从动物心管制备胶原蛋白肽的方法技术

本发明专利技术公开了一种从动物心管制备胶原蛋白肽的新型方法。所述方法包括如下步骤：包括新鲜动物心管的低温保持，切碎，浸泡漂洗，磨浆，酸浸提，离心，酶解，纳滤脱盐，除菌冷冻干燥等步骤。本发明专利技术的方法具有抽提效果好，所获得胶原蛋白肽具有纯度高、高活性和容易吸收等特点。本发明专利技术还提供了通过本发明专利技术方法所制备的胶原蛋白肽在制备药物、食品、保健品和化妆品的用途。本发明专利技术方法操作简单，生产成本低廉，适用于大规模工业化生产，实现了从动物心管中高效制备高活性胶原蛋白肽的目的。

【技术实现步骤摘要】
从动物心管制备胶原蛋白肽的方法
本专利技术涉及从动物心管中制备胶原蛋白肽的方法，属于蛋白质生物化学工程领域。
技术介绍
胶原蛋白(Collagen)又称胶原，是由三条肽链拧成的螺旋形纤维状蛋白质，是细胞外结缔组织最重要的水不溶性纤维蛋白，是构成细胞外基质的骨架，占人体蛋白质总量的25％-30％，是人体内含量最多的蛋白质。结缔组织除了含60～70％的水分外，胶原蛋白占了约20～30％，因为有高含量的胶原蛋白，结缔组织具有了一定的结构与机械力学性质，如张力强度、拉力、弹力等以达到支撑、保护的功能。原胶原是由三条α-肽链组成的纤维状蛋白,相互拧成三股螺旋状构型,长300nm,直径1.5nm。胶原蛋白，主要存在于人和动物的皮肤、骨骼、眼睛、牙齿、肌腱、内脏(包括心、胃、肠、膀胱、血管、肺、气管、脑等)部位，所有组织脏器都含有不同数量和种类的胶原蛋白，其功能是维持组织器官的形态和结构，也是修复各损伤组织的重要原料物质。人体胶原蛋白有28种，不同部位所含的胶原蛋白的类型也各不相同。不同类型的胶原蛋白定位于体内的特定组织，也有2-3种不同的胶原存在于同一组织中。血管中主要含有I型和III型胶原蛋白，血管属于上皮组织，其组成中胶原蛋白和硬弹性蛋白含量较高，保证了血管有一定的强度容纳血液，并有一定的渗透性来保证物质交换正常进行。胶原蛋白能维护血管弹性，防止血管破裂、栓塞。为了确保胶原蛋白原有构象，我们在低温和低酸碱度的条件下，使用动物心脏大血管，即心管生产富含III型胶原蛋白的产品，并使用酶解法制备胶原蛋白肽。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种从动物心管制备高活性胶原蛋白肽的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：所述包括如下步骤：动物心管的低温保持，切碎，浸泡漂洗，磨浆，酸抽提，离心，酶解，过滤，纳滤脱盐，除菌冷冻干燥步骤。在本专利技术的又一个方面，对所述动物心管的低温非变性处理包括快速低温冷冻处理；优选地，所述动物为哺乳动物，例如牛、猪、羊等哺乳动物。在本专利技术的又一个方面，利用酸抽提的方法从所述动物心管提取胶原蛋白，所述的酸为有机酸或无机酸，优选为醋酸。在本专利技术的又一个方面，提供了一种从动物心管制备高活性胶原蛋白肽的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：1)取冷冻动物心管，切碎后加入5-10倍体积的清水，用清水反复冲洗3次，去除血水，骨泥磨磨浆后，加入20-40倍体积的2-10％醋酸，搅拌浸提6-12小时，用14000转/离心，收集沉淀得胶原蛋白粗品；2)胶原蛋白粗品加3-5倍重量体积去离子水，搅拌混匀，调pH7-9.0，加入胶原蛋白粗品重量的0.1％胰蛋白酶，42℃保温水解6-8小时，得酶解胶原蛋白肽粗品；3)酶解胶原蛋白肽粗品用0.2微米的滤膜过滤，过滤液用截留分子量在400-500道尔顿的纳滤膜纳滤脱盐3-5次，再浓缩到含蛋白肽4-10％，上述的脱盐、浓缩步骤如下：先纳滤膜浓缩，然后加水稀释到原体积时再进行纳滤膜浓缩以达到脱盐的目的，反复3-5次；4)除菌过滤，冷冻干燥制备高活性的动物心管胶原蛋白肽冻干粉。在本专利技术的一个具体方面，提供了一种从动物心管制备高活性胶原蛋白肽的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：1)取冷冻动物心管，切碎，加5倍体积的清水，浸泡过夜，用清水反复冲洗3次，去除血水，骨泥磨磨浆后，加入20倍体积3％醋酸，搅拌浸提8小时，用14000转/分离心，收集沉淀得胶原蛋白粗品；2)沉淀加3-5倍重量体积去离子水，搅拌混匀，调pH8.6，加入胶原蛋白粗品重量的0.1％胰蛋白酶，42℃保温水解8小时，得酶解胶原蛋白肽粗品；3)酶解胶原蛋白肽粗品用0.2微米的滤膜过滤，过滤液用截留分子量在400-500道尔顿的纳滤膜纳滤脱盐3次，再浓缩到含蛋白肽4-10％，上述的脱盐、浓缩步骤如下：先纳滤膜浓缩，然后加水稀释到原体积时再进行纳滤膜浓缩以达到脱盐的目的，反复3次；4)除菌过滤，冷冻干燥制备高活性的动物心管胶原蛋白肽冻干粉。在本专利技术的另一个方面，提供了一种胶原蛋白肽产品，当胶原蛋白肽浓度为0.5mmol/mL时，其具有超过40％以上的ACE抑制率；且当胶原蛋白肽浓度为1mmol/mL时，其具有超过60％以上的ACE抑制率；和低于0.55mg/mLIC50。在本专利技术的又一个方面，提供了一种胶原蛋白肽产品，当胶原蛋白肽浓度为0.5mmol/mL时，其具有大于45％的ACE抑制率；且当胶原蛋白肽浓度为1mmol/mL时，其具有大于65％的ACE抑制率；和低于0.50mg/mLIC50。在本专利技术的另一个方面，提供了通过本专利技术方法制备的胶原蛋白制品的用途，所述的用途包括将所述的胶原蛋白用于预防和/或防治受试者老化的药物、食品、保健品或化妆品中的应用。其中，所述药物、食品、保健品或化妆品为口服制剂、外用制剂、吸入制剂、经鼻制剂、经直肠制剂、经皮制剂或注射制剂。本专利技术的方法操作简单，生产成本低廉，适用于大规模工业化生产，实现了从动物心管中高效制备胶原蛋白资源。离心和过滤所得到的滤液由于不含有任何有害物质，不会污染环境。本工艺几乎不产生固形废弃物，没有垃圾，无需专门进行垃圾处理。附图说明图1、从动物心管制备胶原蛋白肽工艺流程图。图2、马尿酸含量测定标准曲线。图3、不同胶原蛋白的ACE活性抑制效果。图4、不同胶原蛋白的IC50比较。图5、根据本专利技术方法所制备的牛、猪和羊心管胶原蛋白肽的冻干粉外部形状。具体实施方式为了提供对本专利技术的实质性理解，在下文中以不同的详细程度描述了本专利技术的某些方面、模式、实施方式、变型和特征。在实施本专利技术的过程中，使用了生物化学、蛋白质生物化学、医学、病理学、动物实验学的很多传统技术。这些技术是熟知的。在本专利技术的一个实施方式中,本专利技术提供了一种从动物心管制备高活性胶原蛋白肽的新型方法。所述方法包括如下步骤：包括动物心管的低温保持，切碎，浸泡漂洗，磨浆，酸抽提，离心，酶解，过滤，纳滤脱盐，除菌冷冻干燥等步骤(如图1所示)。术语“动物”是指动物学意义上的任何动物，优选为哺乳动物。所述哺乳动物可源自于任何种类的动物，包括陆生的或者水生的哺乳动物，本文的陆生哺乳动物包括但不限于人类、猩猩，猴、牛、水牛、野牛、猪、野猪、羊(例如羊羔、绵羊、山羊)、驴、鹿、骆驼、鼠类、马等，本文的水生哺乳动物包括但不限于鲸鱼、河马、海豹等。因此本文中的哺乳动物是指能够提供心管的一切哺乳动物，并且用该心管制备胶原蛋白。术语“一”，“一种”和“该”:除非内容清楚指明，否则本说明和所附的权利要求中使用的单数形式“一”，“一种”和“该”包括复数的引用对象。例如，所提及的“一种心管”包括两种不同动物心管或更多种动物心管的组合等。在本专利技术的又一实施方式中，提供了哺乳动物心管的非变性的低温保持方法。所述心管可以整块冷冻保存，也可以成数个大块甚至切碎保存。保存时可以不加任何添加剂或者添加添加剂以防止冻结变性。常用防止心管冻结变性的防护剂本文仅为举例但不限于例如糖类和/或糖醇类。本专利技术可以直接使用新鲜的心管组织也可以使用低温保持过的动物心管组织。术语“低温保持”包括“冷藏保持”和“冷冻保藏”两种方式。在另一个实施方式中，冷藏保持可在低于约10℃的温度下将所述肉与所述组合物一起温育，例如在0℃以上至约9℃之间，适合地在约1℃至约5本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从动物心管制备胶原蛋白肽的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：动物心管的低温保持，切碎，浸泡漂洗，磨浆，酸抽提，离心，酶解，纳滤脱盐，除菌冷冻干燥步骤。

【技术特征摘要】
2014.04.24 CN 201410169000.4;2014.06.18 CN 20141021.一种从动物心管制备胶原蛋白肽的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：动物心管的低温保持，切碎，浸泡漂洗，磨浆，醋酸抽提，离心，酶解，纳滤脱盐，除菌冷冻干燥步骤，所述纳滤脱盐包括将酶解胶原蛋白肽粗品用0.2微米的滤膜过滤，过滤液用截留分子量为400-500道尔顿的纳滤膜脱盐3-5次，再浓缩到含蛋白肽4-10％的步骤。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1)取冷冻动物心管，切碎后加入5-10倍体积的清水，用清水反复冲洗3次，去除血水，骨泥磨磨浆后，加入20-40倍体积的2-10％醋酸，搅拌浸提6-12小时，用14000转/分离心，收集沉淀得胶原蛋白粗品；2)胶原蛋白粗品加3-5倍重量体积去离子水，搅拌混匀，调pH7-9.0，加入胶原蛋白粗品重量的0.1％胰蛋白酶，42℃保温水解6-8小时，得酶解胶原蛋白肽粗品；3)酶解胶原蛋白肽粗品用0....

【专利技术属性】
技术研发人员：刘爽，邓小霞，庞玉，王子华，
申请(专利权)人：吉林省金梓源生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林;22