一种从海马提取短肽的方法技术

本发明专利技术涉及一种从海马提取短肽的方法，该方法包括：提取海马蛋白粗品、从海马蛋白粗品中提取海马短肽。本发明专利技术的短肽提取率高达70%；成本低、操作简单、反应条件温和且环境友好。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及，该方法包括：提取海马蛋白粗品、从海马蛋白粗品中提取海马短肽。本专利技术的短肽提取率高达70%；成本低、操作简单、反应条件温和且环境友好。【专利说明】
本专利技术涉及一种提取短肽的方法，更具体的说，涉及。
技术介绍
海马为海龙科动物，性温、味甘，是我国名贵的强壮补益中药材。中国历版药典收 藏的海马药材有5个品种：线纹海马、刺海马、大海马、三斑海马和小海马的干燥体，具有温 肾壮阳，散结消肿的功效。海马具有较高的营养价值，蛋白质含量高达70%，含有7种氨基 酸，七种7种为人体必需氨基酸；还含有大量的DHA，是前列腺和精子的主要物质基础；海马 含有丰富的磷脂与补益作用有关，海马中Mn、Zn含量高与补肾壮阳作用吻合，并富含Fe，与 其滋补肝肾补血生精作用相关。现代药理学研究证明，海马具有很多方面的药理作用。 短肽在胃肠道中消化吸收比蛋白质、游离氨基酸消化吸收均好，速度快，而且短肽 比蛋白质在肠胃滞留的时间短，胃下垂感与腹部涨满感频度低，对小肠吸收面积减少。短肽 在生命过程中所起的作用比氨基酸更加积极，人体内蛋白质合成分解代谢过程。作为蛋白 质补充方式，对健康人而言，主要是从膳食的蛋白质中获得各种短肽和L-氨基酸，提供体 内合成激素、酶、蛋白质。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供。 为实现本专利技术的目的，本专利技术的技术方案如下： -种从海马提取短肽的方法，该方法包括以下步骤： (1)提取海马蛋白粗品 1)将海马内脏除去，清洗干净，晒干粉碎备用； 2)将粉碎的海马放入15倍海马体积的5%的氯化钠溶液中，于3°C连续搅拌20? 50小时，用尼龙纱过滤，弃去滤液；滤渣用15倍海马体积的蒸馏水洗涤，重复三次，即得到 去除非蛋白的海马； 3)向步骤2)得到去除非蛋白的海马中加入海马质量10倍的蒸馏水和海马质量 3?8倍的异丙醇，在45°C下加热6分钟，以脱去脂肪； 4)回收含异丙醇的废液，并分馏回收用于3)的脱脂； 5)于脱脂后的海马中加入5倍蒸馏水，且在60?90°C加热处理10?60分钟，冷 却至60°C以下，每100克海马加5克酶酶解40?50小时； 6)将5)酶解后的物料离心，上层溶液中和至中性后，喷雾干燥得蛋白粗品。 分离出的沉淀加入到5)的物料中。 (2)从海马蛋白粗品中提取海马短肽 1)将由步骤（1)提取的海马蛋白粗品加入12倍海马蛋白粗品体积的水成pH值 7. 0?8. 0,在常温下搅拌20分钟； 2)用7500转/分的蝶式分离机分离，得到含有蛋白浆液和细纤维； 3)将含有蛋白的浆液在反应器中与粉状含量90-95%海马分离蛋白调至浓度为6% 的蛋白浆液； 4)采用色埋法和交联法将蛋白酶I、II固定，制成直径l-5mm的颗粒，成为固定化 酶，将其装入间歇或连续式反应器中，海马蛋白浆液以1-5倍床体积/小时流进反应器，反 应温度50-60°C，pH值控制在8-10,流出液为海马蛋白的水解液； 5)将海马蛋白水解液通过超滤膜过滤，膜下物为MW小于2000的海马短肽超滤液， 膜上物为丽大于2000的海马蛋白、海马肽的混合固形物； 6)将混合固形物返回海马蛋白浆液中重新调浆，继续水解； 7)将海马短肽超滤液通过大孔强酸性阳离子柱脱盐，脱盐后料液电解率为 l〇-20us/cm2 ； 8)脱盐后的料液浓缩至固形物9-11%，经活性炭脱色，炭液比为0.5-1:10，pH值为 4-7,温度为 30-70°C ; 9)脱色后的料液经瞬间高温灭菌喷雾干燥得出精制海马短肽。 在本专利技术的一优选实施例中，所述步骤（1)中的步骤5)中的酶为酸性蛋白酶、 AS. 1398蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、风味酶或中性蛋白酶中的一种或两种以上的混合 物。 本专利技术具有以下优点：1、短肤的提取率商达70% ; 2、本专利技术成本低、操作简单、反应条件温和且环境友好。 【具体实施方式】 实施例1 海马提取短肽的步骤 (1)提取海马蛋白粗品 1)将海马内脏除去，清洗干净，晒干粉碎备用； 2)将粉碎的海马放入15倍海马体积的5%的氯化钠溶液中，于3°C连续搅拌30小 时，用尼龙纱过滤，弃去滤液；滤渣用15倍海马体积的蒸馏水洗涤，重复三次，即得到去除 非蛋白的海马； 3)向步骤2)得到去除非蛋白的海马中加入海马质量10倍的蒸馏水和海马质量5 倍的异丙醇，在45°C下加热6分钟，以脱去脂肪； 4)回收含异丙醇的废液，并分馏回收用于3)的脱脂； 5)于脱脂后的海马中加入5倍蒸馏水，且在70°C加热处理20分钟，冷却至60°C以 下，每100克海马加5克AS. 1398蛋白酶酶解45小时； 6)将5)酶解后的物料离心，上层溶液中和至中性后，喷雾干燥得蛋白粗品。 分离出的沉淀加入到5)的物料中。 (2)从海马蛋白粗品中提取海马短肽 1)将由步骤（1)提取的海马蛋白粗品加入12倍海马蛋白粗品体积的水成pH值 7. 0?8. 0,在常温下搅拌20分钟； 2)用7500转/分的蝶式分离机分离，得到含有蛋白浆液和细纤维； 3)将含有蛋白的浆液在反应器中与粉状含量90-95%海马分离蛋白调至浓度为6% 的蛋白浆液； 4)采用色埋法和交联法将蛋白酶I、II固定，制成直径l_5mm的颗粒，成为固定化 酶，将其装入间歇或连续式反应器中，海马蛋白浆液以3倍床体积/小时流进反应器，反应 温度50-60°C，pH值控制在8-10,流出液为海马蛋白的水解液； 5)将海马蛋白水解液通过超滤膜(截留MW2000以上)过滤，膜下物为MW小于2000 的海马短肽超滤液，膜上物为海马蛋白、海马肽(MW大于2000)的混合固形物； 6)将混合固形物返回海马蛋白浆液中重新调浆，继续水解； 7)将海马短肽超滤液通过大孔强酸性阳离子柱脱盐，脱盐后料液电解率为 l〇-20us/cm2 ； 8)脱盐后的料液浓缩至固形物9-11%，经活性炭脱色，炭液比为0.5-1:10，pH值为 4-7,温度为40°C ; 9)脱色后的料液经瞬间高温灭菌（135°C 5s)喷雾干燥得出精制海马短肽。 实施例2 海马提取短肽的步骤 (1)提取海马蛋白粗品 1)将海马内脏除去，清洗干净，晒干粉碎备用； 2)将粉碎的海马放入15倍海马体积的5%的氯化钠溶液中，于3°C连续搅拌40小 时，用尼龙纱过滤，弃去滤液；滤渣用15倍海马体积的蒸馏水洗涤，重复三次，即得到去除 非蛋白的海马； 3)向步骤2)得到去除非蛋白的海马中加入海马质量10倍的蒸馏水和海马质量5 倍的异丙醇，在45°C下加热6分钟，以脱去脂肪； 4)回收含异丙醇的废液，并分馏回收用于3)的脱脂； 5)于脱脂后的海马中加入5倍蒸馏水，且在80°C加热处理20分钟，冷却至60°C以 下，每100克海马加5克AS. 1398蛋白酶和风味酶，两者以1:1 (w/w)组成的复合酶，酶解 45小时； 6)将5)酶解后的物料离心，上层溶液中和至中性后，喷雾干燥得蛋白粗品。 分离出的沉淀加入到5)的物料中。 (本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从海马提取短肽的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：（1）提取海马蛋白粗品1）将海马内脏除去，清洗干净，晒干粉碎备用；2）将粉碎的海马放入15倍海马体积的5%的氯化钠溶液中，于3℃连续搅拌20～50小时，用尼龙纱过滤，弃去滤液；滤渣用15倍海马体积的蒸馏水洗涤，重复三次，即得到去除非蛋白的海马；3）向步骤2）得到去除非蛋白的海马中加入海马质量10倍的蒸馏水和海马质量3～8倍的异丙醇，在45℃下加热6分钟，以脱去脂肪；4）回收含异丙醇的废液，并分馏回收用于3）的脱脂；5）于脱脂后的海马中加入5倍蒸馏水，且在60～90℃加热处理10～60分钟，冷却至60℃以下，每100克海马加5克酶酶解40～50小时；6）将5）酶解后的物料离心，上层溶液中和至中性后，喷雾干燥得蛋白粗品。分离出的沉淀加入到5）的物料中。（2）从海马蛋白粗品中提取海马短肽1）将由步骤（1）提取的海马蛋白粗品加入12倍海马蛋白粗品体积的水成pH值7.0～8.0，在常温下搅拌20分钟；2）用7500转/分的蝶式分离机分离，得到含有蛋白浆液和细纤维；3）将含有蛋白的浆液在反应器中与粉状含量90‑95%海马分离蛋白调至浓度为6%的蛋白浆液；4）采用色埋法和交联法将蛋白酶Ⅰ、Ⅱ固定，制成直径1‑5mm的颗粒，成为固定化酶，将其装入间歇或连续式反应器中，海马蛋白浆液以1‑5倍床体积/小时流进反应器，反应温度50‑60℃，pH值控制在8‑10，流出液为海马蛋白的水解液；5）将海马蛋白水解液通过超滤膜过滤，膜下物为MW小于2000的海马短肽超滤液，膜上物为MW大于2000的海马蛋白、海马肽的混合固形物；6）将混合固形物返回海马蛋白浆液中重新调浆，继续水解；7）将海马短肽超滤液通过大孔强酸性阳离子柱脱盐，脱盐后料液电解率为10‑20us/cm2；8）脱盐后的料液浓缩至固形物9‑11%，经活性炭脱色，炭液比为0.5‑1:10，pH值为4‑7，温度为30‑70℃；9）脱色后的料液经瞬间高温灭菌喷雾干燥得出精制海马短肽。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴文惠，吴德新，包斌，陈佳捷，严婷，苏同伟，孔婷，
申请(专利权)人：上海海洋大学，中渔福建海洋生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31