1D3R1及各亚组分蛋白纯化产物的Western-blotting鉴定; 图2是实施例9比较融合蛋白A1D3R1及亚组分蛋白分别刺激M.tb感染人群(rCM-ffBIA-positive)和 M.tb 未感染人群(rCM-WBIA-negative)产生的 IFN-Y 水平； 图3是实施例10亚单位疫苗A1D3R1/MT0免疫小鼠血清中特异性抗体水平； 图4是实施例10亚单位疫苗A1D3R1/MT0免疫小鼠脾细胞分泌A1D3R1特异性细胞因子TNF- α和IFN- Y的水平； 图5是实施例10亚单位疫苗A1D3R1/MT0免疫小鼠脾脏抗原特异性总IFN- Y分泌型T淋巴细胞； 图6是实施例11亚单位疫苗A1D3R1/MT0免疫小鼠抗M.tb H37Rv标准毒株经尾静脉感染后脏器荷菌量； 图7是实施例11M.tb H37Rv感染小鼠肺脏病理图。 【具体实施方式】 为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。此外，下面所描述的本专利技术各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。 本专利技术提供的结核病亚单位疫苗，其特征在于，含有融合蛋白A1D3R1，其浓度为 0.lmg/ml 至 lmg/ml,还含有 0.2mg/ml 至 0.3mg/ml 的单磷酰脂质 A、0.2mg/ml 至 0.3mg/ml的海藻糖、体积分数2%至8%的角鲨烯油、体积分数2%至8%的司盘85 (Span 85)以及体积分数0.2%至0.8%的吐温-80，为油包水样溶液。所述融合蛋白A1D3R1其编码基因为Rv3407、PhoY2、Ag85A、Rv2626c 以及 RpfB 基因按照 Rv3407-PhoY2_Ag85A-Rv2626c-RpfB 的顺序串联。所述海藻糖为人工合成的6，6’ - 二分枝菌酸。 所述融合蛋白A1D3R1的序列为: (I)由SEQ ID N0.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；或 (2)与序列SEQ ID N0.1限定的氨基酸序列同源性在80%至100%编码相同功能蛋白质的氨基酸序列；或 (3) SEQ ID N0.1所示的氨基酸序列经增加、缺失或替换一个或多个氨基酸具有同等活性的由(I)衍生的蛋白。 本专利技术提供的疫苗佐剂，命名为ΜΤ0，所述疫苗佐剂为油包水样溶液，含有0.4mg/ml至0.本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种结核病亚单位疫苗，其特征在于，含有融合蛋白A1D3R1，其浓度为0.1mg/ml至1mg/ml，所述融合蛋白A1D3R1其编码基因为Rv3407、PhoY2、Ag85A、Rv2626c以及RpfB基因按照Rv3407‑PhoY2‑Ag85A‑Rv2626c‑RpfB的顺序串联。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：范雄林，谭昆，
申请(专利权)人：华中科技大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42
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